發(fā)布時(shí)間：2020-05-21 15:36

【摘要】：[目的]1.研究左半結(jié)腸和右半結(jié)腸的癌組織和相應(yīng)正常組織中細(xì)菌生物膜陽(yáng)性率的表達(dá)水平差異;2.研究生物膜陽(yáng)性和生物膜陰性的癌組織標(biāo)本中丁酸和LL-37的表達(dá)水平差異,并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法探究丁酸和LL-37表達(dá)是否具有相關(guān)性;3.研究生物膜陽(yáng)性和生物膜陰性的正常組織標(biāo)本丁酸和LL-37的表達(dá)水平差異,并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法探究丁酸和LL-37表達(dá)是否具有相關(guān)性:4.通過(guò)本課題實(shí)驗(yàn)研究探討細(xì)菌生物膜介導(dǎo)的丁酸和LL-37下調(diào)在腸癌發(fā)病過(guò)程中所起的重要作用,提出細(xì)菌生物膜可能是通過(guò)下調(diào)腸道上皮細(xì)胞LL-37的表達(dá)水平逃逸機(jī)體對(duì)其的免疫殺滅作用,為了解腸道細(xì)菌生物膜的自身特性及其致癌機(jī)理提供新的研究思路。[方法]1.總共采集20例右半結(jié)腸(指盲腸、升結(jié)腸、結(jié)腸肝曲和橫結(jié)腸)和20例左半結(jié)腸(結(jié)腸脾區(qū)、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸和直腸)的腸癌手術(shù)標(biāo)本,分別用FISH實(shí)驗(yàn)對(duì)癌組織和對(duì)應(yīng)的遠(yuǎn)端正常組織的生物膜進(jìn)行檢測(cè),其中生物膜陽(yáng)性被定義為粘液層的細(xì)菌入侵量109個(gè)/ml,腸上皮表面的生物膜的厚度(指線性距離)≥200μm[27];2.采用免疫組化法檢測(cè)上述40例生物膜陽(yáng)性和生物膜陰性的癌組織標(biāo)本中LL-37的分布情況,并應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)所有癌標(biāo)本中LL-37 mRNA的表達(dá)水平和用ELISA法檢測(cè)所有癌標(biāo)本中丁酸和LL-37的表達(dá)水平,探討生物膜、丁酸和LL-37三者之間的相關(guān)性;3.同理,采用免疫組化法檢測(cè)上述40例生物膜陽(yáng)性和生物膜陰性的正常組織標(biāo)本中LL-37的分布情況,并應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)所有正常標(biāo)本中LL-37 mRNA的表達(dá)水平和用ELISA法檢測(cè)所有正常標(biāo)本中丁酸和LL-37的表達(dá)水平,進(jìn)一步探討生物膜、丁酸和LL-37三者之間的相關(guān)性。[結(jié)果]1.右半結(jié)腸癌組織標(biāo)本的生物膜陽(yáng)性率明顯高于左半結(jié)腸的癌組織標(biāo)本,而右半結(jié)腸正常組織標(biāo)本的生物膜陽(yáng)性率也明顯高于左半結(jié)腸的正常組織標(biāo)本。而且結(jié)果顯示癌組織標(biāo)本生物膜陽(yáng)性水平與相應(yīng)的正常組織標(biāo)本一致,即生物膜陽(yáng)性的癌組織標(biāo)本,其對(duì)應(yīng)的正常組織標(biāo)本生物膜也為陽(yáng)性;生物膜陰性的癌組織標(biāo)本,其對(duì)應(yīng)的正常組織標(biāo)本也為陰性。2.生物膜陽(yáng)性的癌組織標(biāo)本的LL-37 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平明顯低于生物膜陰性的癌組織標(biāo)本,差異具有顯著性(P0.05);生物膜陽(yáng)性的癌組織標(biāo)本丁酸的表達(dá)水平也明顯低于生物膜陰性的癌組織標(biāo)本,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.生物膜陽(yáng)性的正常組織標(biāo)本的LL-37 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平明顯低于生物膜陰性的正常組織標(biāo)本,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);生物膜陽(yáng)性的正常組織標(biāo)本丁酸的表達(dá)水平也明顯低于生物膜陰性的正常組織標(biāo)本,差異具有顯著性(P0.05)。[結(jié)論]1.研究結(jié)果顯示右半結(jié)腸的癌組織生物膜陽(yáng)性率極高,而左半結(jié)腸的癌組織生物膜陽(yáng)性率很低。這提示左半結(jié)腸的腸道菌群可能以一種生物膜非依賴性的方式致癌,而右半結(jié)腸腫瘤的發(fā)生發(fā)展可能與生物膜形成密切相關(guān);2.生物膜陽(yáng)性的癌組織標(biāo)本LL-37和丁酸的表達(dá)水平都明顯高于生物膜陰性的癌組織標(biāo)本。同浮游狀態(tài)相比,細(xì)菌形成生物膜后的產(chǎn)丁酸能力可能會(huì)明顯下降;而生物膜陽(yáng)性標(biāo)本中LL-37的表達(dá)下降可能是由丁酸水平降低引起;3.同理,生物膜陽(yáng)性的正常組織標(biāo)本LL-37和丁酸的表達(dá)水平都顯著高于生物膜陰性的正常組織標(biāo)本;4.細(xì)菌生物膜可能通過(guò)抑制丁酸的產(chǎn)生進(jìn)一步降低LL-37的表達(dá)。一方面,LL-37的表達(dá)水平降低有利于細(xì)菌生物膜的形成,使其逃逸機(jī)體的免疫防御;另一方面,低水平的丁酸和LL-37使其對(duì)腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用減弱,最終導(dǎo)致腸癌的發(fā)生。
【圖文】：

１．邋３小結(jié)逡逑在本實(shí)驗(yàn)研究中，我們選擇了邋２０例右半結(jié)腸和２０例左半結(jié)腸的腸癌手術(shù)標(biāo)逡逑本，分別用ＰＡＳ實(shí)驗(yàn)對(duì)癌組織和對(duì)應(yīng)的遠(yuǎn)端正常組織標(biāo)本的黏液層進(jìn)行檢測(cè)。逡逑之后再用ＦＩＳＨ實(shí)驗(yàn)對(duì)ＰＡＳ染色陽(yáng)性的癌組織和正常組織的細(xì)菌生物膜進(jìn)行檢逡逑測(cè)。結(jié)果如下：逡逑１．３．１同國(guó)外研宄所得出的結(jié)論一致，右半結(jié)腸癌組織標(biāo)本的生物膜陽(yáng)性率明逡逑顯高于左半結(jié)腸的癌組織標(biāo)本，右半結(jié)腸正常組織標(biāo)本的生物膜陽(yáng)性率也顯著高逡逑于左半結(jié)腸的正常組織標(biāo)本。逡逑１．３．２生物膜陽(yáng)性的癌組織標(biāo)本，，其對(duì)應(yīng)的正常組織標(biāo)本生物膜也為陽(yáng)性；生逡逑物膜陰性的癌組織標(biāo)本，其對(duì)應(yīng)的正常組織標(biāo)本也為陰性。這提示細(xì)菌生物膜具逡逑備顯著地空間特異性，而并不具備明顯地腫瘤特異性。即決定生物膜是否存在的逡逑關(guān)鍵因素很可能取決于腫瘤起源的部位，而非其組織學(xué)類型。逡逑

的表達(dá)量較少。生物膜陽(yáng)性的腸癌上皮細(xì)胞表面的ＬＬ＿３７表達(dá)量顯著低于生物膜逡逑陰性的腸癌上皮細(xì)胞，如圖２．１Ａ；生物膜陽(yáng)性的正常上皮細(xì)胞表面的ＬＬ－３７表逡逑達(dá)量顯著低于生物膜陰性的正常上皮細(xì)胞，如圖２．１Ｂ。這提示細(xì)菌生物膜可能逡逑通過(guò)某種機(jī)制下調(diào)了腸上皮細(xì)胞中抗菌肽ＬＬ－３７的表達(dá)。逡逑Ｖ：逡逑Ｌ邋；邋：，逡逑圖２．１Ａ生物膜陽(yáng)性（左）和生物膜陰性（右）的腸癌上皮細(xì)胞中ＬＬ－３７的表達(dá)逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．１邋Ａ邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＬＬ－３７邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｃａｎｃｅｒｏｕｓ邋ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ逡逑ｂｉｏｆｉｌｍ邋（ｌｅｆｔ）邋ａｎｄ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｂｉｏｆｉｌｍ邋（ｒｉｇｈｔ）逡逑ｍ邋ｍ逡逑２４逡逑
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 史鵬偉;高艷彬;盧志陽(yáng);楊磊;;抗菌肽LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜的抑制作用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

2 Edyta Golińska;Anna Tomusiak;Tomasz Gosiewski;Gra yna Wiecek;Agnieszka Machul;Diana Mikoajczyk;Magorzata Bulanda;Piotr B Heczko;Magdalena Strus;;Virulence factors of Enterococcus strains isolated from patients with inflammatory bowel disease[J];World Journal of Gastroenterology;2013年23期

本文編號(hào)：2674514