發(fā)布時間：2020-05-22 05:58

【摘要】：研究內(nèi)容:本研究分為三個章節(jié):1、基于TCGA數(shù)據(jù)庫對金屬蛋白酶ADAMTS18與胃癌臨床預后的關系研究;2、ADAMTS18基因與胃癌臨床病理特征的關系研究;3、ADAMTS18基因沉默及過表達對胃癌細胞生物學行為的影響。第一章基于TCGA數(shù)據(jù)庫對金屬蛋白酶ADAMTS18與胃癌臨床預后的關系研究目的:探討金屬蛋白酶ADAMTS18在胃癌中的表達及臨床價值,預測ADAMTS18調(diào)控腫瘤發(fā)生發(fā)展可能的機制。方法:從在線分析工具GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)獲取胃癌組織與胃正常組織ADAMTS18基因表達水平差異。從癌癥基因數(shù)據(jù)庫(the cancer genome atlas,TCGA)收集胃癌患者基因表達譜和臨床病理資料數(shù)據(jù)集,分析ADAMTS18基因表達水平與患者臨床病理參數(shù)的相關性,并利用Kaplan-Meier乘積極限法和Cox比例風險回歸模型分析其對患者臨床預后的影響。利用Gene MANIA和STRING在線數(shù)據(jù)庫構(gòu)建ADAMTS18基因、蛋白相互作用網(wǎng)絡,并富集分析ADAMTS18基因參與腫瘤發(fā)生發(fā)展可能涉及的基因和相關信號通路。結(jié)果:ADAMTS18基因在胃癌組織中表達水平明顯高于其在正常胃組織中表達水平。ADAMTS18基因m RNA在胃癌組織中的表達水平與腫瘤分級顯著相關(P0.001),ADAMTS18基因表達量越高,腫瘤分級越高,惡性程度越高。ADAMTS18表達越高預后越差,生存期越短(P=0.002 HR=1.809,95%CI=1.236-2.649)。ADAMTS18基因富集分析涉及到細胞外基質(zhì)重塑、腫瘤壞死因子反應、金屬肽酶活性等相關基因集。結(jié)論:ADAMTS18基因高表達是胃癌患者術后預后不良因素,可作為判斷患者不良預后的生物學標志物。第二章ADAMTS18基因與胃癌臨床病理特征的關系研究目的:探討ADAMTS18基因在胃癌組織中的表達情況,分析其與患者臨床病理參數(shù)的相關性。方法:收集2016年10月至2017年2月廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院胃腸腺體外科胃癌患者經(jīng)手術治療和病理診斷為胃癌的癌組織和癌旁組織40對以及相應的臨床病理資料,以免疫組化法檢測ADAMTS18蛋白在胃癌組織及癌旁組織表達水平,以Trizol法提取癌組織和癌旁組織總RNA,實時熒光定量PCR檢測ADAMTS18 m RNA表達水平,并分析癌組織中ADAMTS18mRNA表達水平與臨床病理參數(shù)相關性。結(jié)果:免疫組化法證明胃癌組織中ADAMTS18蛋白顯著高于癌旁組織(P0.001),胃癌組織中ADAMTS18基因m RNA表達水平顯著高于癌旁組織(P=0.001),ADAMTS18基因m RNA表達水平與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關(P=0.013,P=0.001,P=0.001)。結(jié)論:ADAMTS18基因m RNA和蛋白在胃癌組織中表達水平顯著升高,且胃癌組織中ADAMTS18表達水平與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關。第三章ADAMTS18基因沉默及過表達對胃癌細胞生物學行為的影響目的:探討ADAMTS18基因沉默及過表達對胃癌細胞系SGC-7901、MGC-803細胞增殖、遷移及侵襲力的影響。方法:利用慢病毒介導的基因沉默和過表達技術,在胃癌細胞系SGC-7901和MGC-803中構(gòu)建ADAMTS18基因沉默和過表達的穩(wěn)轉(zhuǎn)株,實時熒光定量PCR和Western Blot檢測ADAMTS18過表達和沉默效率,MTT法實驗檢測胃癌細胞ADAMTS18基因沉默和過表達后對細胞增殖能力的影響,劃痕實驗、Transwell實驗檢測ADAMTS18基因沉默和過表達后對胃癌細胞系的遷移及侵襲能力的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建ADAMTS18基因沉默和過表達的胃癌細胞系SGC-7901和MGC-803穩(wěn)轉(zhuǎn)株,MMT法實驗顯示ADAMTS18基因沉默后胃癌細胞SGC-7901和MGC-803增殖能下降,劃痕實驗、Transwell實驗表明ADAMTS18沉默后胃癌細胞SGC-7901和MGC-803遷移和侵襲能力減弱,而相反ADAMTS18基因過表則達促進胃癌細胞系SGC-7901和MGC-803的增殖、遷移和侵襲能力。結(jié)論:慢病毒介導的ADAMTS18基因沉默抑制胃癌細胞系體外增殖、遷移和侵襲能力;ADAMTS18過表達促進胃癌細胞系體外增殖、遷移和侵襲能力。
【圖文】：

SPSS22.0 統(tǒng)計學軟件被用來統(tǒng)計學分析。GraphPad Prism v.5.0 用來作基因表達散點圖，臨床病理相關性分析采用χ2檢驗及 Fisher 確切概率Kaplan-Meier 乘積極限法和 log-rank 檢驗法來進行生存分析，COX 比例險回歸模型進行多因素分析，P< 0.05 認為有統(tǒng)計顯著性。2 結(jié)果2.1 胃癌組織與胃正常組織中 ADAMTS18 基因表達差異從在線分析工具 GEPIA 獲得胃癌組織與胃正常組織表達差異分析果，納入分析胃癌組織 408 例，正常胃組織 211 例。結(jié)果顯示 ADAMT基因在胃癌組織中明顯高表達，但結(jié)果卻顯示與正常胃組織中 ADAMT基因表達水平比較，差異無統(tǒng)計學顯著性（圖 1-1）。

圖 1-2 TCGA 數(shù)據(jù)庫中基因 ADAMTS18 表達散點圖Figure1-2 Scatter plots ofADAMTS18 expression level in TCGA18 基因表達與臨床病理學參數(shù)相關性 數(shù)據(jù)庫總共納入 300 例各項臨床病理資料都完整 例，女性 109 例，，年齡 30-90 歲，中位年齡為 67 歲與胃癌患者臨床病理特征的關系見表 1-1。分析
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

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3 Hiroyuki Yamamoto;Yoshiyuki Watanabe;Tadateru Maehata;Ryo Morita;Yoshihito Yoshida;Ritsuko Oikawa;Shinya Ishigooka;Shun-ichiro Ozawa;Yasumasa Matsuo;Kosuke Hosoya;Masaki Yamashita;Hiroaki Taniguchi;Katsuhiko Nosho;Hiromu Suzuki;Hiroshi Yasuda;Yasuhisa Shinomura;Fumio Itoh;;An updated review of gastric cancer in the next-generation sequencing era:Insights from bench to bedside and vice versa[J];World Journal of Gastroenterology;2014年14期

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本文編號：2675547