【摘要】：目的:胰腺癌是惡性度最高的消化道腫瘤之一,多數(shù)患者得到診斷時(shí)已經(jīng)是進(jìn)展期,預(yù)后極差。然而,胰腺癌惡性生物學(xué)行為的調(diào)控機(jī)制仍不明確,探索影響其發(fā)生、發(fā)展機(jī)制的關(guān)鍵靶點(diǎn)至關(guān)重要。C6orf106定位于人染色體6p21.31中。一些研究表明,C6orf106在肺癌和乳腺癌中都有高表達(dá),且與多種腫瘤的侵襲和增殖行為密切相關(guān)。然而,其在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)和定位尚未闡明,并且C6orf106是否作為致癌因子起作用尚未在胰腺癌中得到證實(shí)。在本研究中,我們探討了C6orf106在胰腺癌組織和胰腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)及其與患者的臨床病理學(xué)關(guān)系,更進(jìn)一步研究了C6orf106在胰腺癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用及機(jī)制,該研究將為診斷和探索胰腺癌的治療靶點(diǎn)提供新的方向。方法:本研究的倫理批準(zhǔn)來自中國醫(yī)科大學(xué)地方試驗(yàn)委員會(huì),并已獲得患者的知情同意。原發(fā)腫瘤標(biāo)本取自2010年至2015年在中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院診斷為胰腺癌并接受完全切除的91例患者。所有患者均未接受過術(shù)前放療或化療。(1)免疫組織化學(xué)(IHC)檢測(cè)91例患者胰腺癌組織中C6orf106表達(dá)水平及定位,探討其表達(dá)的臨床病理學(xué)意義。(2)細(xì)胞培養(yǎng):Panc1,Capan2,SW1990和Miapaca2胰腺癌細(xì)胞系按常規(guī)培養(yǎng)。(3)細(xì)胞轉(zhuǎn)染:質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和siRNA處理,上調(diào)或下調(diào)胰腺癌細(xì)胞中C6orf106的表達(dá)水平。(4)細(xì)胞生物學(xué)行為檢測(cè):Transwell法,MTT,克隆形成測(cè)定等檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞的侵襲及增殖能力。(5)Western blot檢測(cè)C6orf106水平變化后其相關(guān)靶蛋白水平的變化。結(jié)果:1.C6orf106在胰腺癌標(biāo)本和細(xì)胞系中的表達(dá):C6orf106在胰腺癌旁組織的細(xì)胞質(zhì)中弱表達(dá),胰腺癌組織細(xì)胞質(zhì)中高表達(dá)。C6orf106在胰腺癌旁組織中的表達(dá)率(17.1%,6/35)顯著低于胰腺癌組織(44.0%,40/91 vs 17.1%,6/35,P0.001)。統(tǒng)計(jì)分析顯示,C6orf106的表達(dá)與胰腺癌T分期(P=0.010),陽性區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.012)和TNM分期(P=0.006)明顯相關(guān)。在胰腺癌細(xì)胞系中,Western印跡結(jié)果顯示C6orf106在Capan2細(xì)胞中高表達(dá),在Panc1細(xì)胞中低表達(dá),進(jìn)而選擇這兩種細(xì)胞系用于進(jìn)一步研究。2.過表達(dá)C6orf106可增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞的侵襲能力:在Panc1細(xì)胞中上調(diào)、在Capan2細(xì)胞中下調(diào)C6orf106表達(dá)水平,以探索其對(duì)胰腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。在過表達(dá)C6orf106后,Panc1細(xì)胞的侵襲能力明顯增強(qiáng);相應(yīng)地,下調(diào)Capan2細(xì)胞中的C6orf106表達(dá),其侵襲能力顯著降低。在Panc1細(xì)胞中轉(zhuǎn)染C6orf106質(zhì)粒后,Snail被上調(diào),E-cadherin被下調(diào)。在Capan2細(xì)胞中下調(diào)C6orf106表達(dá)后,其Snail的表達(dá)被下調(diào),E-cadherin被上調(diào)。然而,其他蛋白質(zhì)如Slug,Occludin,Zo-1和α-catenin對(duì)Panc1和Capan2細(xì)胞中C6orf106的過表達(dá)或減少的反應(yīng)沒有顯示出顯著變化。3.C6orf106促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖能力:Panc1細(xì)胞中過表達(dá)C6orf106顯著促進(jìn)增殖及克隆形成能力,而在Capan2細(xì)胞中用siRNA下調(diào)C6orf106后其增殖及克隆形成能力也下降。相應(yīng)的在C6orf106表達(dá)上調(diào)或下調(diào)后,Cyclin D1和Cyclin E1表達(dá)顯著增加或減少,而其他細(xì)胞周期蛋白表達(dá)沒有明顯改變。4.C6orf106通過激活ERK-P90RSK促進(jìn)腫瘤增殖和侵襲:我們發(fā)現(xiàn)在Panc1細(xì)胞中上調(diào)或Capan2細(xì)胞中下調(diào)C6orf106后,p-ERK及其下游蛋白p-P90RSK明顯上調(diào)或下調(diào),而其他關(guān)鍵信號(hào)通路蛋白如p-AKT,AKT,p-P38,P38,p-FAK以及FAK均未發(fā)現(xiàn)顯著變化。在Panc1細(xì)胞中過表達(dá)C6orf106后,將ERK特異性抑制劑PD98059加入培養(yǎng)基中。結(jié)果表明,添加PD98059可以抵消Snail,Cyclin D1和Cyclin E1的增加以及E-cadherin的減少以及P90RSK的磷酸化。這表明ERK和P90RSK可能是Snail,Cyclin D1和Cyclin E1的上游蛋白。結(jié)論:1、C6orf106在胰腺癌組織中高表達(dá),且與腫瘤T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期呈正相關(guān)。2、C6orf106可能通過激活ERK-P90RSK信號(hào)上調(diào)Snail,Cyclin D1,Cyclin E1表達(dá)和下調(diào)E-cadherin表達(dá),從而促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的侵襲和增殖能力。
【圖文】：

圖 1，C6orf106 在胰腺癌及癌旁組織的表達(dá)： C6orf106 在癌旁組織弱表達(dá)(a)； C6orf106 在癌組織細(xì)胞質(zhì)中高表達(dá)(b)。3.1.2 C6orf106 蛋白表達(dá)與胰腺癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系91 例胰腺導(dǎo)管腺癌患者，其中男 35 例，女 56 例；年齡 32-71 歲，平均年齡 5歲；腫瘤位于胰腺頭部 63 例，胰腺體尾部 28 例。根據(jù) AJCC（美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)）2016 年 TNM 惡性腫瘤分類的第 8 版，使用蘇木精 - 伊紅染色切片評(píng)估組織學(xué)

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文3 結(jié)果 C6orf106 在不同胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)1、1、為了研究 C6orf106 對(duì)胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，，我們?cè)诟鞣N胰腺癌(Panc1，SW1990，Miapaca2 和 Capan-2)檢測(cè) C6orf106 的表達(dá)。 Western顯示 C6orf106 在 Capan2 細(xì)胞中高表達(dá)，在 Panc1 細(xì)胞中低表達(dá)(圖 2)。因選擇這兩種細(xì)胞系用于進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.9

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本文編號(hào)：2682173