【摘要】：研究背景白血病是血液系統(tǒng)惡性腫瘤,其發(fā)生的主要機(jī)制是由于造血細(xì)胞在某一分化階段出現(xiàn)了分化障礙,不能繼續(xù)終末分化,而保留其惡性增殖的能力。目前治療白血病的方法主要有造血干細(xì)胞移植及化療,但造血干細(xì)胞移植費(fèi)用昂貴且受供者來(lái)源限制,化療副作用及微小殘留病灶使白血病易復(fù)發(fā)。因此尋找新的治療白血病的方法和藥物成為白血病領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。其中將白血病細(xì)胞向免疫細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化是目前研究的熱點(diǎn),擁有良好的應(yīng)用前景。樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)是體內(nèi)功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞(APC),在抗腫瘤、抵抗病原微生物感染及維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮著重要作用。但發(fā)現(xiàn)白血病患者DC數(shù)量少、功能低以及伴有發(fā)育及成熟障礙,不能有效激發(fā)適應(yīng)性免疫應(yīng)答,殺傷白血病細(xì)胞。因此提高白血病患者體內(nèi)樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)的數(shù)量及功能將為治療白血病提供新的途徑。直接將白血病細(xì)胞誘導(dǎo)成DC為有效途徑,這種白血病來(lái)源的DC含白血病相關(guān)的特異性抗原,能夠直接把白血病抗原呈遞給T細(xì)胞,進(jìn)而殺傷白血病細(xì)胞。目前,主要通過(guò)細(xì)胞因子將白血病細(xì)胞定向向DC誘導(dǎo),但是由于其誘導(dǎo)機(jī)制不明確導(dǎo)致誘導(dǎo)DC效率不高、功能不穩(wěn)定,因此明確其誘導(dǎo)分化機(jī)制是提高誘導(dǎo)效率與功能的突破口。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)家族成員在調(diào)控DC發(fā)育分化過(guò)程中發(fā)揮重要作用,研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子可以通過(guò)活化STAT3促進(jìn)DC特異性核轉(zhuǎn)錄因子E2-2轉(zhuǎn)錄進(jìn)而促進(jìn)漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(pDC)發(fā)育分化,也可以通過(guò)STAT5促進(jìn)DC特異性核轉(zhuǎn)錄因子ID2轉(zhuǎn)錄進(jìn)而促進(jìn)經(jīng)典樹(shù)突狀細(xì)胞(cDC)的分化發(fā)育。目前,有關(guān)調(diào)控STAT誘導(dǎo)DC分化的研究主要圍繞正常人單核細(xì)胞誘導(dǎo)方面,但其在影響白血病細(xì)胞定向分化為DC中的作用尚不清楚。近年來(lái),隨著人類基因組計(jì)劃的完成及表觀遺傳學(xué)發(fā)展,長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,LncRNA)對(duì)基因表達(dá)及生理功能的調(diào)控成為新興熱點(diǎn)。LncRNA是指長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的RNA,本身不編碼蛋白質(zhì),但可通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控或翻譯后修飾等表觀遺傳調(diào)控作用影響其靶向物的表達(dá)或功能。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)LncRNA在體細(xì)胞的分化發(fā)育、腫瘤的惡性轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。在DC細(xì)胞中同樣也表達(dá)大量的DC,但其在DC的發(fā)育分化中的作用知之甚少,因此此方向的深入探索有望成為靶向治療白血病的突破口。研究目的本研究以人急性單核白血病細(xì)胞THP-1為研究對(duì)象,利用粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞—集落刺激因子(GM-CSF)聯(lián)合白細(xì)胞介素4(IL-4)誘導(dǎo)其向DC分化,用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)THP-1來(lái)源DC成熟,探討THP-1向樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)誘導(dǎo)分化機(jī)制,以期為白血病的治療提供新的靶點(diǎn)和途徑。實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)將人急性單核白血病細(xì)胞THP-1隨機(jī)分為兩組,實(shí)驗(yàn)組以粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞-集落刺激因子(GM-CSF)聯(lián)合白細(xì)胞介素4(IL-4)誘導(dǎo)其向DC分化,脂多糖(LPS)誘導(dǎo)DC成熟,對(duì)照組培養(yǎng)于RPMI1640完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)第7天,收集兩組細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC表面標(biāo)志性分子CD11c及DC表面功能分子(共刺激分子CD80、CD86、組織相容性抗原HLA-DR、趨化因子CCR7表達(dá),qPCR法檢測(cè)STAT5及ID2轉(zhuǎn)錄水平,Western blot檢測(cè)STAT5總蛋白及磷酸化水平。在此基礎(chǔ)上,本課題利用Agilent高通量基因芯片對(duì)白血病源DC分化過(guò)程中靶向ID2的LncRNA進(jìn)行了初步的篩選,并通過(guò)qPCR法對(duì)其進(jìn)行表達(dá)驗(yàn)證和機(jī)制探討。實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與對(duì)照組相比,THP-1細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后可見(jiàn)明顯的樹(shù)突狀突起,呈現(xiàn)DC形態(tài)學(xué)變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示THP-1細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后細(xì)胞表面DC標(biāo)志性分子CD11c及功能分子(共刺激分子CD80、CD86、組織相容性抗原HLA-DR、趨化因子CCR7表達(dá)均出現(xiàn)明顯升高現(xiàn)象(P0.05);qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示,THP-1細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后STAT5、DC特異性核轉(zhuǎn)錄因子ID2轉(zhuǎn)錄水平升高(P0.05);Western blot檢測(cè)STAT5總蛋白表達(dá)及磷酸化水平均出現(xiàn)明顯升高現(xiàn)象(P0.05)。我們對(duì)白血病源DC分化過(guò)程中靶向ID2 LncRNA篩選結(jié)果顯示LncRNA Lnc-CHCHD7-4-1出現(xiàn)明顯升高(P0.05),LncRNA ENST00000222753出現(xiàn)明顯降低(P0.05);相關(guān)性分析顯示LncRNA Lnc-CHCHD7-4-1與ID2表達(dá)呈顯著正相關(guān)(Pearson r=0.9944,P0.05),LncRNA ENST00000222753與ID2表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(Pearson r=-0.8830,P0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論以上結(jié)果表明,THP-1細(xì)胞為白血病源DC敏感細(xì)胞株,在白血病源DC誘導(dǎo)分化過(guò)程中STAT信號(hào)通路發(fā)揮重要作用;STAT5通過(guò)調(diào)控ID2表達(dá)在白血病源DC誘導(dǎo)分化過(guò)程中發(fā)揮重要作用。同時(shí),我們通過(guò)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)LncRNALnc-CHCHD7-4-1與ID2呈顯著正相關(guān),而LncRNA ENST00000222753與ID2呈顯著性負(fù)相關(guān),提示LncRNA調(diào)控STAT5/ID2信號(hào)通路可能是白血病THP-1細(xì)胞向DC分化的關(guān)鍵機(jī)制之一,靶向調(diào)控LncRNA/STAT5信號(hào)通路可能成為白血病診斷、治療及預(yù)后評(píng)估的潛在有效新靶點(diǎn)與途徑。
【圖文】：

圖 1. STAT 信號(hào)通路簡(jiǎn)介研究表明 STAT 家族在樹(shù)突狀細(xì)胞的分化發(fā)育中發(fā)揮非常關(guān)鍵的作用。樹(shù)突發(fā)育主要由細(xì)胞因子調(diào)控，在細(xì)胞因子的作用下 STAT 的酪氨酸被細(xì)胞因子 JAK 激酶磷酸化，STAT 酪氨酸磷酸化導(dǎo)致 STAT 與受體分離然后二聚化，

圖 2. 倒置顯微鏡觀察誘導(dǎo)前后細(xì)胞形態(tài)變化（×200）注: A 為對(duì)照組 THP-1 細(xì)胞形態(tài)；B 為細(xì)胞因子誘導(dǎo)后觀察組細(xì)胞形態(tài)。.1.2 THP-1 誘導(dǎo)前后 DC 表面特征性分子 CD11c 的表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R733.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 芮強(qiáng);何震宇;;LncRNA與miRNA的交互作用及調(diào)控機(jī)制對(duì)腫瘤發(fā)生與發(fā)展過(guò)程的影響[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年09期

2 謝建興;李慧慧;;白血病細(xì)胞來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞臨床研究進(jìn)展[J];江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);2007年05期

3 李英華;羅建民;;白血病形成中JAK/STAT信號(hào)通路的持續(xù)激活[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2006年05期

4 李英華;;JAK/STAT信號(hào)通路與白血病[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2006年04期

5 胡欣,萬(wàn)大方;JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進(jìn)展及其與腫瘤的關(guān)系[J];腫瘤;2005年04期

6 盛立霞,謝曉寶,邱國(guó)強(qiáng);樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)抗白血病免疫[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);2004年03期

7 王正飛,顧宗江,張學(xué)光;白血病細(xì)胞來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞在治療白血病中的應(yīng)用[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2004年01期

8 嚴(yán)匡華,尤勝國(guó),卞壽庚,馬冠杰,葛薇,馬雙,劉世和,趙春華;細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)急性髓系白血病細(xì)胞分化為樹(shù)突狀細(xì)胞[J];中華血液學(xué)雜志;2003年07期

9 羅云萍,李用國(guó),蔡大川,任紅;白血病細(xì)胞系來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)及其抗腫瘤免疫功能研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2002年03期

10 曹雪濤;以樹(shù)突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療和基因治療研究進(jìn)展[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;1999年03期

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本文編號(hào)：2679111