miR-34a在地方性肺癌細胞XWLC-05和YTMLC中的作用及其靶位點

發(fā)布時間：2020-05-21 19:38

【摘要】：目的:本研究的主要目的是探討mi R-34a在地方性肺腺癌細胞株XWLC-05、肺鱗癌細胞株YTMLC及其他非小細胞肺癌細胞株中的表達情況,并探討mi R-34a在地方性肺腺癌細胞株XWLC-05、肺鱗癌細胞株YTMLC以及普通肺腺癌細胞株H157的增殖、遷移、侵襲中的作用并驗證其在非小細胞肺癌(NSCLC)XWLC-05和YTMLC中的相關靶蛋白。方法:復蘇并傳代人地方性肺癌細胞株XWLC-05、YTMLC,普通肺癌細胞株H157,將XWLC-05、YTMLC、H157三株細胞分為三個組,分別為空白對照組、陰性對照組、實驗組。實驗組采用p GCMV/EGFP-hsa-mi R-34a mimics進行轉染;陰性對照組采用脂質體介導空質粒p GCMV/EGFP-NC進行轉染;空白對照組不做任何處理。采用RT-PCR檢測mi R-34a在多種肺癌細胞株中的相對表達量;采用劃痕試驗比較各組細胞的遷徙能力;每組樣本的侵襲能力采用Trans-well法來檢測;采用MTT試驗比較各組細胞的增殖能力;對于凋亡的定性測定使用透射電鏡實驗方法;對各組樣本凋亡的相對數(shù)量進行定量檢測采用流式細胞術試驗方法。使用實時熒光定量PCR檢測每個組細胞中m RNA表達情況;通過蛋白質印跡法對各組細胞中靶基因(Pten、YY-1和CDK-6、C-MET)蛋白的表達量進行檢測;結果:將肺上皮細胞BEAS-2B作對照,mi R-34a在XWLC-05、YTMLC、H157、A549幾株非小肺癌細胞中表達情況都相對較低。實驗組(轉染mimics-34a)細胞相對于空白組和陰性對照組來說,其生長能力遠低于空白組和陰性對照組;侵襲能力明顯減弱;顯微鏡下也可以明顯看出實驗組細胞的遷移能力明顯降低;而流式細胞術檢驗出細胞的凋亡比值明顯升高。在XWLC-05、YTMLC非小肺癌細胞株中,轉染組細胞中mi R-34a的表達上調,CDK6的m RNA表達水平及蛋白水平下調(P0.05),而PTEN、YY-1的m RNA及蛋白的表達水平提高(P0.05),C-MET無統(tǒng)計學意義。結論:過表達的mi R-34a可抑制肺癌細胞的生長及遷移,其相關靶蛋白的上調或下調提示mi R-34a可作為肺癌治療的分子靶點。Mi R-34a可能通過直接或者間接的調控路徑,上調或下調與癌癥發(fā)生發(fā)展相關的重要蛋白因子(PTEN、YY1、CDK6),從而實現(xiàn)對癌細胞遷徙、轉移等行為的抑制。而與普通肺癌細胞株H157相比,XWLC-05和YTMLC細胞株在細胞功能與分子功能上與其無明顯差異,宣威肺腺癌(XWLC-05)和個舊肺鱗癌(YTMLC)與普通肺癌相比是否有明顯的生物學差異需要進行更加深入的研究。
【圖文】：