【摘要】：第一部分ZNF139在胃癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)研究目的:胃癌是最常見(jiàn)的惡性消化道腫瘤,其死亡率高居該類腫瘤首位。早期胃癌患者無(wú)明顯癥狀,因此多數(shù)胃癌患者確診時(shí)已發(fā)展至中晚期。胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性較差,因此其化療效果差,導(dǎo)致五年生存率低。胃癌的發(fā)生和發(fā)展受多種因素的調(diào)控,其中包括腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移、粘附、細(xì)胞外基質(zhì)降解和腫瘤血管形成等諸多病理改變的復(fù)雜過(guò)程。鋅指蛋白具有特定的生物結(jié)構(gòu),能夠同DNA結(jié)合,作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)多種生物功能。研究報(bào)道鋅指蛋白調(diào)控相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá),參與腫瘤發(fā)生和發(fā)病過(guò)程。目前關(guān)于ZNF139在胃癌發(fā)生和發(fā)展中作用機(jī)制尚不明了。本研究通過(guò)檢測(cè)胃癌組織中ZNF139表達(dá)水平,分析ZNF139在胃癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá),探索ZNF139表達(dá)水平同胃癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的關(guān)系,為探索胃癌治療新靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。方法:本研究收集了胃癌組織、癌旁組織和正常胃粘膜(均為21例);收集胃癌患者淋巴結(jié)組織21例,所有病例標(biāo)本均取自2011年2月—2011年9月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院行胃癌手術(shù)切除的病例。通過(guò)real-time PCR和免疫組織化學(xué)染色的方法,分別檢測(cè)胃癌組織、癌旁組織、正常胃粘膜及淋巴結(jié)組織中ZNF139表達(dá)水平;利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析ZNF139表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性,所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0軟件分析,P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1同癌旁組織相比,胃癌組織中ZNF139表達(dá)明顯升高(1.416±0.032vs 2.021±0.054,P0.05),提示ZNF139基因可能參與了胃癌發(fā)生過(guò)程;2同無(wú)癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織相比,癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中ZNF139表達(dá)水平明顯升高(1.00±0.144 vs 2.227±0.249,P0.05),提示ZNF139基因可能參與了胃癌的轉(zhuǎn)移過(guò)程,ZNF139高表達(dá)更易于發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;3通過(guò)對(duì)胃癌中ZNF139基因表達(dá)情況與患者臨床病理特征的分析,ZNF139與胃癌分化程度、浸潤(rùn)深度、臨床TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),即分化程度越低,浸潤(rùn)深度越深,臨床分期越晚及伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,ZNF139 mRNA和蛋白表達(dá)越高,進(jìn)一步說(shuō)明ZNF139基因同胃癌的發(fā)展演進(jìn)及惡性程度密切相關(guān)。結(jié)論:1在胃癌組織和胃癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中ZNF139表達(dá)升高;2 ZNF139同胃癌的分化、浸潤(rùn)、臨床TNM分期及淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)。第二部分ZNF139影響胃癌細(xì)胞對(duì)5-FU敏感性的研究目的:化療是中晚期胃癌治療的重要手段。胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性低影響其化療的效果。這是胃癌病人致死的重要原因之一。因此,解決胃癌耐藥性將顯著提高其化療效果,改善胃癌的預(yù)后。本研究檢測(cè)了多種不同分化程度的胃癌細(xì)胞中ZNF139表達(dá)水平;分析ZNF139同胃癌細(xì)胞5-FU耐藥性的關(guān)系;探討ZNF139調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞5-FU耐藥性的分子機(jī)制。這些研究也為胃癌治療提供新的思路。方法:1利用MTT法檢測(cè)不同胃癌組織對(duì)氟尿嘧啶(5-FU)敏感性;2利用real-time PCR檢測(cè)不同胃癌組織ZNF139和多藥耐藥性相關(guān)基因MDR1/P-gp,MRP1,BAX和Bcl-2表達(dá)水平;3轉(zhuǎn)染siRNA抑制SGC7901細(xì)胞中ZNF139表達(dá)水平,探討ZNF139對(duì)胃癌細(xì)胞5-FU敏感性的影響。結(jié)果:1 5-FU敏感性高的胃癌組織中ZNF139表達(dá)水平低;2 5-FU敏感性高的胃癌組織中MDR1/P-gp,MRP1,和Bcl-2表達(dá)水平低,BAX表達(dá)水平高;3在SGC7901細(xì)胞中轉(zhuǎn)染ZNF139-siRNA 48小時(shí)后,ZNF139表達(dá)水平低,胃癌細(xì)胞5-FU敏感性升高;4在SGC7901細(xì)胞中轉(zhuǎn)染ZNF139-siRNA 48小時(shí)后,ZNF139表達(dá)水平低,MDR1/P-gp,MRP1,和Bcl-2表達(dá)水平低,BAX表達(dá)水平高。結(jié)論:1 5-FU敏感性高的胃癌組織中ZNF139表達(dá)水平低;2胃癌組織中5-FU敏感性同MDR1/P-gp,MRP1,BAX和Bcl-2相關(guān);3胃癌細(xì)胞中抑制ZNF139表達(dá)改善5-FU敏感性。第三部分沉默ZNF139抑制人胃癌細(xì)胞增殖的研究目的:胃癌是世界發(fā)病率第四的惡性腫瘤。胃癌的發(fā)生受到多種基因共同調(diào)節(jié),但是起關(guān)鍵作用的因子尚不明了。本研究旨在探討siRNA-ZNF139對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響及分子機(jī)制,將為開(kāi)展胃癌的基因治療提供理論基礎(chǔ)。方法:1分別以siRNA-scramble和siRNA-ZNF139表達(dá)載體轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞48小時(shí)后,在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光表達(dá)水平評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率;2利用real-time PCR和Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞中ZNF139 mRNA和蛋白表達(dá)水平;分別以siRNA-scramble和siRNAZNF139表達(dá)載體轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞48小時(shí)后,利用EdU染色和MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖水平;3分別以siRNA-scramble和siRNA-ZNF139表達(dá)載體轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞48小時(shí)后,利用real-time PCR方法和Western blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞Bcl-2和survivin基因mRNA和蛋白表達(dá)水平;4建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型,驗(yàn)證ZNF139對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:1在SGC7901細(xì)胞中siRNA-scramble和siRNA-ZNF139表達(dá)載體轉(zhuǎn)染效率達(dá)到85%;2同siRNA-scramble相比,轉(zhuǎn)染siRNA-ZNF139能夠顯著降低ZNF139 mRNA和蛋白水;3在SGC7901細(xì)胞中沉默ZNF139能夠抑制細(xì)胞生長(zhǎng);在SGC7901細(xì)胞中沉默ZNF139能夠降低Bcl-2和survivin基因mRNA和蛋白表達(dá)水平;4在人胃癌裸鼠原位移植瘤模型中沉默siRNA-ZNF139能夠顯著降低BCL2和survivin蛋白水平。結(jié)論:1在SGC7901細(xì)胞中沉默ZNF139能夠降低Bcl-2和survivin蛋白表達(dá),抑制細(xì)胞增殖;2在人胃癌裸鼠原位移植瘤模型中沉默ZNF139降低Bcl-2和survivin蛋白表達(dá)。第四部分miR-195-5p通過(guò)調(diào)節(jié)ZNF139影響胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的研究目的:胃癌一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)癌癥。中晚期胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性低影響其化療效果,導(dǎo)致胃癌致死率高。因此,研究胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的分子機(jī)制具有重要的科學(xué)意義。在第二部分中,我們證明了ZNF139能夠調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞耐藥性,但是ZNF139上游調(diào)控機(jī)制尚不清楚。microRNA是一簇長(zhǎng)度為21到22核苷酸的非編碼小RNA分子,它們具有重要的生物學(xué)功能,參與癌癥的發(fā)生和發(fā)展。microRNA以堿基互補(bǔ)原則結(jié)合在下游靶基因mRNA的3'-非編碼區(qū),影響其轉(zhuǎn)錄或者翻譯效率。在本研究中檢測(cè)了不同分化程度的胃癌細(xì)胞中miR-195-5p表達(dá)水平;分析miR-195-5p同胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的關(guān)系;探討miR-195-5p通過(guò)調(diào)節(jié)ZNF-139影響胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的分子機(jī)制。該研究為治療胃癌提供了新的治療靶標(biāo)。方法:1利用MTT法檢測(cè)低分化和高分化胃癌細(xì)胞對(duì)5-FU和L-OHP敏感性;2利用real-time PCR檢測(cè)不同分化程度胃癌組織中miR-195-5p和多藥耐藥性相關(guān)基因p-gp,mrp1和bcl-2 mRNA水平;3在MNK28細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-195-5p mimic或miR-195-5p inhibitor高表達(dá)或低表達(dá)miR-195-5p,檢測(cè)ZNF139和多藥耐藥性相關(guān)基因MDR1/P-gp,MRP1和Bcl-2蛋白表達(dá)水平;分析miR-195-5p對(duì)5-FU和L-OHP敏感性的影響;4生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)ZNF139是miR-195-5p下游靶基因;利用熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)和Western Blot證明miR-195-5p能夠直接結(jié)合在ZNF139mRNA 3'-UTR并抑制其蛋白表達(dá);5在MNK28細(xì)胞中共同轉(zhuǎn)染miR-195-5p inhibitor和ZNF-139 siRNA,檢測(cè)ZNF139和多藥耐藥性相關(guān)基因MDR1/P-gp,MRP1和Bcl-2蛋白表達(dá)水平;驗(yàn)證miR-195-5p通過(guò)ZNF139影響胃癌細(xì)胞多藥耐藥性。結(jié)果:1低分化胃癌細(xì)胞對(duì)5-FU和L-OHP敏感性高;2同高分化胃癌細(xì)胞相比,低分化胃癌細(xì)胞中miR-195-5p表達(dá)水平升高;多藥耐藥性相關(guān)基因p-gp,mrp1和bcl-2 mRNA水平降低;3高表達(dá)miR-195-5p抑制多藥耐藥性相關(guān)基因P-gp,MRP1和Bcl-2蛋白表達(dá),促進(jìn)胃癌細(xì)胞對(duì)5-FU和L-OHP敏感性;低表達(dá)miR-195-5p促進(jìn)多藥耐藥性相關(guān)基因P-gp,MRP1和Bcl-2蛋白表達(dá),抑制胃癌細(xì)胞對(duì)5-FU和L-OHP敏感性;4 ZNF139是miR-195-5p下游靶基因;miR-195-5p能夠直接結(jié)合在ZNF139 3'-UTR上抑制其蛋白表達(dá);5沉默ZNF139能夠逆轉(zhuǎn)miR-195-5p inhibitor對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的作用。結(jié)論:1 miR-195-5p同胃癌細(xì)胞多藥耐藥性相關(guān);2 miR-195-5p通過(guò)調(diào)節(jié)ZNF139影響胃癌細(xì)胞多藥耐藥性。
【圖文】：

圖 1 在胃癌組織中 ZNF139 mRNA 水平升高h(yuǎn)e mRNA level of ZNF139 was increased in the gastric canceNA levels of ZNF139 were significantly increased in gastr (normal group: normal gastric tissues; adjacent group: adjacetissues; GC group: gastric cancer tissues; n=21; *P<0.05 vs

圖 2 正常組織、癌旁組織和胃癌組織中 ZNF139 免疫組化染色（SP×400）Fig.2 The immunohistochemical staining of ZNF139 in normal tissues,adjacent tissues and gastric cancer tissues (SP×400)The number of ZNF139-staining-positive cells was significantly increased ingastric cancer tissues. (normal group: normal gastric tissues; adjacent group:adjacent gastric cancer tissues; GC group: gastric cancer tissues).
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：2688836