【摘要】：目的:吉西他濱作為胰腺癌化療的一線用藥,面臨著有效率偏低的問題,部分患者在化療開始的數(shù)周內(nèi)即可對吉西他濱產(chǎn)生耐藥。然而,胰腺癌細胞對吉西他濱耐藥的具體機制仍不清楚。既往研究已表明過表達的SATB1可通過調(diào)控多個耐藥相關(guān)基因的表達誘導(dǎo)乳腺癌和胃癌細胞的多藥耐藥,但目前尚無研究證實SATB1是否與吉西他濱耐藥有關(guān)。因此,本研究擬探討SATB1表達水平是否可影響胰腺癌細胞對吉西他濱的敏感性,為進提高吉西他濱療效提供一定理論基礎(chǔ)。方法:1.應(yīng)用Real-time PCR檢測不同胰腺癌細胞系SATB1的m RNA表達水平。2.應(yīng)用MTT法檢測吉西他濱處理后SW-1990、PANC-1細胞的細胞活力變化。3.應(yīng)用Real-time PCR檢測吉西他濱處理后SW-1990、PANC-1細胞SATB1的m RNA表達水平變化。4.應(yīng)用Real-time PCR檢測先經(jīng)JNK、P38 MAPK信號通路抑制劑預(yù)處理后再用吉西他濱處理的SW-1990、PANC-1細胞SATB1的m RNA表達水平變化。5.應(yīng)用慢病毒感染SW-1990、PANC-1細胞構(gòu)建沉默SATB1表達的穩(wěn)定細胞株,并用Real-time PCR驗證SATB1在SW-1990、PANC-1細胞中的沉默效率。6.應(yīng)用MTT法檢測并比較沉默SATB1表達是否能增強吉西他濱對SW-1990、PANC-1細胞的體外生長抑制作用。7.應(yīng)用裸鼠皮下注射PANC-1細胞株懸液法構(gòu)建胰腺癌異位移植瘤模型,再使用吉西他濱治療荷瘤裸鼠,驗證沉默SATB1的表達是否能增強吉西他濱抑制移植瘤生長的作用。8.應(yīng)用高通量測序技術(shù)檢測并篩選出差異基因。9.使用Fun Rich進行差異基因的基因功能分析。10.使用Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)進行差異基因的途徑富集分析。11.使用Cytoscape構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(protein-protein interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果:1.Real-time PCR結(jié)果提示幾種胰腺癌細胞系SATB1的m RNA表達水平由高至低依次為:SW-1990、CFPAC-1、CAPAN-1、PANC-1。2.吉西他濱對PANC-1細胞的生長抑制作用強于SW-1990細胞。3.吉西他濱可上調(diào)胰腺癌細胞SATB1的m RNA表達水平。4.吉西他濱通過JNK、P38 MAPK信號通路的激活上調(diào)胰腺癌細胞SATB1的m RNA表達水平。5.SATB1在SW-1990 SATB1 sh RNA-1、SW-1990 SATB1 sh RNA-2中的沉默效率分別為79.08%和62.61%;吉西他濱誘導(dǎo)的PANC-1細胞SATB1表達的上調(diào)同樣可被沉默,在PANC-1 SATB1 sh RNA-1、PANC-1 SATB1 sh RNA-2中的沉默效率分別為55.58%和52.36%。6.MTT實驗顯示,沉默SATB1的表達可顯著增強吉西他濱對SW-1990和PANC-1細胞的生長抑制作用。7.裸鼠荷瘤實驗顯示,沉默SATB1的表達可增強吉西他濱抑制異位移植瘤生長的作用。8.高通量測序技術(shù)及差異基因篩選結(jié)果顯示,沉默SATB1可明顯下調(diào)多個與耐藥密切相關(guān)基因如E2F1、ABCA12、NUPR1、PSAT1和SLC3A2的表達水平。9.Fun Rich分析提示差異基因主要富集在生物代謝、能量代謝、脂肪酸代謝、蛋白質(zhì)代謝、物質(zhì)轉(zhuǎn)運、RNA定位等生物學(xué)進程;還富集在外泌體、細胞外、縫隙連接、包涵體、核旁胞質(zhì)區(qū)等細胞組分;以及催化、輔助轉(zhuǎn)運蛋白、分子伴侶、熱休克蛋白、絲氨酸型肽酶、核質(zhì)轉(zhuǎn)運體等分子功能。10.KEGG通路富集分析提示差異基因主要與細胞代謝、蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的加工、蛋白質(zhì)的消化和吸收、腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能異常等信號途徑相關(guān)。11.在PPI網(wǎng)絡(luò)建設(shè)中,差異基因主要以HSP90AA1、HSPA1A、EGR1、SLC3A2、PSAT1和IGFBP3為節(jié)點。結(jié)論:胰腺癌細胞對吉西他濱耐藥可能與SATB1的過表達有關(guān),沉默SATB1的表達在體內(nèi)外均能增強吉西他濱對胰腺癌細胞的殺傷作用。SATB1可能通過調(diào)控與耐藥相關(guān)基因的表達參與胰腺癌對吉西他濱的耐藥。本實驗首次在胰腺癌中揭示了SATB1表達水平對吉西他濱化療敏感性的影響,為增強吉西他濱的療效、改善胰腺癌細胞對吉西他濱的獲得性耐藥提供了一定理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

不同胰腺癌細胞SATB1表達水平比較

胰腺癌細胞 SATB1 表達水平對吉西他濱敏感性的影響 結(jié) 果十三、差異基因蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)我們使用 Cytoscape 軟件對差異基因進行了可視化分析。如圖 14 所示，在全部差異基因中，，主要以 HSP90AA1、HSPA1A、EGR1、SLC3A2、PSAT1、IGFBP3 等為節(jié)點。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.9

【參考文獻】

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1 Xue-Feng Fang;Zhi-Bo Hou;Xin-Zheng Dai;Cong Chen;Jing Ge;Hong Shen;Xiao-Feng Li;Li-Ke Yu;Ying Yuan;;Special AT-rich sequence-binding protein 1 promotes cell growth and metastasis in colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2013年15期

本文編號：2672972