【摘要】：目的:研究DADS上調(diào)RORα表達(dá)是否能增強(qiáng)SGC-7901、SGC-7901/VCR和SGC-7901/T0901317細(xì)胞凋亡和對(duì)5-FU的敏感性。方法:RORα抑制劑T0901317處理SGC-7901細(xì)胞構(gòu)建RORα低表達(dá)SGC-7901細(xì)胞。DADS處理SGC-7901、SGC-7901/VCR、SGC-7901/T0901317與不同5-FU濃度處理下,MTT檢測(cè)各組SGC-7901細(xì)胞增殖抑制率的變化水平。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組SGC-7901細(xì)胞凋亡率變化情況。免疫熒光及Western blot檢測(cè)各組SGC-7901細(xì)胞中Bcl-2、XIAP、Caspase-3、P-gp蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.RORα低表達(dá)SGC-7901細(xì)胞的構(gòu)建采用RORα抑制劑T0901317處理SGC-7901細(xì)胞后,Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,RORα蛋白表達(dá)較SGC-7901細(xì)胞明顯減少(P0.05).DADS處理SGC-7901/T0901317,RORα表達(dá)水平明顯增高(P0.05)。2.DADS及下調(diào)RORα對(duì)SGC-7901細(xì)胞系增殖能力的影響MTT結(jié)果顯示:分別用濃度為1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L的5-Fu處理后,SGC-7901的增殖抑制率分別為1.95%、5.09%、13.43%、22.87%、46.63%,DADS處理后的SGC-7901組抑制率明顯增高,分別為4.33%、9.85%、22.5%、48.17%、57.44%(P0.05)。SGC-7901/VCR的增殖抑制率分別為0.18%、0.59%、1.01%、2.82%、4.69%(P0.05)。SGC-7901/VCR組用DADS處理后,其抑制率明顯增高,分別為2.23%、3.31%、7.3%、19.43%、27.91%(P0.05)。SGC-7901/T0901317組增殖抑制率分別為:1.24%、4.3%、11.83%、18.34%、40.89%,與SGC-7901組相比,增殖抑制率明顯降低(P0.05)。DADS處理后SGC-7901/T0901317組的抑制率2.24%、8.7%、19.54%、40.83%、52.34%明顯增高(P0.05)。結(jié)果提示:下調(diào)RORα表達(dá)可以增強(qiáng)細(xì)胞增殖能力,一定程度上增加了細(xì)胞對(duì)5-FU的耐藥性。DADS可以抑制SGC-7901、SGC-7901/VCR和SGC-7901/T0901317的細(xì)胞增殖能力,一定程度上降低細(xì)胞對(duì)5-Fu的耐藥性。3.DADS及下調(diào)RORα對(duì)SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示,SGC-7901、SGC-7901/VCR及SGC-7901/T0901317組凋亡率分別為6.8%、1.7%、2.91%。SGC-7901/VCR與SGC-7901/T0901317組較SGC-7901組凋亡率明顯減少(P0.05)。DADS處理后,SGC-7901、SGC-7901/VCR及SGC-7901/T0901317組凋亡率分別為12.66%、7.88%、9.54%,較未處理組細(xì)胞凋亡率明顯增加(P0.05)。說明RORα低表達(dá)可以減少SGC-7901細(xì)胞的凋亡,DADS可增加SGC-7901細(xì)胞的凋亡。4.DADS及下調(diào)RORα對(duì)SGC-7901細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,T0901317處理后的SGC-7901組較未處理SGC-7901組Bcl-2、P-gp、XIAP表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05),Casepase3蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)。DADS處理后,SGC-7901、SGC-7901/VCR及SGC-7901/T0901317組較未處理組Bcl-2、P-gp、XIAP蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05),Casepase3蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05)。免疫熒光顯示,T0901317處理后的SGC-7901組較未處理SGC-7901組Bcl-2、P-gp、XIAP熒光增強(qiáng),Casepase3熒光減弱。DADS處理后,SGC-7901、SGC-7901/VCR及SGC-7901/T0901317組較未處理組Bcl-2、P-gp、XIAP熒光減弱,Casepase3熒光增強(qiáng)。免疫熒光與Western blot結(jié)果提示的結(jié)論一致,說明耐藥相關(guān)蛋白及抑制凋亡蛋白可以通過RORα低表達(dá)上調(diào),而促凋亡蛋白可通過RORα低表達(dá)下調(diào)。DADS處理細(xì)胞后,耐藥相關(guān)蛋白及凋亡蛋白表達(dá)水平下調(diào),促凋亡蛋白的表達(dá)水平上調(diào)。結(jié)論:1.RORα低表達(dá)可上調(diào)Bcl-2、P-gp、XIAP與下調(diào)Casepase3表達(dá),抑制細(xì)胞凋亡,從而降低SGC-7901細(xì)胞對(duì)5-FU的化療敏感性。2.DADS可通過上調(diào)RORα下調(diào)Bcl-2、P-gp、XIAP與上調(diào)Casepase3表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞凋亡,增加SGC-7901細(xì)胞對(duì)5-FU的化療敏感性。
【圖文】：

tern blot 檢測(cè) SGC-7901 實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞系 RORα 蛋白Group The gray valueSGC-7901 0.775±0.02SGC-7901/T0901317 0.224±0.015*GC-7901/T0901317+DADS 0.483±0.019#*P<0.05 VS SGC-7901；#P<0.05 vs SGC-7901/T0901317度 5-Fu 處理后，DADS 及下調(diào) RORα 對(duì) 5 細(xì)胞增殖的影響表 3-3，圖 3-2 所示，根據(jù)實(shí)驗(yàn)得到的 OD 值可計(jì)算出estern blot 檢測(cè) SGC-7901 實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞系 RORα 蛋1: SGC-7901; 2: SGC-7901/T0901317; 3: SGC-7901/T0901317+*P<0.05 VS SGC-7901；#P<0.05 vs SGC-7901/T0901317

3 DADS 及下調(diào) RORα 對(duì) SGC-7901 細(xì)胞凋亡的影響流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)分析 DADS 及下調(diào) RORα 對(duì) SGC-7901 細(xì)胞凋亡的影 3-3、圖 3-4，表 3-4 所示，SGC-7901/VCR 和 SGC-7901/T0901317 組（+晚期凋亡）凋亡率分別為 1.7%與 2.91%，，明顯低于對(duì)照組 SGC-7901<0.05)，表明 RORα 低表達(dá)可抑制細(xì)胞凋亡。DADS 處理后，SGCC-7901/VCR 及 SGC-7901/T0901317 組的凋亡率分別明顯增加到 128%和 9.54% (P<0.05)，表明 DADS 能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡。1 2
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2688736