【摘要】：目的:研究HClO對乳腺癌MCF-7細胞體外生長的影響;探究GPx1-Si RNA對MCF-7細胞生存的影響。方法:用不同濃度的HClO干預乳腺癌MCF-7細胞,通過MTT法檢測HClO對乳腺癌MCF-7細胞增殖的影響;采用吉姆薩染色法觀察HClO對乳腺癌MCF-7細胞造成的形態(tài)學變化和凋亡情況;流式細胞術檢測HClO對乳腺癌MCF-7細胞凋亡的影響;活性氧檢測試劑盒檢測細胞內活性氧水平;PI/RNase檢測HClO對乳腺癌MCF-7細胞周期的影響。特異性針對谷胱甘肽過氧化物酶1(GPx1)基因的GPx1-Si RNA轉入MCF-7細胞中,采用熒光定量PCR技術檢測GPx1 m RNA的表達水平;Western blot檢測GPx1的表達量;DCFH-DA檢測細胞內ROS水平的變化;Annexin V-FITC/7-AAD檢測干擾GPx1基因后乳腺癌MCF-7細胞凋亡的影響,減弱GPx1基因的表達水平后,添加不同濃度的類活性氧HClO,檢測其凋亡率。結果:1.MTT法檢測顯示HClO對乳腺癌MCF-7細胞的增殖有抑制作用,且抑制作用隨著處理藥物濃度的增加而增強;2.HClO處理MCF-7后,采用吉姆薩染色法,通過倒置顯微鏡可以觀察到凋亡細胞的形態(tài),如:細胞皺縮、細胞核邊緣化等,隨著HClO濃度增加凋亡細胞數也隨之增加;3.流式細胞儀檢測結果顯示,隨著HClO濃度的增加MCF-7細胞的凋亡率逐漸增高,不同濃度HClO作用于MCF-7細胞10min后繼續(xù)培養(yǎng)12h,其結果顯示HClO呈濃度依賴性地誘導MCF-7細胞的凋亡;4.活性氧檢測結果,HClO能夠引起MCF-7細胞內活性氧水平的升高,且MCF-7細胞內活性氧的水平隨著HClO濃度的增加而增加;5.細胞周期檢測結果顯示,HClO濃度高于100μM時,細胞周期明顯被抑制;6.GPx1-Si RNA轉入乳腺癌MCF-7細胞,GPx1 m RNA的表達水平明顯下調,GPx1的蛋白表達量有明顯的下降(P0.05);7.GPx1-Si RNA對MCF-7細胞內ROS水平沒有明顯的影響,GPx1-Si RNA+(HClO)組促增細胞內ROS水平強度明顯高于HClO干預組;8.與正常對照組及陰性對照組相比GPx1-Si RNA組的凋亡率無明顯的變化;9.GPx1-Si RNA+(HClO)組促凋亡率高于HClO干預組。結論:HClO處理MCF-7細胞后,MCF-7細胞的增殖被抑制,且存活率與藥物濃度成反比關系;HClO作用于MCF-7細胞,主要以誘導細胞凋亡為主。GPx1-Si RNA特異性干擾GPx1后,MCF-7細胞內GPx1的m RNA表達量明顯下調。GPx1表達量下調,對MCF-7細胞的活性影響甚微,但可以增強MCF-7細胞對活性氧的敏感性。
【圖文】：

圖 1 不同濃度 HClO 對 MCF-7 細胞增殖率的影響（*P<0.05）表 1 不同濃度 HClO 對 MCF-7 細胞增殖率的影響（x±s，n=3）HClO 濃度（μM） 細胞增值率（%） P對照組 100±5.550.0050 96.09±6.84100 86.58±6.14*200 79.04±8.71*400 56.33±7.03*800 29.04±6.55**與對照組相比，P<0.05。吉姆薩染色觀察 HClO 處理 MCF-7 細胞前后細胞形態(tài)學的變情況

第 2 章 次氯酸對乳腺癌 MCF-7 細胞的殺傷機制研究學的變化逐漸變得較顯著，尤其在 400μM、800μM 時出現了細胞膜完整性的喪失、胞核碎裂、細胞器變形等壞死現象。
【學位授予單位】：河北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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本文編號：2689221