【摘要】：目的研究乳腺癌中4-氨基丁酸氨基轉(zhuǎn)移酶(4-aminobutyrate aminotransferase,ABAT)的表達并分析其表達水平與患者預后的關系;分析ABAT的表達水平與Estroten Receptor(ER)的表達水平是否具有相關性,并進一步研究ABAT的表達水平對乳腺癌細胞遷移和增殖能力的影響,以及初步探討ABAT影響乳腺癌患者預后的作用機制。方法通過基因表達譜的乳腺癌患者預后在線預測網(wǎng)站(Gene expression-based Outcome for breast cancer Online,GOBO)數(shù)據(jù)庫預測ABAT與乳腺癌患者預后的關系,并采用免疫組化分析乳腺癌組織中ABAT和ER表達水平,采用SPSS軟件行卡方檢驗進行ABAT和ER表達之間相關性的統(tǒng)計學分析以及通過繪制Kaplan-Meier生存曲線和行l(wèi)og-rank檢驗來分析ABAT的表達水平對ER陽性乳腺癌患者的預后作用。根據(jù)ER的表達水平,我們選擇ER陽性的MCF 7乳腺癌細胞系和ER陰性的MDA-MB-231乳腺癌細胞系作為本實驗研究模型。采用Western Blotting檢測乳腺癌細胞中ABAT和ER蛋白表達水平。ABAT干擾質(zhì)粒(ABAT siRNA)由銳博生物(中國廣州)化學合成。ABAT過表達質(zhì)粒由我們課題組成功構建。用慢病毒感染的方法將ABAT過表達的病毒感染MDA-MB-231乳腺癌細胞系,然后用Western-blot分別驗證ABAT是否成功的表達下調(diào)或上調(diào)。我們采用MTT細胞增殖和Transwell小室細胞遷移等體外細胞學實驗來觀察ABAT的表達水平的改變是否對乳腺癌細胞的遷移和增殖產(chǎn)生影響。為了進一步驗證體外細胞學實驗的結果,我們通過構建免疫缺陷小鼠成瘤實驗來進行體內(nèi)動物實驗進行驗證。結果1、在線數(shù)據(jù)庫GOBO數(shù)據(jù)庫的預測結果為ABAT的表達水平與乳腺癌預后相關。我們通過對乳腺癌組織進行免疫組織化學染色,結果顯示ER陽性的乳腺癌樣本中,ABAT高表達,ER陰性的乳腺癌樣本中,ABAT低表達。即ABAT的表達水平與ER的表達水平呈正相關(P0.05)。Kaplan-Meier曲線結果顯示:在ER陽性的乳腺癌患者中,ABAT低表達患者與ABAT高表達患者相比有較低的無病生存率(P=0.001)和總生存率較低(P=0.002)。ABAT高表達是乳腺癌患者預后良好的指標之一。2、體外細胞學實驗也同樣證實ABAT在ER陽性的MCF 7乳腺癌細胞中高表達,在ER陰性的MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3乳腺癌細胞系中低表達。3、MTT細胞增殖實驗結果顯示在MCF 7乳腺癌細胞中,將ABAT干擾后,ABAT降表達組與對照組相比,細胞的增殖能力增高;在MDA-MB-231乳腺癌細胞中,將ABAT過表達后,ABAT過表達組與對照組相比,細胞的增殖能力降低。Transwell小室細胞遷移實驗結果顯示在MDA-MB-231乳腺癌細胞中ABAT過表達組穿過基質(zhì)膜的能力增強。4、裸鼠體內(nèi)實驗結果顯示注射穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ABAT過表達的MDA-MB-231乳腺癌細胞組和對照組相比,小鼠腫瘤的生長能力降低。免疫組化結果顯示在MDA-MB-231乳腺癌細胞中,ABAT蛋白過表達組與對照組相比,ABAT的表達水平上升,Ki67蛋白和EGFR蛋白的表達水平都降低。5、ER陽性的乳腺癌細胞系中,ABAT蛋白的表達下調(diào)會降低內(nèi)分泌治療的敏感性。結論在乳腺癌中ABAT蛋白的表達水平與ER的表達水平呈正相關,在ER陽性的乳腺癌組織中高表達,在ER陰性的乳腺癌組織中低表達。ER陽性的乳腺癌組織中高表達ABAT蛋白或許是預后良好的指標之一。ABAT蛋白的表達上調(diào)可以抑制乳腺癌細胞的遷移和增殖能力。ABAT蛋白的表達下調(diào)可能會引起ER陽性乳腺癌患者的內(nèi)分泌耐藥。ABAT蛋白是否可做為ER陽性乳腺癌新的治療靶點還有待進一步研究。
【圖文】：

圖 1. GOBO 數(shù)據(jù)庫預測結果同分子分型（基因檢測的方法）乳腺癌組織中 ABAT 表達情況；B）不同分子M50 分類）乳腺癌組織中 ABAT 表達情況；C）不同 ER 狀態(tài)乳腺癌組織中 AB況；D）不同組織學分級乳腺癌組織中 ABAT 表達情況2 ABAT 高表達與乳腺癌患者預后呈正相關我們通過在線 GOBO 數(shù)據(jù)庫來預測 ABAT 蛋白的表達是否會影響乳腺預后，GOBO 預測顯示，在總體人群中 ABAT 高表達的乳腺癌患者有遠處轉(zhuǎn)移存活率（Distant metastasis-free survival, DMFS）（P=9e-05，圖未行他莫西芬治療的患者而言同樣是高表達 ABAT 蛋白的乳腺癌患者 DMFS（P=0.03972，圖 1F），對于行他莫西芬治療的乳腺癌患者而言 DMFS 高表達的患者有較高的 DMFS （P=0.03972，圖 1G）。這說明者無論是否進行他莫西芬治療，高表達 ABAT 蛋白的患者預后要明顯T 低表達的乳腺癌患者，這提示 ABAT 蛋白的高表達是乳腺癌患者預

圖 1. GOBO 數(shù)據(jù)庫預測結果E）ABAT 表達對乳腺癌患者 DMFS 的影響預測結果；F）ABAT 表達對未行 TAM 治療乳腺癌患者 DMFS 的影響預測結果；G）ABAT 表達對行 TAM 治療乳腺癌患者 DMFS 的影響預測結果1.2.3 ABAT 的表達與 ER 的表達呈正相關通過利用 GEPIA 網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫來進行 TCGA 數(shù)據(jù)庫預測 ER 與 ABAT 蛋白表達的相關性，進行 Pearson 相關性檢驗，結果發(fā)現(xiàn) ABAT 蛋白的表達水平與 ESR1（ER）的表達狀態(tài)呈正相關（P<0.001，R=0.46），即 ABAT 蛋白在 ER 陽性的乳腺癌組織中高表達，在 ER 陰性的乳腺癌組織中低表達。結果見圖 2 所示。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9

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