【摘要】：目的:在乳腺癌荷瘤小鼠模型中,初步探討鞭毛素蛋白(Flagellin,FliC)與雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)聯(lián)用對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的影響及作用機(jī)制。方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,用小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞建立BALB/c小鼠乳腺癌腫瘤模型,并將小鼠分為四組,分別是Control組、FliC組、RAPA組和RAPA+FliC組;分別注射鞭毛素蛋白和(或)雷帕霉素,并定期記錄小鼠腫瘤大小、體重變化及生存情況,計(jì)算腫瘤抑制率和生存率。體外實(shí)驗(yàn)中,用MTT法檢測鞭毛素蛋白和雷帕霉素聯(lián)用對4T1細(xì)胞的直接抑制作用。從體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中得到的腫瘤組織內(nèi)提取腫瘤組織細(xì)胞并用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測,分別檢測CD4~+CD25~+T調(diào)節(jié)細(xì)胞(Treg)、CD11b~+Gr-1~+的骨髓來源的抑制性細(xì)胞(MDSCs)和CD11b~+F4/80~+的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)細(xì)胞的比例;免疫組化檢測CD8~+T細(xì)胞浸潤情況并用Image Pro Plus6.0計(jì)算陽性率;HE染色檢測肝、肺組織腫瘤轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,RAPA+FliC組的平均體重最輕,約為16.54g;RAPA和FliC對小鼠腫瘤生長均有抑制作用,但RAPA+FliC組抑制效果最好,腫瘤生長抑制率約為79.60%±5.561;與Control組相比,其余三組生存率均較低。在體外實(shí)驗(yàn)中,給藥組對4T1細(xì)胞增殖的抑制率均高于Control組,但RAPA+FliC組的抑制率最高,約為42.20%。腫瘤組織中,RAPA+FliC組組織細(xì)胞中CD4~+CD25~+Treg細(xì)胞的比例高于其余組別,約為27.36%,Control組最低,約為7.38%,而RAPA+FliC組和RAPA組組織細(xì)胞中CD11b~+Gr-1~+MDSC和CD11b~+F4/80~+TAM比例基本相同且均為最低,分別約為6.28%和6.58%以及5.07%和4.88%,FliC組最高,約為27.03%和20.17%;CD8~+T細(xì)胞浸潤情況為Control組最少,其余三組均高于Control組,其中FliC組最多;與Control組相比,RAPA組和RAPA+FliC組肝、肺組織腫瘤轉(zhuǎn)移情況較輕,但FliC組更為嚴(yán)重。結(jié)論:鞭毛素蛋白與雷帕霉素聯(lián)合作用可增強(qiáng)乳腺癌荷瘤小鼠抗腫瘤效應(yīng),抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。其機(jī)制可能主要在于增強(qiáng)了機(jī)體免疫系統(tǒng)及腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞對腫瘤的殺傷作用,而不僅僅是對腫瘤細(xì)胞的直接抑制作用。
【圖文】：

注：圖 1 中虛線部分表示第一次給藥時(shí)間，即建模后第 5 天開始測量腫瘤大小，第八天開始鞭毛素蛋白和雷帕霉素注射，隨后即測量體重和試劑注射隔日進(jìn)行圖 1 各組體重變化趨勢Fig.1 The variation tendency of mice weight2.2 各組小鼠腫瘤生長情況如圖 2 所示，用游標(biāo)卡尺測量腫瘤大小，并監(jiān)測腫瘤大小變化。與 Control 組相比，F(xiàn)liC 組、RAPA 組和 RAPA+FliC 組對腫瘤生長均有抑制作用，其中RAPA+FliC 組對腫瘤的抑制作用高于另外兩組。如圖 3 所示，在處死小鼠后取下腫瘤稱重并比較腫瘤大小，得到結(jié)果與游標(biāo)卡尺測量結(jié)果趨勢完全一致。用Graphpad 軟件根據(jù)所得數(shù)據(jù)計(jì)算腫瘤抑制率，結(jié)果如圖 4，與 Control 組（腫瘤大小平均 1451.235mm3，腫瘤重量平均 1.49g）相比，F(xiàn)liC 組（腫瘤大小平均970.95mm3，腫瘤重量平均 0.765g）的腫瘤抑制率為 48.66% ± 1.678，RAPA 組（腫瘤大小平均 799.15mm3，腫瘤重量平均 0.543g）的腫瘤抑制率為 54.36% ± 5.494，，

注：圖 2 中虛線部分表示第一次給藥時(shí)間，即建模后第 5 天開始測量腫瘤大小，第八天開始鞭毛素蛋白和雷帕霉素注射，隨后即測量大小和試劑注射隔日進(jìn)行圖 2 各組腫瘤大小變化趨勢Fig.2 The variation tendency of tumor size
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R730.51

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本文編號(hào)：2692626