【摘要】：在癌癥診斷和靶向治療中,EGFR是癌基因這一觀點被廣泛認同。Shkbp1最近被發(fā)現(xiàn),它是EGFR上游分子,可以保護EGFR免受降解。然而,在腫瘤生長過程中Shkbp1功能仍有待進一步研究。在本研究中,我們首先通過對來自TCGA數(shù)據(jù)庫的494個匹配肺腫瘤組織和臨近的非腫瘤組織的mRNA進行分析,發(fā)現(xiàn)Shkbp1與臨床TNM的分期呈正相關。此外,通過利用免疫組化對肺癌組織芯片(125例)進行檢測分析,發(fā)現(xiàn)其在臨床肺癌樣本中高表達,并且與淋巴結轉(zhuǎn)移有關。機制上,利用Shkbp1敲除小鼠通過化學藥物(烏拉坦)誘導建立肺腺癌自發(fā)模型,研究Shkbp1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用,其結果顯示:與對照組小鼠比較,Shkbp1基因敲除小鼠的肺部腫瘤數(shù)量和體積均顯著減少。為進一步探討其機制,利用siRNA干擾將Shkbp1在其高表達的肺癌細胞系中沉默,同樣,利用腺病毒載體將Shkbp1在其低表達的細胞系中過表達,通過一系列細胞功能實驗表明:在肺癌細胞系中,降低Shkbp1的表達抑制了細胞的遷移和侵襲,反之亦然。此外,還通過蛋白芯片檢測,結果提示沉默Shkbp1會影響EGFR信號通路。上述一系列結果表明:Shkbp1與腫瘤的遷移和侵襲密切相關。此外,除了腫瘤細胞表達Shkbp1之外,我們還發(fā)現(xiàn)Shkbp1蛋白在許多類型免疫細胞中高表達,因此,利用Shkbp1敲除小鼠通過皮下移植腫瘤模型和尾靜脈轉(zhuǎn)移模型,探討免疫細胞缺失Shkbp1后是否會影響腫瘤的生長。結果表明,敲除Shkbp1能降低腫瘤小鼠的腫瘤生長速度,提示免疫細胞的Shkbp1缺失亦能影響腫瘤的生長。進一步通過流式細胞術,證明Shkbp1會影響部分免疫細胞的亞型變化。綜上所述,得出以下結論:(1)Shkbp1在臨床肺癌標本中高表達,且表達陽性率與肺癌的TNM分期呈正相關,與淋巴結轉(zhuǎn)移相關;(2)Shkbp1敲除小鼠藥物誘導肺癌,腫瘤的生長受到抑制;(3)沉默Shkbp1抑制了肺癌細胞的遷移和侵襲;Shkbp1過表達促進肺癌細胞的遷移和侵襲;(4)Shkbp1影響了上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,其過程涉及到EGFR信號通路;(5)免疫細胞的Shkbp1缺失亦可以抑制腫瘤的生長。本研究揭示了Shkbp1促癌轉(zhuǎn)移的作用,為研究Shkbp1在臨床診斷和靶向藥物中的重要作用提供新的實驗基礎和理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 2-1 Shkbp1-/-小鼠鑒定圖2.2.2 細胞凍存與復蘇（1）細胞凍存對處于對數(shù)期內(nèi)的細胞，用 0.25%胰酶對細胞進行消化處理，用培養(yǎng)基終止消化反應后收集細胞，以 1000rpm，離心 4min，同時去掉上清。細胞的凍存液按 9：1（FBS：DMSO）的比例混勻制成單細胞懸液。將單細胞懸液放置于細胞凍存管中，然后將其放入程序降溫細胞凍存盒，按溫度梯度先凍存與-20℃，2h 后-80℃，12h 后轉(zhuǎn)存于液氮罐中。（2）細胞復蘇從液氮罐中取出凍存的細胞之后，，在 37℃的水浴鍋中進行復溫解凍，解凍之后，對凍存管用酒精進行消毒，收集細胞并離心，并用完全培養(yǎng)基重懸混勻細胞得到單細胞懸液，把制得的單細胞懸液移入培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，待細胞貼壁后，更換新的培養(yǎng)基繼續(xù)下一步培養(yǎng)。待細胞長滿后可進行傳代。

第三章 實驗結果第一部分 表達于肺癌細胞上的 Shkbp1 對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響第一節(jié).Shkbp1 在肺癌標本中表達情況和臨床特征關系為了研究Shkbp1是否在肺癌中有一定功能以及明確Shkbp1在肺癌中潛在的臨床意義。首先, 我們通過 TCGA 癌癥數(shù)據(jù)庫和 Protein atlas 網(wǎng)站對 Shkbp1 相關數(shù)據(jù)進行分析，了解 Shkbp1 在腫瘤組織中的表達情況：即是否在肺癌中高表達，是否發(fā)揮促進癌癥的作用。明確其與臨床分期的關系，明確其與生存率的關系。1.1 Shkbp1 RNA 水平在各癌種中的表達量
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 李寧;張曉曄;蔣中秀;劉洋;李雪嬌;;小鼠Lewis肺癌原位模型的建立[J];中國實驗動物學報;2014年05期

2 侯敏;戴麗軍;譚小軍;黃月玲;高蔚櫻;呂嘉春;任韻;周敏儀;樸金松;勞淑貞;梁成結;馮瑗瑜;;小鼠肺腺癌模型的建立及腫瘤病理分析[J];中國實驗動物學報;2012年04期

相關碩士學位論文 前2條

1 何曉東;Shkbp1等幾種基因工程小鼠純合品系的建立[D];廣東藥學院;2011年

2 龔萍;穿心蓮內(nèi)酯抗腫瘤作用及靶向NF-κB信號的分子機制研究[D];廣東藥學院;2010年

本文編號：2695140