【摘要】：目的:吉西他濱作為胰腺癌化療的一線用藥,面臨著有效率偏低的問題,部分患者在化療開始的數(shù)周內(nèi)即可對(duì)吉西他濱產(chǎn)生耐藥。然而,胰腺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱耐藥的具體機(jī)制仍不清楚。既往研究已表明過表達(dá)的SATB1可通過調(diào)控多個(gè)耐藥相關(guān)基因的表達(dá)誘導(dǎo)乳腺癌和胃癌細(xì)胞的多藥耐藥,但目前尚無(wú)研究證實(shí)SATB1是否與吉西他濱耐藥有關(guān)。因此,本研究擬探討SATB1表達(dá)水平是否可影響胰腺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱的敏感性,為進(jìn)提高吉西他濱療效提供一定理論基礎(chǔ)。方法:1.應(yīng)用Real-time PCR檢測(cè)不同胰腺癌細(xì)胞系SATB1的m RNA表達(dá)水平。2.應(yīng)用MTT法檢測(cè)吉西他濱處理后SW-1990、PANC-1細(xì)胞的細(xì)胞活力變化。3.應(yīng)用Real-time PCR檢測(cè)吉西他濱處理后SW-1990、PANC-1細(xì)胞SATB1的m RNA表達(dá)水平變化。4.應(yīng)用Real-time PCR檢測(cè)先經(jīng)JNK、P38 MAPK信號(hào)通路抑制劑預(yù)處理后再用吉西他濱處理的SW-1990、PANC-1細(xì)胞SATB1的m RNA表達(dá)水平變化。5.應(yīng)用慢病毒感染SW-1990、PANC-1細(xì)胞構(gòu)建沉默SATB1表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株,并用Real-time PCR驗(yàn)證SATB1在SW-1990、PANC-1細(xì)胞中的沉默效率。6.應(yīng)用MTT法檢測(cè)并比較沉默SATB1表達(dá)是否能增強(qiáng)吉西他濱對(duì)SW-1990、PANC-1細(xì)胞的體外生長(zhǎng)抑制作用。7.應(yīng)用裸鼠皮下注射PANC-1細(xì)胞株懸液法構(gòu)建胰腺癌異位移植瘤模型,再使用吉西他濱治療荷瘤裸鼠,驗(yàn)證沉默SATB1的表達(dá)是否能增強(qiáng)吉西他濱抑制移植瘤生長(zhǎng)的作用。8.應(yīng)用高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)并篩選出差異基因。9.使用Fun Rich進(jìn)行差異基因的基因功能分析。10.使用Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)進(jìn)行差異基因的途徑富集分析。11.使用Cytoscape構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(protein-protein interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果:1.Real-time PCR結(jié)果提示幾種胰腺癌細(xì)胞系SATB1的m RNA表達(dá)水平由高至低依次為:SW-1990、CFPAC-1、CAPAN-1、PANC-1。2.吉西他濱對(duì)PANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用強(qiáng)于SW-1990細(xì)胞。3.吉西他濱可上調(diào)胰腺癌細(xì)胞SATB1的m RNA表達(dá)水平。4.吉西他濱通過JNK、P38 MAPK信號(hào)通路的激活上調(diào)胰腺癌細(xì)胞SATB1的m RNA表達(dá)水平。5.SATB1在SW-1990 SATB1 sh RNA-1、SW-1990 SATB1 sh RNA-2中的沉默效率分別為79.08%和62.61%;吉西他濱誘導(dǎo)的PANC-1細(xì)胞SATB1表達(dá)的上調(diào)同樣可被沉默,在PANC-1 SATB1 sh RNA-1、PANC-1 SATB1 sh RNA-2中的沉默效率分別為55.58%和52.36%。6.MTT實(shí)驗(yàn)顯示,沉默SATB1的表達(dá)可顯著增強(qiáng)吉西他濱對(duì)SW-1990和PANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。7.裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)顯示,沉默SATB1的表達(dá)可增強(qiáng)吉西他濱抑制異位移植瘤生長(zhǎng)的作用。8.高通量測(cè)序技術(shù)及差異基因篩選結(jié)果顯示,沉默SATB1可明顯下調(diào)多個(gè)與耐藥密切相關(guān)基因如E2F1、ABCA12、NUPR1、PSAT1和SLC3A2的表達(dá)水平。9.Fun Rich分析提示差異基因主要富集在生物代謝、能量代謝、脂肪酸代謝、蛋白質(zhì)代謝、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、RNA定位等生物學(xué)進(jìn)程;還富集在外泌體、細(xì)胞外、縫隙連接、包涵體、核旁胞質(zhì)區(qū)等細(xì)胞組分;以及催化、輔助轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、分子伴侶、熱休克蛋白、絲氨酸型肽酶、核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)體等分子功能。10.KEGG通路富集分析提示差異基因主要與細(xì)胞代謝、蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的加工、蛋白質(zhì)的消化和吸收、腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能異常等信號(hào)途徑相關(guān)。11.在PPI網(wǎng)絡(luò)建設(shè)中,差異基因主要以HSP90AA1、HSPA1A、EGR1、SLC3A2、PSAT1和IGFBP3為節(jié)點(diǎn)。結(jié)論:胰腺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱耐藥可能與SATB1的過表達(dá)有關(guān),沉默SATB1的表達(dá)在體內(nèi)外均能增強(qiáng)吉西他濱對(duì)胰腺癌細(xì)胞的殺傷作用。SATB1可能通過調(diào)控與耐藥相關(guān)基因的表達(dá)參與胰腺癌對(duì)吉西他濱的耐藥。本實(shí)驗(yàn)首次在胰腺癌中揭示了SATB1表達(dá)水平對(duì)吉西他濱化療敏感性的影響,為增強(qiáng)吉西他濱的療效、改善胰腺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱的獲得性耐藥提供了一定理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

不同胰腺癌細(xì)胞SATB1表達(dá)水平比較

胰腺癌細(xì)胞 SATB1 表達(dá)水平對(duì)吉西他濱敏感性的影響 結(jié) 果十三、差異基因蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)我們使用 Cytoscape 軟件對(duì)差異基因進(jìn)行了可視化分析。如圖 14 所示，在全部差異基因中，，主要以 HSP90AA1、HSPA1A、EGR1、SLC3A2、PSAT1、IGFBP3 等為節(jié)點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 Xue-Feng Fang;Zhi-Bo Hou;Xin-Zheng Dai;Cong Chen;Jing Ge;Hong Shen;Xiao-Feng Li;Li-Ke Yu;Ying Yuan;;Special AT-rich sequence-binding protein 1 promotes cell growth and metastasis in colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2013年15期

本文編號(hào)：2672972