突變型FGFR2Ⅲc胞外段（msFGFR2c）與EGFR的相互作用研究
發(fā)布時(shí)間：2020-05-31 11:45
【摘要】：目的:在眾多癌癥中往往存在著多種受體酪氨酸激酶通路的異常激活,各通路之間存在著冗余機(jī)制,即其中一個信號通路被抑制時(shí)會導(dǎo)致另一個或者多個通路的信號激活,因而單一靶點(diǎn)藥物治療腫瘤效果不佳。前期研究表明本實(shí)驗(yàn)室制備的msFGFR2c能有效的抑制FGFR信號通路,在EGF誘導(dǎo)的情況下,msFGFR2c能同時(shí)抑制EGFR的磷酸化,但其具體機(jī)制還不清楚,故探索其作用機(jī)制為開發(fā)雙靶點(diǎn)或多靶點(diǎn)藥物具有重要意義。方法:運(yùn)用原核生物表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建表達(dá)EGFR胞外段重組蛋白,CCK-8法檢測其生物活性;WB檢測msFGFR2c對DU145中EGFR磷酸化的抑制作用;Co-IP檢測msFGFR2c與EGFR的相互作用;激光共聚焦檢測msFGFR2c與EGFR的共定位情況;ITC檢測msFGFR2c與EGFR的結(jié)合力。結(jié)果:CCK-8檢測結(jié)果顯示,重組表達(dá)的EGFR胞外段蛋白能抑制EGF對H1299誘導(dǎo)的增殖作用。WB結(jié)果顯示msFGFR2c能明顯抑制DU145細(xì)胞中EGFR的磷酸化作用。Co-IP結(jié)果顯示msFGFR2c能夠與EGFR相互結(jié)合。激光共聚焦結(jié)果顯示msFGFR2c與膜上過表達(dá)的EGFR存在明顯的共定位情況。ITC結(jié)果顯示msFGFR2c與EGFR有直接相互作用,K=5.41E4M~(-1)。結(jié)論:本課題組構(gòu)建表達(dá)的突變型FGFR2Ⅲc胞外段蛋白msFGFR2c,有望成為靶向(FGFR和EGFR)的雙靶點(diǎn)抗腫瘤藥物。
【圖文】：
從而使得 CR1 結(jié)構(gòu)域突出蛋白表面，有利于與另一個受體的 CR1 結(jié)構(gòu)域互接觸形成二聚化，進(jìn)而傳遞信息[40]。CR1 和 CR2 結(jié)構(gòu)域第一個模塊中含有的保守色酸殘基（Trp176 和 Trp 492）插入 L 結(jié)構(gòu)域中 β-螺旋的第 4 和第 5 螺旋之間，，與其他保色氨酸殘基形成疏水的環(huán)境（Trp 140 和 Trp 453），然而由 1-476 位殘基組成的 EGFR 構(gòu)體由于缺乏這種色氨酸殘基的相互作用，其與配體的親和力不足全部胞外段的一半，CR結(jié)構(gòu)域中的部分殘基通過靶向細(xì)胞膜上的小窩/筏，能有效的增強(qiáng)與配體的結(jié)合能力[41]。Elleman TC 等的研究發(fā)現(xiàn)一種截短的可溶性的 EGFR 胞外段蛋白，其包含殘基 1-50（sEGFR501），包括 EGFR 胞外段的結(jié)構(gòu)域 I、II、III 以及部分結(jié)構(gòu)域 IV 氨基酸殘基，全長 EGFR 胞外域相比其結(jié)合人 EGF 或 TGFβ1 的親和力高 13-14 倍，并且當(dāng)經(jīng)過 EGF 導(dǎo)后能夠形成 2：2 二聚體[40]。 Zhou M 等發(fā)現(xiàn)的 sEGFR621 可作為表皮生長因子抑制劑具有一定的干擾配體誘導(dǎo)受體形成二聚化合物的能力[42]。胞外段如圖 1 所示。據(jù)此，因?qū)嶒?yàn)室在原核系統(tǒng)表達(dá)蛋白方面經(jīng)驗(yàn)比較豐富，故采用原核生物表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行純化表達(dá)EGFR 胞外段，以獲得有生物活性的 EGFR 胞外段，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文要作用。由表皮生長因子（EGF）和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白等組成的生長因子通過激活由ER2-4 組成的 EGF 受體（EGFR）家族成員來刺激細(xì)胞分裂。這種高度保守的塊在各種生物體的形態(tài)發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用，無論是低等生物還是高等還涉及人類諸多類型腫瘤細(xì)胞的生長和發(fā)育[45]。表皮生長因子（Epidermal growth factor，EGF）是一類由 53 個氨基酸組成保守的能和結(jié)構(gòu)相關(guān)的多肽[46]。在人類中，多達(dá) 30 多種配體和 EGFR 家族受體位于信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)的起始。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R73
本文編號：2689806
【圖文】：
從而使得 CR1 結(jié)構(gòu)域突出蛋白表面，有利于與另一個受體的 CR1 結(jié)構(gòu)域互接觸形成二聚化，進(jìn)而傳遞信息[40]。CR1 和 CR2 結(jié)構(gòu)域第一個模塊中含有的保守色酸殘基（Trp176 和 Trp 492）插入 L 結(jié)構(gòu)域中 β-螺旋的第 4 和第 5 螺旋之間，，與其他保色氨酸殘基形成疏水的環(huán)境（Trp 140 和 Trp 453），然而由 1-476 位殘基組成的 EGFR 構(gòu)體由于缺乏這種色氨酸殘基的相互作用，其與配體的親和力不足全部胞外段的一半，CR結(jié)構(gòu)域中的部分殘基通過靶向細(xì)胞膜上的小窩/筏，能有效的增強(qiáng)與配體的結(jié)合能力[41]。Elleman TC 等的研究發(fā)現(xiàn)一種截短的可溶性的 EGFR 胞外段蛋白，其包含殘基 1-50（sEGFR501），包括 EGFR 胞外段的結(jié)構(gòu)域 I、II、III 以及部分結(jié)構(gòu)域 IV 氨基酸殘基，全長 EGFR 胞外域相比其結(jié)合人 EGF 或 TGFβ1 的親和力高 13-14 倍，并且當(dāng)經(jīng)過 EGF 導(dǎo)后能夠形成 2：2 二聚體[40]。 Zhou M 等發(fā)現(xiàn)的 sEGFR621 可作為表皮生長因子抑制劑具有一定的干擾配體誘導(dǎo)受體形成二聚化合物的能力[42]。胞外段如圖 1 所示。據(jù)此，因?qū)嶒?yàn)室在原核系統(tǒng)表達(dá)蛋白方面經(jīng)驗(yàn)比較豐富，故采用原核生物表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行純化表達(dá)EGFR 胞外段，以獲得有生物活性的 EGFR 胞外段，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文要作用。由表皮生長因子（EGF）和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白等組成的生長因子通過激活由ER2-4 組成的 EGF 受體（EGFR）家族成員來刺激細(xì)胞分裂。這種高度保守的塊在各種生物體的形態(tài)發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用，無論是低等生物還是高等還涉及人類諸多類型腫瘤細(xì)胞的生長和發(fā)育[45]。表皮生長因子（Epidermal growth factor，EGF）是一類由 53 個氨基酸組成保守的能和結(jié)構(gòu)相關(guān)的多肽[46]。在人類中，多達(dá) 30 多種配體和 EGFR 家族受體位于信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)的起始。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R73
【相似文獻(xiàn)】
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1 劉傳;突變型FGFR2Ⅲc胞外段（msFGFR2c）與EGFR的相互作用研究[D];暨南大學(xué);2018年
本文編號：2689806
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