發(fā)布時間：2020-05-27 08:33

【摘要】：第一章:NIPAL1在食管鱗狀細(xì)胞癌的臨床意義及其作用機(jī)制初步研究研究背景及目的食管癌是最常見的第八大癌癥類型,也是全球第六大常見癌癥相關(guān)死亡原因[1]。在美國和其他西方國家,約50%的食管癌是腺癌。然而,在亞洲國家,大約90%的食管癌是鱗狀細(xì)胞癌(SCC),并且SCC是食管癌的主要組織學(xué)亞型,占全世界所有食管癌的80%[2]。目前,與食管鱗癌侵襲及轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子機(jī)制尚不清楚。因此,研究者們致力于深入挖掘這些有功能的生物標(biāo)記物在食管鱗癌中發(fā)生發(fā)展機(jī)制,因為這些標(biāo)記物可以使食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)患者能更準(zhǔn)確地分層,幫助臨床醫(yī)生做出最佳治療決策,從而改善患者預(yù)后。本課題組對3例ESCC患者的腫瘤組織及其癌旁正常食管上皮組織通過第二代深度測序技術(shù)進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測序。測序結(jié)果顯示NIPAL1是顯著下調(diào)基因之一,除了口腔鱗癌,NIPAL1在其他腫瘤中的表達(dá)及功能尚未有人報道。因此研究NIPAL1在食管鱗癌中的作用及機(jī)制是非常有必要的。研究方法1.臨床標(biāo)本的收集:包括60例食管鱗癌患者新鮮組織標(biāo)本和299例食管鱗癌患者石蠟包埋組織樣本。2.方法通過qRT-PCR檢測NIPAL1在60例食管鱗癌及其癌旁正常食管上皮組織中NIPAL1的表達(dá)情況;通過免疫組化檢測NIPAL1在299對食管癌組織芯片中的表達(dá)水平,并分析NIPAL1的表達(dá)水平與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。通過慢病毒(Lentivirus)載體成功構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)NIPAL1的食管癌細(xì)胞株EC109和EC9706。同時成功構(gòu)建穩(wěn)定敲降NIPAL1(shRNA)的食管癌細(xì)胞株KYSE510,通過CCK-8細(xì)胞增殖實驗、平板克隆形成實驗和裸鼠皮下成瘤實驗研究NIPAL1對細(xì)胞體內(nèi)外生長的影響;并通過transwell侵襲及遷移實驗和裸鼠尾靜脈肺轉(zhuǎn)移模型研究NIPAL1對細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響;在NIPAL1分子機(jī)制研究中,我們應(yīng)用western blotting、流式細(xì)胞術(shù)、F-actin、免疫熒光、JC-1、活細(xì)胞成像等實驗,分析并探討NIPAL1抑制腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的機(jī)制。研究結(jié)果結(jié)果顯示NIPAL1在食管鱗癌組織及大部分細(xì)胞株中普遍表達(dá)降低。同時NIPAL1低表達(dá)與ESCC患者的臨床分期(TNM)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后顯著相關(guān)。體內(nèi)外功能實驗顯示NIPAL1可有效抑制食管癌細(xì)胞增殖及遷移能力。機(jī)制研究結(jié)果顯示:1.NIPAL1通過負(fù)調(diào)控p-CDC2,使G2/M期發(fā)生阻滯;2.NIPAL1通過下調(diào)Bcl-2,促進(jìn)細(xì)胞凋亡;3.NIPAL1通過負(fù)調(diào)控slug表達(dá),抑制ESCC細(xì)胞的遷移;結(jié)論NIPAL1在食管鱗狀細(xì)胞癌中具有抑制腫瘤增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的功能,通過阻滯細(xì)胞G2/M期,抑制細(xì)胞有絲分裂及減少細(xì)胞骨架中絲狀偽足和板狀偽足形成發(fā)揮抑癌基因作用。第二章:抑癌基因GRHL1在食管鱗狀細(xì)胞癌中臨床意義及功能初步研究研究背景及目的GRHL1是作為GRHL家族的成員主要編碼轉(zhuǎn)錄因子,既往研究表明GRHL1有抑制腫瘤細(xì)胞克隆形成,增殖及體內(nèi)成瘤能力。本研究旨在評估GRHL1在食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)中的表達(dá)和預(yù)后關(guān)系。研究方法通過定量RT-PCR,瓊脂糖凝膠電泳和Western印跡(Western Blotting,WB)等實驗檢測GRHL1在ESCC細(xì)胞系和臨床ESCC組織中的表達(dá)水平。對266例食管癌石蠟組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,應(yīng)用cox回歸分析GRHL1和臨床病理因素與患者的預(yù)后關(guān)系。通過構(gòu)建GRHL1過表達(dá)及敲除的慢病毒載體評估GRHL1在ESCC細(xì)胞系中的功能。研究結(jié)果在大多數(shù)ESCC細(xì)胞系和臨床組織樣本中,GRHL1的mRNA和蛋白質(zhì)水平都表達(dá)下調(diào)。GRHL1的低表達(dá)與腫瘤侵襲深度(P = 0.008),臨床分期(P =0.004)和患者死亡(P0.001)等因素具有相關(guān)性。此外,Kaplan-Meier生存曲線結(jié)果顯示,GRHL1的低表達(dá)的患者術(shù)后總生存期(Overall Survival,OS)顯著降低(log-rank test,P0.001,HR,2.073;95%CI,1.491-2.881)。此外,Cox多因素分析顯示,GRHL1低表達(dá)和腫瘤分化程度是ESCC患者獨(dú)立預(yù)后因素(均P0.05)。此外,GRHL1過表達(dá)細(xì)胞可發(fā)揮體外抑制ESCC細(xì)胞侵襲的能力,敲降GRHL1后ESCC的侵襲能力增強(qiáng)。結(jié)論GRHL1低表達(dá)與食管鱗癌患者預(yù)后較差相關(guān),過表達(dá)GRHL1可抑制食管鱗癌細(xì)胞侵襲能力。GRHL1可作為一個獨(dú)立預(yù)后標(biāo)志,并且有望成為治療ESCC的新型潛在靶點(diǎn)。
【圖文】：

邐第一章ＮＩＰＡＬ１在食管鱗狀細(xì)胞癌中的臨床意義及其作用機(jī)制初步研究邐逡逑為／進(jìn)－步探究ＮＩＰＡＬ１低表達(dá)對食管淲癌患者預(yù)后的影響，我們通過單因逡逑素生存分析（ｌｏｇ邋－邋ｒａｎｋ邋ｔｅｓｔ邋）來繪制Ｋａｐｌａｎ邋－邋Ｍｅｉｅｒ生存曲線圖，結(jié)果顯示：逡逑ＮＩＰＡＬ１低表達(dá)組（ｎ邋＝邋１３４）患者的中位生存時間為１８個月，，而高表達(dá)組逡逑（ｎ邋＝邋１２３邋）患者的中位生存T間為２９個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜邋０．００１，圖逡逑２）。逡逑除此之外，腫瘤分化程度（Ｐ＜０．００１）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（Ｐ＜０．００１）、腫瘤浸潤逡逑（Ｐ＜０．００１）、臨床分期（Ｐ＜０．００１）均與患者的總生存時間存在顯著的相關(guān)性，逡逑而其年齡與性別則與之無明顯關(guān)系（表２）。逡逑

第四ＦＩ開始，不一樣組別的細(xì)胞生長速度開始有顯著差異（Ｐ＜０．０００１邋），這意逡逑味著食管癌細(xì)胞的增殖受到過表達(dá)ＮＩＰＡＬｌ的抑制；將ＮＩＰＡＬ１敲降后，則能夠逡逑加快食管癌細(xì)胞的生長速率。見圖３－３逡逑３６逡逑
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.1

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本文編號：2683257