【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?目前,體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí)了許多miRNA和靶基因之間存在著抑制信息通路,而靶基因多數(shù)為癌癥相關(guān)基因。PDCD10(程序性細(xì)胞死亡因子10)是凋亡相關(guān)因子,調(diào)控細(xì)胞凋亡,最近一些研究表明,其與腫瘤的增殖、血管形成有關(guān)。PDCD10在非小細(xì)胞肺癌中,尤其在低分化肺癌中呈高表達(dá)。已經(jīng)有研究證實(shí)在前列腺癌中miRNA-103通過抑制PDCD10的表達(dá)從而達(dá)到抑制腫瘤的作用。研究miRNA-103是否通過靶向調(diào)節(jié)PDCD10而發(fā)揮抑制腫瘤的作用,我們觀察miRNA-103過表達(dá)或PDCD10基因沉默對非小細(xì)胞肺癌增值和侵襲能力的影響。本研究的目的是在非小細(xì)胞肺癌中miRNA-103是否也通過抑制PDCD10表達(dá)而達(dá)到抑制腫瘤的作用。實(shí)驗(yàn)方法:使用逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時定量PCR檢測32對人非小細(xì)胞肺癌組織及相應(yīng)的癌旁正常組織中miRNA-103和PDCD10 m RNA的表達(dá)情況,并檢測A549、SPCA1、H1299、NCI-4460、PC9、16HBE細(xì)胞中miRNA-103和PDCD10的表達(dá)。運(yùn)用多個高通量數(shù)據(jù)庫對miRNA-103的靶基因進(jìn)行篩選,PDCD10為其中靶基因之一。將miRNA-103 mimics、negative control mimic(NC)、miRNA-103 inhibitor、pc DNA3.1 PDCD10或者negative control siRNA(pc DNA3.1)轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,檢測PDCD10的表達(dá)。Transwell實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果體現(xiàn)出相應(yīng)的結(jié)論,即103-mi R具備降低A549細(xì)胞活力的屬性,能夠有效地妨礙癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和破壞。下調(diào)mi R-103能夠顯著降低程序性細(xì)胞死亡蛋白10(PDCD10)的水平。將mi R-103mimic和p GL3-PDCD10 WT 3'-UTR共轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞,我們檢測到熒光素酶的活性顯著下降,而在mi R-103 mimic和p GL3-PDCD10 mut 3'-UTR共轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞中熒光素酶活性不變。過表達(dá)PDCD10可以顯著逆轉(zhuǎn)NSCLC組織和細(xì)胞中mi R-103介導(dǎo)的促凋亡作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在人的非小細(xì)胞肺癌組織細(xì)胞中,miRNA-103的低表達(dá)和PDCD10的高表達(dá)顯著相關(guān)。PDCD10蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)升高。轉(zhuǎn)染miRNA-103 mimics抑制PDCD10的表達(dá)。miRNA-103 mimics顯著抑制含wt PDCD10-3'UTR的質(zhì)粒的熒光素酶活性,卻沒有影響含mut PDCD10-3'UTR的質(zhì)粒的熒光素酶活性,這說明miRNA-103直接結(jié)合并作用于PDCD10-3'UTR的相應(yīng)預(yù)測靶位點(diǎn)。增強(qiáng)miRNA-103表達(dá)或siRNA介導(dǎo)的PDCD10基因沉默均能顯著減弱肺癌細(xì)胞增殖和侵襲能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:miRNA-103對PDCD10 m RNA翻譯產(chǎn)物的作用的負(fù)調(diào)控的。增強(qiáng)miRNA-103表達(dá)或siRNA介導(dǎo)的PDCD10基因沉默均能顯著減弱肺癌細(xì)胞增殖和侵襲能力。
【圖文】：

圖 1.miR-103 在 NSCLC 組織和細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)(A) qRT-PCR 檢測肺癌組織和正常肺組織中 miR-103 mRNA 相對表達(dá)。(B)qRT-PCR 檢測 NSCLC 源性細(xì)胞系和 16HBE 細(xì)胞中 miR-103 mRNA 相對表達(dá)(n= 3 獨(dú)立實(shí)驗(yàn))。(C) miR-103 表達(dá)水平與肺癌腫塊大小相關(guān)。 (D) miR-103 表達(dá)

圖 2.PDCD10 在 NSCLC 組織和細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)(A) A549 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了 NC 或 miR-103 mimic 后 PDCD10 mRNA 和蛋白表達(dá)。(B) qRT-PCR 檢測腫瘤組織和正常肺組織中 PDCD10 mRNA 相對表達(dá)量。(C) qRT-PCR 檢測 NSCLC 源性細(xì)胞系和 16 HBE 細(xì)胞中 PDCD10 mRNA 相對表達(dá)量。 (D) PDCD10 表達(dá)水平與腫瘤大小相關(guān)。 (E) PDCD10 表達(dá)水平與腫瘤病理分期相關(guān)。(F)根據(jù)Pearson相關(guān)系數(shù) miR-103與 PDCD10 呈負(fù)相關(guān)。(n = 3）獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。 誤差線代表均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差. *P<0.05, 與對照組相比。3. miR-103 直接靶向調(diào)節(jié) PDCD10我們使用 TargetScan (www.targetscan.org)軟件進(jìn)行 miR-103 靶基因預(yù)測，根據(jù)所得的預(yù)測結(jié)果從中選取 PDCD10 作為一個潛在的靶基因(圖 3A)。為驗(yàn)證PDCD10 是否確實(shí)受到 miR-103 直接調(diào)節(jié)，將 PDCD10 基因的野生型 3'-UTR
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Bo Liu;Jin-Ku Bao;Jin-Ming Yang;Yan Cheng;;Targeting autophagic pathways for cancer drug discovery[J];Chinese Journal of Cancer;2013年03期

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本文編號：2695216