發(fā)布時(shí)間：2020-05-20 23:10

【摘要】：目的:研究胰腺癌在侵襲與轉(zhuǎn)移的過程miR-301a起到的作用及具體機(jī)制。方法:1.應(yīng)用TCGA數(shù)據(jù)庫驗(yàn)證miR-301a表達(dá)水平與胰腺癌TNM分期及發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;2.收集來自胰腺癌患者和正常對(duì)照血獎(jiǎng)標(biāo)本,并且通過qRT-PCR檢測(cè)miR-301a的相對(duì)表達(dá)量;收集并檢測(cè)胰腺癌患者腫瘤組織和癌旁組織標(biāo)本中miR-301a的相對(duì)表達(dá)差異;3.應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將miR-301a的mimic或inhibitor轉(zhuǎn)染至胰腺癌細(xì)胞,通過Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)以及小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞系侵襲轉(zhuǎn)移能力是否改變;4.用bioinformatics軟件Miranda、PicTar、TargetScan等預(yù)測(cè)miR-301a的靶基因,通過KEGG信號(hào)通路分析,以探索miR-301a的靶基因的潛在信號(hào)通路,并用雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)驗(yàn)證miR-301a直接靶向SOCS5;5.將SOCS5 siRNA或SOCS5過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到胰腺癌細(xì)胞PANC1,并檢測(cè)SOCS5敲低或過表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞PANC1侵襲轉(zhuǎn)移及小管形成的能力;6.利用western blot技術(shù)檢測(cè)miR-301a mimic或inhibitor轉(zhuǎn)染后,胰腺癌細(xì)胞中miR-301a的靶基因SOCS5及下游JAK-STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。7.利用siRNA基因干擾技術(shù)或過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)將SOCS5 si RNA或SOCS5過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到胰腺癌細(xì)胞并檢測(cè)SOCS5經(jīng)敲低或過表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞系miR-301a的靶基因SOCS5及下游JAK-STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況;結(jié)果:1.miR-301a與胰腺癌臨床分期和胰腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān);2.miR-301a在胰腺癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織,miR-301a在胰腺癌血漿中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照血漿,miR-301a在胰腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血漿中的表達(dá)顯著高于未遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組,對(duì)比術(shù)前,在胰腺癌患者術(shù)后血漿中miR-301a表達(dá)量下降。3.在胰腺癌細(xì)胞系中高表達(dá)miR-301a,促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲以及小管形成能力;4.在胰腺癌細(xì)胞系中抑制miR-301a的表達(dá),抑制胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲以及小管形成能力;5.生物信息學(xué)軟件軟件預(yù)測(cè)SOCS5是miR-301a潛在的靶向基因之一,報(bào)告基因技術(shù)證實(shí)miR-301a直接靶向SOCS5 3’UTR;6.抑制SOCS5能對(duì)胰腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移和小管形成發(fā)揮促進(jìn)作用,而SOCS5過表達(dá)直接抑制這些效應(yīng),主要機(jī)制通過抑制JAK-STAT3信號(hào)通路,間接下調(diào)MMP9、VEGF蛋白分子,而且上調(diào)E-cadherin蛋白分子。結(jié)論:胰腺癌患者miR-301a表達(dá)升高,并通過mi R-301a SOCS5 JAK-STAT3這個(gè)信號(hào)通路促進(jìn)胰腺癌轉(zhuǎn)移的形成。
【圖文】：

果-301a 在胰腺癌中表達(dá)升高 miR-301a 在胰腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移過程如何發(fā)揮作用,我們癌組織和癌旁組織樣本和 5 例胰腺癌患者的血漿 miR-A，B）。miR-301a 在上述標(biāo)本中上調(diào)，胰腺癌患者血漿中胰腺癌組織一致。其次，我們通過對(duì) 63 例胰腺癌患 檢測(cè) miR-301a 的含量，并觀察患者血漿中 miR-301a，P<0.001)。另外，，我們收集了十例胰腺癌患者術(shù)前術(shù)后 miR-301a 的相對(duì)表達(dá)量（圖 1D）。我們將 miR-301a 臨界值，將 63 例患者分為 miR-301a 表達(dá)量高、低兩組a 表達(dá)與 TNM 分期顯著相關(guān)(P=0.0169)，但與患者年齡

20 例 IV 期胰腺癌患者(圖 2 B)。此外，Ka miR-301a 的患者預(yù)后與低表達(dá) miR-301a 的胰2C)。定量 PCR 分析，檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞系 miR-301 系 (PANC-1, BXPC-3, Aspc-1, Mia-Paca-2, 明顯高于胰腺上皮細(xì)胞系 H6C7(圖 2D)， m皮細(xì)胞系 H6C7。接下來，我們將 miR-301a9-9 (CA19-9)水平進(jìn)行比較，以檢測(cè)對(duì)胰腺癌1a 的 ROC 曲線曲線下面積為 0.724，高于 CA，這些數(shù)據(jù)支持 miR-301a 表達(dá)在胰腺癌患者可以作為診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Amit Mahipal;Jessica Frakes;Sarah Hoffe;Richard Kim;;Management of borderline resectable pancreatic cancer[J];World Journal of Gastrointestinal Oncology;2015年10期

本文編號(hào)：2673344