【摘要】：研究背景:原發(fā)性肝癌(簡(jiǎn)稱(chēng)肝癌)是指肝細(xì)胞和/或肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞發(fā)生的惡性腫瘤,其中肝細(xì)胞癌(HCC)最常見(jiàn)的組織類(lèi)型。肝癌的臨床治療以手術(shù)為主,但是由于肝癌起病隱匿,早期不易被察覺(jué),部分患者在發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)錯(cuò)過(guò)手術(shù)的最佳時(shí)機(jī)。隨著腫瘤分子機(jī)制和相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究的進(jìn)展,目前分子靶向藥的應(yīng)用已成為臨床上治療腫瘤的熱點(diǎn)之一,許多特異性靶向藥在相關(guān)腫瘤的治療中都獲得了良好的療效。然而,由于肝細(xì)胞癌的發(fā)生機(jī)制涉及眾多的因素,至今尚未發(fā)現(xiàn)針對(duì)肝細(xì)胞癌特異性靶點(diǎn)的靶向藥物。迄今,臨床上常用的腫瘤靶向藥物大多數(shù)為酪氨酸激酶抑制劑,而成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體家族(FGFRs)即是一類(lèi)酪氨酸激酶受體。目前已經(jīng)確定的該家族成員有五種(FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4及FGFR5),其中,FGFR4是FGFRs家族中分布最廣泛的成員。FGFR4主要表達(dá)在成熟的肝細(xì)胞內(nèi),但是,在HCC中的研究報(bào)道較少。Her2蛋白是由Her2原癌基因編碼的跨膜蛋白,同樣屬于酪氨酸激酶受體家族成員。正常情況下,Her2蛋白參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化等一系列正常的生理活動(dòng)。當(dāng)受到致癌因素作用之后Her2基因可以異�；罨�,主要表現(xiàn)為基因擴(kuò)增導(dǎo)致蛋白過(guò)度表達(dá),刺激細(xì)胞持續(xù)增生。目前,在乳腺癌、胃癌等許多惡性腫瘤組織中已發(fā)現(xiàn)由Her2基因擴(kuò)增導(dǎo)致的Her2蛋白過(guò)表達(dá)。Her2單克隆抗體(曲妥珠單抗等)在治療晚期乳腺癌和胃癌的臨床應(yīng)用中得到了良好的效果,但有關(guān)Her2與肝細(xì)胞癌的關(guān)系,研究報(bào)道較少。雌激素受體(ER)主要包括ERα、ERβ兩種類(lèi)型,在人體內(nèi)以ERα為主。ERα蛋白的分子量為66KDa,因此也被稱(chēng)為ERα66。由于ERα66基因的選擇性剪接作用,產(chǎn)生了ERα46、ERα36等剪接變異體。ERα66蛋白主要在腫瘤細(xì)胞核中表達(dá),而ERα36蛋白主要在腫瘤細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞膜中表達(dá)。有研究報(bào)道,ERα36可能通過(guò)某種途徑上調(diào)Her2蛋白的表達(dá),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,但有關(guān)ERα與肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究報(bào)道較少。乙肝病毒(HBV)是誘發(fā)慢性肝病的重要因素之一,我國(guó)大約有80%的肝細(xì)胞癌是由于感染HBV所導(dǎo)致的,但是有關(guān)HBV與HCC中FGFR4蛋白,Her2蛋白及ERα蛋白表達(dá)之間的關(guān)系,國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。本研究的目的是用免疫組化、熒光原位雜交以及PCR-熒光探針?lè)椒?研究乙肝病毒相關(guān)性肝細(xì)胞癌組織中FGFR4,Her2,ERα,HBsAg蛋白的表達(dá)、Her2基因的擴(kuò)增以及HBV DNA含量的變化;分析各指標(biāo)之間有無(wú)相關(guān)性以及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,為進(jìn)一步研究HCC的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制提供新方向,為尋找肝細(xì)胞癌的分子治療靶點(diǎn)提供研究基礎(chǔ)。方法:1.材料來(lái)自大連醫(yī)科大學(xué)附屬二院2014年1月—2017年3月期間臨床病理資料完整的術(shù)后肝組織存檔蠟塊103例,其中有HBV感染病史的肝細(xì)胞癌(HCC+HBV組)50例,無(wú)HBV感染病史的肝細(xì)胞癌(HCC組)13例,有HBV感染病史的肝硬化組20例,正常肝組織20例。2.采用免疫組化方法檢測(cè)組織中FGFR4、Her2、ERα及HBsAg蛋白的表達(dá);采用熒光原位雜交(FISH)方法檢測(cè)癌組織中Her2基因的擴(kuò)增狀況;采用PCR-熒光探針?lè)z測(cè)癌及癌旁組織中HBV DNA的含量。3.使用SPSS21.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料的組間比較采用c2檢驗(yàn),Fisher確切概率法;計(jì)量資料的組間差異采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),單因素方差分析;變量間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)系數(shù),以P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.免疫組化結(jié)果(1)FGFR4蛋白表達(dá):1)肝細(xì)胞癌組織(包括HCC+HBV組和HCC組)中FGFR4的表達(dá)量低于癌旁組織(P0.05);2)在HCC+HBV組,癌組織中FGFR4的表達(dá)量與腫瘤最大徑有關(guān);腫瘤最大徑3cm的癌組織中FGFR4表達(dá)量高于腫瘤最大徑≥3cm的癌組織中表達(dá)量(P0.05)。3)在HCC+HBV組,癌旁組織中FGFR4的表達(dá)量與腫瘤的臨床分期有關(guān);T1+T2期的癌旁組織中FGFR4表達(dá)量低于T3+T4期癌旁組織FGFR4的表達(dá)量(P0.05)。(2)Her2蛋白表達(dá):癌組織(包括HCC+HBV組和HCC組)的Her2蛋白表達(dá)評(píng)分為(0)46例、(1+)8例、(2+)9例、(3+)0例;在癌旁組織中未見(jiàn)Her2蛋白表達(dá)。(3)ERα蛋白表達(dá):1)ERα蛋白在細(xì)胞核中的表達(dá)(核陽(yáng)性):癌組織中(包括HCC+HBV組和HCC組)ERα核陽(yáng)性率顯著低于在癌旁組織中ERα核陽(yáng)性率(P0.05);癌組織中ERα核陽(yáng)性率與性別相關(guān),女性肝細(xì)胞癌ERα核陽(yáng)性率高于男性肝細(xì)胞癌ERα核陽(yáng)性率(P0.05)。2)ERα蛋白在細(xì)胞質(zhì)/膜中的表達(dá)(質(zhì)/膜陽(yáng)性):在HCC+HBV組,癌組織中ERα質(zhì)/膜陽(yáng)性率明顯高于癌旁組織、肝硬化組及正常組中ERα質(zhì)/膜的陽(yáng)性率;在HCC組,癌組織中ERα質(zhì)/膜陽(yáng)性率高于肝硬化組和正常組的ERα質(zhì)/膜的陽(yáng)性率,以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)HBsAg蛋白的表達(dá):在HCC+HBV組,癌旁組織中HBs Ag的陽(yáng)性率(50%)明顯高于癌組織HBsAg的陽(yáng)性率(2%,P0.05)。2.FISH檢測(cè)Her2基因擴(kuò)增結(jié)果針對(duì)Her2免疫組化評(píng)分為(2+)的樣本,用FISH方法檢測(cè)癌組織中Her2基因的擴(kuò)增情況,結(jié)果顯示,未檢測(cè)到Her2基因擴(kuò)增。3.PCR-熒光探針?lè)z測(cè)組織中HBV DNA結(jié)果(1)癌和癌旁組織中均檢測(cè)到HBV DNA,但兩者的HBV DNA含量(Ct值)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(2)HBsAg陽(yáng)性組的癌組織和癌旁組織中的HBV DNA含量分別高于HBsAg陰性組的癌組織和癌旁組織中的HBV DNA含量(P0.05)。結(jié)論:1.肝細(xì)胞癌組織中FGFR4蛋白表達(dá)量低于癌旁組織;腫瘤較小的癌組織FGFR4蛋白的表達(dá)量高于腫瘤較大的癌組織中FGFR4蛋白的表達(dá)量;腫瘤分期較低的癌旁組織中FGFR4蛋白的表達(dá)量低于腫瘤分期較高的癌旁組織FGFR4的表達(dá)量;提示FGFR4蛋白在肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能起抑制作用。2.肝細(xì)胞癌組織中可檢測(cè)到Her2蛋白表達(dá),但未檢測(cè)到Her2基因擴(kuò)增,提示Her2蛋白在肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中所起的作用有待進(jìn)一步研究。3.肝細(xì)胞癌組織中ERα蛋白核陽(yáng)性率低于癌旁組織,質(zhì)/膜陽(yáng)性率高于癌旁組織;女性肝細(xì)胞癌ERα蛋白核陽(yáng)性率高于男性肝細(xì)胞癌ERα核陽(yáng)性率,提示ERα蛋白在細(xì)胞核中表達(dá)可能起著抑制肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的作用,而在細(xì)胞質(zhì)/膜中表達(dá)的ERα蛋白則可能起著促進(jìn)肝癌發(fā)生、發(fā)展的作用。4.在HBsAg陽(yáng)性組中,癌和癌旁組織的HBV DNA均高于HBsAg陰性組中癌及癌旁組織的HBV DNA含量,提示HBsAg的表達(dá)量可以反應(yīng)肝組織中HBV DNA的相對(duì)含量;HBsAg陽(yáng)性是肝細(xì)胞癌不良預(yù)后因素之一。5.肝細(xì)胞癌組織中HBsAg表達(dá)量低于癌旁組織,而HBV DNA含量與癌旁組織無(wú)差異或高于癌旁組織中的HBV DNA含量;提示在肝細(xì)胞癌組織中HBV的復(fù)制水平低于癌旁組織,而HBV DNA的整合能力高于癌旁組織。
【圖文】：

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文、肝細(xì)胞癌和癌旁組織中 HBV DNA（ PCR 熒光-探針?lè)ǎz測(cè)結(jié)果（1）由于實(shí)驗(yàn)所用到的樣本均取自存檔蠟塊，為了避免由于樣本固定時(shí)間造成的誤差，本研究的選擇標(biāo)準(zhǔn)為同一個(gè)蠟塊上既有足夠的癌組織，也有足癌旁組織。最終篩選出符合條件的肝癌（HCC+HBV）樣本 21 例。結(jié)果癌組t 值為 31.24±1.42，癌旁組織 Ct 值為 32.55±3.57，兩者的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>0.05，，圖 19）。

肝細(xì)胞癌，a癌組織，b癌旁組織HE100倍放大
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2681970