【摘要】：目的:探討人參皂苷Rh2對肝癌細胞HepG2的增殖和遷移的抑制以及其作用機制。為人參皂苷治療肝癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:20 μg/mL人參皂苷Rh2處理肝癌細胞HepG2、Huh7和SMMC7721 48 h后收集細胞,qRT-PCR 檢測人參皂苷 Rh2 對 miR-29a-5p、miR-26b-3p、miR-224-3p、miR-200b-5p和miR-146a-5p表達的影響;20 μg/mL人參皂苷Rh2處理肝癌細胞HepG2 1天、3天和5天,MTS法檢測人參皂苷Rh2對HepG2細胞增殖的影響。轉(zhuǎn)染 miR-146a-5p minics、miR-146a-5p inhibitor 或者對照(negative control,NC)miRNA,在人參皂苷Rh2處理下,MTS法檢測細胞增殖,Transwell檢測細胞遷移和侵襲,克隆形成實驗檢測細胞克隆形成能力,流式細胞儀分析細胞凋亡和周期;Westernblot檢測細胞中MCL1、MMP2和Nrf2蛋白表達水平。包裝 miR-146a-5p 過表達和 miR-146a-5p inhibitor 慢病毒,感染 HepG2 細胞,構(gòu)建穩(wěn)定細胞株。通過裸鼠皮下成瘤實驗研究人參皂苷Rh2聯(lián)合過表達miR-146a-5p或抑制miR-146a-5p表達對瘤體生長的影響,Western blot和免疫組化檢測組織中MCL 1、MMP 2和Nrf2蛋白的表達。20μg/mL人參皂苷Rh2處理肝癌細胞HepG2 48h后,收集細胞,lncRNA芯片分析人參皂苷Rh2對肝癌細胞lncRNA表達譜的影響。結(jié)果:和未經(jīng)處理的肝癌細胞組相比,人參皂苷Rh2處理組的三種肝癌細胞中miR-29a-5p和miR-26b-3p的相對表達水平均顯著降低;而miR-224-3p、miR-200b-5p和miR-146a-5p的相對表達水平均顯著增加,其中miR-146a-5p的相對表達水平增加最大,其相對表達水平在肝癌細胞HepG2、Huh7和SMMC7721中相對表達量分別為4.14±0.2、3.12±0.15和3.05±0.02。MTS實驗結(jié)果顯示人參皂苷Rh2能顯著抑制HepG2細胞的增殖。人參皂苷Rh2聯(lián)合過表達miR-146a-5p能夠抑制肝癌細胞HepG2的增殖、遷移、侵襲和克隆成形,抑制HepG2細胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化,抑制HepG2細胞中MCL1、MMP2和Nrf2的表達。裸鼠體內(nèi)成瘤實驗發(fā)現(xiàn)抑制miR-146a-5p的表達能夠顯著促進瘤體的生長;而人參皂苷Rh2聯(lián)合過表達miR-146a-5p能夠顯著抑制瘤體的生長;Western blot和免疫組化結(jié)果表明人參皂苷Rh2聯(lián)合過表達miR-146a-5p對裸鼠體內(nèi)瘤體組織中蛋白MCL 1、MMP 2和Nrf 2的表達有抑制作用。lncRNA芯片分析人參皂苷Rh2對HepG2細胞lncRNA和mRNA表達的影響,發(fā)現(xiàn)差異lncRNA共703個,其中上調(diào)的lncRNA為580個,下調(diào)的lncRNA為123個;其中差異mRNA共489個,其中上調(diào)的mRNA為329個,下調(diào)的mRNA為160個。其中差異變化最大的LncRNAXLOC_012708和LncRNA LOC285547很有可能參與人參皂苷Rh2對肝癌細胞的抑制過程。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh2能顯著促進肝癌細胞HepG2中miR-146a-5p的表達;發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh2作用肝癌細胞HepG2的lncRNA差異表達譜。揭示了人參皂苷Rh2通過miR-146a-5p對肝癌細胞HepG2的增殖、遷移、侵襲和克隆形成產(chǎn)生明顯的抑制作用,為防治肝癌轉(zhuǎn)移提供理論依據(jù)和潛在的治療靶點。
【圖文】：

收集三種肝癌細胞的各組細胞進行ＲＮＡ抽后，采用１％瓊脂糖的凝膠對逡逑ＲＮＡ進行電泳并對提取的細胞總ＲＮＡ純度進行分析，對ＲＮＡ電泳凝膠成象結(jié)逡逑果結(jié)果如圖２－１所示。２８ｓ邋ｒＲＮＡ、１８ｓ邋ｒＲＮＡ和５ｓ邋ｒＲＮＡ三條帶均完整，并且逡逑２８ｓ條帶亮度大約是１８ｓ條帶亮度的兩倍，顯示總ＲＮＡ提取比較完整。逡逑１２３４５６７８９逡逑圖２－１：邋ＲＮＡ電泳圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１：邋ＲＮＡ邋ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ逡逑１８逡逑

２．２．２人參皂苷Ｒｈ２對肝癌細胞中ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ表達的影卩向逡逑應(yīng)用ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測人參皂苷Ｒｈ２對肝癌細胞ＨｅｐＧ２、Ｈｕｈ７和ＳＭＭＣ７７２１逡逑中ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ相對表達的影響，其擴增曲線和溶解曲線如圖２－２所示。ｑＲＴ－逡逑卩０１檢測結(jié)果顯示，，在肝癌細胞設(shè)？０２、１１１１１１７和８＾／＾０７７２１中，與：６１＆１１１＾６１１逡逑組肝癌細胞中ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ相對表達量相比，ＤＭＳＯ處理組肝癌細胞中ｍｉＲ－逡逑２６ｂ－３ｐ相對表達量差異均不顯著，不具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＞０．０５），人參皂苷逡逑Ｒｈ２處理組三種肝癌細胞中ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ相對表達量均顯著降低，在肝癌細胞逡逑ＳＭＭＣ７７２１中降低最顯著，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；與ＤＭＳＯ處理組逡逑相比，人參皂苷Ｒｈ２處理組肝癌細胞中ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ相對表達量均顯著降低，差逡逑異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜0．0５），結(jié)果如圖２－３所示。逡逑金邋：廠邋｜邋ｉｍａｘ逡逑圖２－２：三種肝癌細胞中ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ的擴增和熔解曲線逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２：邋Ｔｈｅ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｃｕｒｖｅ邋ａｎｄ邋ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ邋ｉｎ邋ｔｈｒｅｅ邋ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ逡逑ｃａｒｃｉｎｏｍａ邋ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅｓ逡逑ｍ邋ｉＲ－２６ｂ－３ｐ逡逑１．５邋ｎ逡逑Ｂｌａｎｋ邋ｃｅｌｌ逡逑0邐Ｔ邐■ＤＭＳＯ逡逑ｔａｒ逡逑ＨｅｐＧ２邐Ｈ邋ｕｈ７邋ＳＭＭＣ７７２１逡逑圖２－３？．三種肝癌細胞中ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ的相對表達量逡逑１９逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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本文編號：2694352