發(fā)布時(shí)間：2020-05-25 22:32

【摘要】：胰腺癌(Pancreatic Cancer,PC)是一種惡性程度極高的消化系統(tǒng)腫瘤。因其診斷困難且治療預(yù)后不良,胰腺癌患者5年生存率不足5%,存活期中位數(shù)僅為6個(gè)月。因此,尋找有效的靶向治療藥物對(duì)提高胰腺癌的療效、改善胰腺癌患者的生存率具有重大意義。目前,大量研究表明在胰腺癌中會(huì)高頻發(fā)生c-Myc的擴(kuò)增和過表達(dá),且c-Myc蛋白異常表達(dá)與KRAS突變相關(guān),是可能的效應(yīng)分子。因此,抑制c-Myc蛋白表達(dá)成為胰腺癌治療的潛在策略。c-Myc是參與胰腺癌早期發(fā)展的重要癌基因,與不良預(yù)后密切相關(guān)。一方面它直接參與細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡、蛋白合成等多種生理進(jìn)程,另一方面c-Myc也能對(duì)約15%的人類基因的表達(dá)發(fā)生間接調(diào)控作用。c-Myc蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子,目前仍然缺乏直接靶向的特異性抑制劑。本課題通過體內(nèi)外模型系統(tǒng)篩選發(fā)現(xiàn)PI3K(phosphoinositide 3-kinase)和HDAC(histone deacetylase)雙靶點(diǎn)抑制劑CUDC-907對(duì)胰腺癌細(xì)胞具有顯著的增殖抑制活性,并對(duì)其抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行了初步探索。已有文獻(xiàn)報(bào)道,CUDC-907在分子水平上能直接靶向PI3K通路和HDAC通路,同時(shí)能引起c-Myc蛋白的顯著性變化。然而,CUDC-907如何通過調(diào)控c-Myc進(jìn)而影響腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)制尚有待研究。首先,我們通過Western Blot檢測(cè)化合物CUDC-907對(duì)靶點(diǎn)PI3K和HDAC的抑制效應(yīng),明確了CUDC-907作用劑量依賴性的降低胰腺癌Aspc-1,PANC-1和Capan-1細(xì)胞株中磷酸化AKT的水平,并上調(diào)組蛋白H3K27ac的水平。同時(shí),通過Western Blot技術(shù)以及RT-PCR技術(shù)檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞中c-Myc蛋白和mRNA水平的變化都發(fā)生了顯著的下調(diào),該結(jié)果提示c-Myc是受CUDC-907間接調(diào)控的關(guān)鍵蛋白之一。繼而,利用si RNA敲降c-Myc蛋白或構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)c-Myc細(xì)胞株兩種手段,從正反兩面共同驗(yàn)證了c-Myc蛋白的表達(dá)量與細(xì)胞增殖活性直接相關(guān)。為進(jìn)一步探索CUDC-907如何通過HDACs和PI3K抑制c-Myc蛋白的表達(dá),我們分別選取PI3K和HDACs的單靶點(diǎn)抑制劑GDC-0941和Vorinostat(SAHA)做陽性對(duì)照進(jìn)行研究。結(jié)果顯示,CUDC-907和GDC-0941在作用后使p-AKT表達(dá)量下調(diào),進(jìn)而促進(jìn)c-Myc在58位點(diǎn)絲氨酸磷酸化而被泛素化酶識(shí)別并通過蛋白酶體降解,最終導(dǎo)致c-Myc蛋白本底水平的下調(diào);而另一方面,CUDC-907通過抑制HDAC通路來抑制c-Myc蛋白的合成。CUDC-907能抑制HDAC家族成員之一HDAC6蛋白酶活,通過HDAC6-FOXO1-c-Myc信號(hào)軸抑制c-Myc蛋白的轉(zhuǎn)錄來抑制c-Myc蛋白合成�；谝陨蠙C(jī)制研究,我們對(duì)CUDC-907抗胰腺癌的藥效學(xué)做進(jìn)一步評(píng)價(jià)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,CUDC-907可劑量依賴性地將胰腺癌細(xì)胞阻滯于G2/M期,并顯著性地誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞的凋亡,最終導(dǎo)致胰腺癌細(xì)胞死亡。這一結(jié)果與Western Blot檢測(cè)相應(yīng)濃度化合物作用下周期、凋亡通路關(guān)鍵蛋白的變化一致。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,CUDC-907對(duì)人源胰腺癌細(xì)胞株Aspc-1建立的裸小鼠皮下移植瘤模型同樣具有顯著的生長(zhǎng)抑制作用,且給藥組瘤組織中c-Myc蛋白表達(dá)顯著低于溶劑對(duì)照組。這一系列實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了化合物CUDC-907主要通過抑制c-Myc蛋白表達(dá)發(fā)揮抗胰腺癌的活性。綜上,CUDC-907具有顯著的體內(nèi)外抗胰腺癌增殖活性,具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。我們發(fā)現(xiàn)在CUDC-907發(fā)揮抗胰腺癌增殖過程中,c-Myc蛋白發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用,且PI3K通路和HDAC通路以不同的方式共同調(diào)控c-Myc蛋白的表達(dá),這一機(jī)制的研究有望為抗胰腺癌藥物的研究和胰腺癌治療提供新的思路。
【圖文】：

根據(jù)胰

圖 1.1 胰腺癌的生理微環(huán)境特征Pancreatic adenocarcinoma. N Engl J Med. 2014 Sep 11;371(11):1039-49.綜上所述，胰腺癌仍然是一種常見的、致死率極高的腫瘤類型，目前研究者正在針對(duì)可切除的局部胰腺癌患者的治療方案積極展開研究，，已有的研究已
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號(hào)：2680840