【摘要】：目的:舌鱗狀細胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是口腔腫瘤中最常見的惡性腫瘤。舌癌的主要治療方法是手術治療輔以放化療的綜合治療。雖然近十年來治療技術在不斷改進,但總體臨床治療效果提高并不顯著。通過探求舌癌發(fā)生發(fā)展的機制從而尋求有效的治療方法是改善舌癌病人預后的關鍵,也是舌癌防治的熱點,具有深遠的臨床和科學意義。FBXW7基因是SCF類泛素連接酶E3復合物中特異性識別底物的關鍵因子,在細胞的分裂、生長及分化過程中起重要調控作用。FBXW7主要通過泛素介導的蛋白水解系統(tǒng)進而靶向降解Cyclin E、Notch1、Jun和Myc等癌蛋白,調控細胞的分裂、生長及分化過程,被認為是一種抑癌基因。FBXW7基因突變已經在多種人類腫瘤中被發(fā)現,深入研究FBXW7基因在生理、病理過程中的作用,對于了解FBXW7相關的腫瘤發(fā)生機制和制定靶向FBXW7途徑的癌癥治療策略至關重要。MiRNA是一類內源性的單鏈小型非編碼RNA,成熟的miRNA可在轉錄后水平通過促進靶基因mRNA的降解和/或抑制其翻譯過程而發(fā)揮負調控基因表達的功能。MiRNA在許多腫瘤中存在異常表達,在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。相關研究發(fā)現,miR-24在多種惡性腫瘤中表達異常,在腫瘤細胞的增殖、侵襲及轉移等過程中起重要調控作用,呈現為抑癌基因或癌基因的功能。研究發(fā)現,miR-24在舌癌腫瘤組織較癌旁組織中高表達,但是miR-24在舌癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及具體機制尚不清楚。因此,本研究探討舌癌組織中FBXW7的表達水平及其與預后關系,進一步分析miR-24是否可靶向調控FBXW7,進而影響舌癌細胞的生物學行為。方法:1.收集天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院舌鱗狀細胞癌患者95例,利用免疫組化法檢測舌癌石蠟組織中FBXW7蛋白的表達情況,分析FBXW7表達水平與舌鱗狀細胞癌患者臨床病理資料以及預后之間的關系。2.應用Real-time PCR方法檢測27例TSCC患者癌組織與癌旁組織中miR-24的表達情況,分析miR-24的表達水平與舌鱗狀細胞癌患者臨床病理資料之間的關系。應用RT-PCR方法檢測27例TSCC患者癌組織與癌旁組織中FBXW7的表達水平。應用Pearson法,分析癌組織中miR-24及FBXW7的表達水平的相關性。3.驗證miR-24對FBXW7基因的靶向調控。利用TargetScan生物信息學技術預測miR-24的可能靶基因。利用RT-PCR和Western blotting法檢測FBXW7mRNA和蛋白水平的變化。應用熒光素酶報告實驗分析驗證FBXW7是miR-24的靶基因。4.分析miR-24通過調控FBXW7對舌鱗狀細胞癌細胞增殖及侵襲的影響。在舌鱗狀細胞癌細胞中轉染miR-24或anti-miR-24后,CCK-8法檢測細胞增殖的變化,Transwell實驗檢測細胞侵襲的變化。在舌鱗狀細胞癌細胞中轉染Si-FBXW7或FBXW7表達質粒,檢測細胞增殖和侵襲的變化。共轉染miR-24和FBXW7,檢測細胞增殖和侵襲的變化。結果:1.免疫組織化學結果顯示,FBXW7蛋白在癌旁組織中的表達水平顯著高于癌組織(?~2=6.023,P=0.014)。FBXW7蛋白的表達水平與腫瘤分化程度、臨床分期顯著相關(P0.05)。預后分析顯示,FBXW7蛋白高表達組患者的中位生存時間顯著長于低表達組(80.00±11.88月vs 38.00±5.63月,?~2=19.785,P=0.000),FBXW7蛋白的表達水平是舌癌患者預后的獨立影響因素。2.Real-time PCR檢測顯示癌組織中miR-24的表達水平顯著高于癌旁組織(Z=-4.541,P0.01)。miR-24的表達水平與腫瘤的分化程度及臨床分期顯著相關(P0.05)。癌組織中FBXW7 mRNA的表達水平顯著低于癌旁組織(Z=-3.556,P0.01)。相關分析結果顯示舌癌組織中miR-24的表達水平與FBXW7表達水平呈顯著負相關(r~2=0.384,P=0.001)。3.通過生物信息學技術,篩選并確認了miR-24可靶向FBXW73~’UTR。轉染miR-24可抑制FBXW7 mRNA和蛋白水平。熒光素酶報告基因實驗結果顯示FBXW7是miR-24的靶基因。4.轉染miR-24后舌癌細胞的增殖和侵襲能力明顯增強。轉染FBXW7后舌癌細胞的增殖和侵襲能力明顯減弱。共轉染實驗結果顯示miR-24可通過負向調控FBXW7促進舌鱗狀細胞癌的增殖及侵襲。結論:1.FBXW7蛋白在舌鱗狀細胞癌中呈低表達,與腫瘤分化程度、臨床分期顯著相關。FBXW7蛋白的表達水平是舌癌患者預后的獨立影響因素。2.miR-24在舌鱗狀細胞癌中呈高表達,其表達水平與腫瘤的分化程度及臨床分期顯著相關。相關分析結果顯示舌癌組織中miR-24的表達水平與FBXW7表達水平顯著負相關。3.FBXW7是miR-24的靶基因,miR-24可通過負向調控FBXW7促進舌鱗狀細胞癌的增殖和侵襲。
【圖文】：

天津醫(yī)科大學博士學位論文一、舌癌組織中 FBXW7 蛋白的表達情況及與患者預后的研究1.2.2 FBXW7 蛋白在舌癌組織及癌旁組織中的表達情況應用免疫組織化學方法檢測 FBXW7 蛋白的表達情況，結果顯示 FBXW7 蛋白主要定位在于細胞核，也有少許定位于細胞漿，陽性結果表現為細胞核、細胞漿染色為棕黃色或褐黃色。FBXW7 蛋白在癌旁組織呈高表達（圖 1-1），在舌低分化鱗狀細胞癌組織中低表達（圖 1-2），在舌高分化鱗狀細胞癌組織中高表達（圖 1-3）。FBXW7 蛋白在癌旁組織的表達水平顯著高于癌組織（ 2=6.023，，P=0.014）（表 1-2）。A B

胞漿染色為棕黃色或褐黃色。FBXW7 蛋白在癌旁組織呈高表達（圖 1-1），在舌低分化鱗狀細胞癌組織中低表達（圖 1-2），在舌高分化鱗狀細胞癌組織中高表達（圖 1-3）。FBXW7 蛋白在癌旁組織的表達水平顯著高于癌組織（ 2=6.023，P=0.014）（表 1-2）。圖1-1 FBXW7蛋白在癌旁組織中的表達情況。FBXW7蛋白在癌旁組織高表達，（A×100，B×200）。A BA B
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.86

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本文編號：2691910