發(fā)布時間：2020-06-02 13:23

【摘要】：目的:探討人婆羅雙樹樣基因4(spalt-like transcription factor 4,SALL4)在胃癌轉(zhuǎn)移和胃癌細胞EMT中的作用及機制,為闡明SALL4促胃癌轉(zhuǎn)移作用提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù),并為胃癌分子診斷和治療提供新的靶點。方法:分別采用慢病毒介導SALL4干擾shRNA和SALL4過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人胃癌細胞MGC803和HGC27,采用qRT-PCR驗證SALL4基因敲減和過表達效率。采用平板克隆實驗檢測細胞增殖能力,采用劃痕實驗評價細胞運動能力,采用Transwell遷移和Matrigel侵襲實驗評價細胞遷移以及侵襲能力,采用q RT-PCR和Western blot檢測胃癌細胞中EMT相關(guān)基因和蛋白表達。通過基因芯片篩選和qRT-PCR檢測SALL4敲減后MGC-803細胞TGF-β1基因表達變化。在過表達SALL4同時采用siRNA干擾TGF-β1,闡明TGF-β1在SALL4促胃癌轉(zhuǎn)移和EMT中的作用。結(jié)果:慢病毒介導shRNA轉(zhuǎn)染MGC-803細胞后,qRT-PCR和western blot結(jié)果顯示SALL4表達降低。平板克隆實驗和劃痕實驗結(jié)果顯示細胞增殖和運動能力下降,Transwell遷移和Matrigel侵襲實驗結(jié)果顯示細胞遷移和侵襲能力下降。qRT-PCR和western blot結(jié)果表明E-cadherin基因和蛋白表達升高,N-cadherin、vimentin、slug和twist基因和蛋白表達下降。相反,SALL4過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HGC-27細胞后,SALL4表達升高,細胞增殖、運動、遷移和侵襲能力增強,E-cadherin基因和蛋白表達下降,N-cadherin、vimentin、slug和twist基因和蛋白表達上升。SALL4基因敲減導致TGF-β1基因表達下調(diào),并得到Western blot結(jié)果證實。SALL4基因敲減抑制而SALL4過表達促進SMAD2/3磷酸化。干擾TGF-β1基因表達導致SALL4促胃癌細胞遷移和侵襲以及EMT發(fā)生能力明顯下降。結(jié)論:SALL4通過激活TGF-β/SMAD信號通路,誘導胃癌細胞發(fā)生EMT,促進其轉(zhuǎn)移能力。SALL4調(diào)控TGF-β1是其在胃癌中發(fā)揮促轉(zhuǎn)移作用的新機制。
【圖文】：

SALL4 調(diào)控 TGF-β 促胃癌轉(zhuǎn)移作用和機制研究果A 干擾 SALL4 表達效率檢測毒介導的 shRNA 干擾 MGC-803 細胞中 SALL4 表達。慢微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，，sh-Ctrl 與 sh-SALL4 敲減組都能觀察到很染效率較高（圖 3.1A)。qRT-PCR 結(jié)果表明，與 sh-Ctrl 相比，sRNA 表達顯著下降，為對照組的 43%(圖 3.1B)。Western bl照組相比，干擾組 SALL4 蛋白表達顯著降低（圖 3.1C）介導 shRNA 轉(zhuǎn)染顯著抑制 MGC-803 細胞中 SALL4 表達

圖 3.2 干擾 SALL4 表達抑制 MGC-803 細胞體外增殖能力Fig 3.2 SALL4 knockdown inhibits the proliferation of MGC-803 cellsSALL4 敲減對 MGC-803 細胞遷移能力的影響過劃痕實驗和 Transwell 遷移實驗檢測 SALL4 基因敲減后 MGC-80遷移能力變化。結(jié)果表明，與空白組以及 sh-Ctrl 組相比，sh-SAL-803 細胞的運動能力明顯降低（圖 3.3A)。在 Transwell 遷移實驗中，與空白組以及 sh-Ctrl 組相比，sh-SALL4 組在相同時間內(nèi)遷移到胞數(shù)量減少（圖 3.3B)。表明干擾 SALL4 表達后，MGC-803 細胞力顯著降低。
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

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1 賴義明;黃海;凌逸虹;曾樂祥;陳杰青;曹億;余永晟;張思敏;張一鳴;李金;王淦平;郭正輝;;婆羅雙樹樣基因4在人前列腺癌細胞和組織中的表達及其與臨床預后之間的關(guān)系[J];中國病理生理雜志;2013年12期

2 Jing Zhu;Duy Nguyen;Hong Ouyang;Xiao-Hui Zhang;Xiao-Ming Chen;Kang Zhang;;Inhibition of RhoA/Rho-kinase pathway suppresses the expression of extracellular matrix induced by CTGF or TGF-β in ARPE-19[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2013年01期

3 許文榮;;干細胞相關(guān)分子及其在腫瘤發(fā)生與分子診斷中應用[J];臨床檢驗雜志;2012年10期

4 傅雷華;王蘭;喻依川;胡成琳;陳林;;硼替佐米誘導急性髓性白血病細胞凋亡及對SALL4基因表達的影響[J];中國藥學雜志;2012年04期

本文編號：2693220