【摘要】：研究背景:隨著乳腺癌治療理念的更新及患者需求的不斷提高,乳腺癌術(shù)后的乳房再造地位已經(jīng)逐步提升至乳腺癌診療環(huán)節(jié)的一部分,相關(guān)再造術(shù)式得到充分開發(fā)應(yīng)用。自體脂肪移植用于乳房再造具有生物相容性好、微創(chuàng)化且便于護理等優(yōu)勢,廣受青睞。作為其重要的輔助方法,體外負壓擴張裝置在乳房再造中使用并優(yōu)化了脂肪移植乳房再造的臨床效果。近年來脂肪移植技術(shù)廣泛應(yīng)用于乳房再造,其腫瘤安全性受到腫瘤與整形界廣泛關(guān)注。2009年,美國整形外科醫(yī)師協(xié)會發(fā)表觀點:目前證據(jù)暫無法支撐脂肪移植促進乳腺癌進程的推論,暫可認為脂肪移植是一種安全可靠的乳房再造方法。作為其重要輔助方法,體外負壓擴張裝置的使用是否會影響乳腺癌進展?解答這一問題,對在乳房再造領(lǐng)域推廣該技術(shù)至關(guān)重要。研究目的:1、建立仿臨床作用模式的體外負壓乳腺癌細胞培養(yǎng)模型及動物種植瘤原位負壓吸引模型;2、通過體外及體內(nèi)模型,比較研究間斷溫和負壓環(huán)境及常壓環(huán)境對三陰性乳腺癌生物學(xué)特性的影響:(1)比較間斷溫和負壓環(huán)境及常壓環(huán)境對三陰性乳腺癌侵襲力的影響;(2)比較間斷溫和負壓環(huán)境及常壓環(huán)境對三陰性乳腺癌增殖的影響;(3)比較間斷溫和負壓環(huán)境及常壓環(huán)境對三陰性乳腺癌死亡的影響。研究方法:1、體外負壓乳腺癌細胞培養(yǎng)模型及動物種植瘤原位負壓吸引模型的建立(1)體外負壓細胞培養(yǎng)裝置:將聚丙烯材質(zhì)密閉箱改良為可調(diào)控入氣量的細胞培養(yǎng)裝置并連接一抽氣裝置后放置于培養(yǎng)箱內(nèi)。工作時,通過調(diào)節(jié)箱內(nèi)進出氣量達到平衡,形成穩(wěn)定-25 mmHg負壓;非工作時,釋放入氣口閥門,使裝置與培養(yǎng)箱整體環(huán)境聯(lián)通。轉(zhuǎn)換周期為12小時。-25 mmHg組置于其中培養(yǎng);0 mmHg組置于常壓下培養(yǎng)。(2)動物局部負壓作用皮下種植瘤模型:將0.15ml MDA-MB-231細胞懸液種植于兩側(cè)鼠背,一側(cè)為對照組,常壓條件下生長;另一側(cè)為負壓組,間斷溫和負壓干預(yù)下生長,每日干預(yù)時間為3小時。2、間斷溫和負壓環(huán)境及常壓環(huán)境對三陰性乳腺癌生物學(xué)特性影響的比較研究(1)對三陰性乳腺癌細胞侵襲的比較研究:體外及體內(nèi)實驗建模成功后,Transwell侵襲實驗及酶聯(lián)免疫吸附試驗用于觀察負壓條件下細胞侵襲力的變化及IL-8分泌變化;同時,在注射MDA-MB-231細胞懸液14天及28天時用免疫組織化學(xué)染色、實時PCR及Western blot檢測負壓干預(yù)下腫瘤血管密度、上皮間質(zhì)化程度及炎性情況。(2)對三陰性乳腺癌細胞增殖的比較研究:建模成功后,CCK-8實驗連續(xù)動態(tài)檢測MDA-MB-231細胞體外增殖情況,酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測IL-6分泌情況;同時,在注射MDA-MB-231細胞懸液第28天用免疫組化檢測實時乏氧細胞分布,第14天及28天用Western blot明確血管數(shù)目,注射后第1天、7天、14天、21天及28天動態(tài)觀察瘤體單位面積熒光信號強度。(3)對三陰性乳腺癌細胞死亡的比較研究:建模成功后,Muse儀AnnexinV試驗檢測MDA-MB-231細胞體外凋亡情況,酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測TNF-α分泌情況;同時,在注射MDA-MB-231細胞懸液第14天及28天HE染色及TUNEL染色組織切片觀察瘤體內(nèi)死細胞分布及數(shù)目。研究結(jié)果:1、間斷溫和負壓環(huán)境增加MDA-MB-231三陰性乳腺癌細胞侵襲力體外間斷溫和負壓條件下培養(yǎng)的MDA-MB-231三陰性乳腺癌細胞,侵襲能力強于常壓培養(yǎng)下同類細胞(p0.05),且IL-8分泌量多于常壓下培養(yǎng)的MDA-MB-231 細胞(p0.05)。動物實驗第14天獲取的負壓組MDA-MB-231腫瘤標本在基因及蛋白表達層面較對照組呈現(xiàn)出更明顯的上皮間質(zhì)化傾向;第14天及第28天獲取的負壓組MDA-MB-231腫瘤標本血管密度均大于對照組標本(p0.05)。2、間斷溫和負壓環(huán)境對MDA-MB-231三陰性乳腺癌細胞增殖無顯著影響體外間斷溫和負壓條件下培養(yǎng)的MDA-MB-231三陰性乳腺癌細胞增殖力與常壓培養(yǎng)下同類細胞差別不顯著(p0.05),但IL-6分泌量多于常壓下培養(yǎng)的MDA-MB-231 細胞(p0.05)。動物實驗第14天獲取負壓組標本的皮膚及皮下組織淺層乏氧細胞較常壓組多,但瘤體內(nèi)部乏氧細胞差異不顯著;第14天及第28天獲取的負壓組MDA-MB-231腫瘤標本CD31蛋白表達量大于對照組標本(p0.05),但Ki67陽性細胞百分比兩組差異不顯著(p0.05)�；铙w熒光成像各時段兩組熒光信號強度變化趨勢類似,無明顯差異(p0.05)。3、間斷溫和負壓環(huán)境促進MDA-MB-231三陰性乳腺癌細胞死亡體外間斷溫和負壓環(huán)境下培養(yǎng)的MDA-MB-231三陰性乳腺癌細胞凋亡比例較大,活細胞比例低于常壓培養(yǎng)同類細胞(p0.05),且TNF-α分泌量多于常壓培養(yǎng)的 MDA-MB-231 細胞(p0.05)。動物實驗第14天獲取的負壓組MDA-MB-231腫瘤標本較對照組Caspase-3表達量增多;第28天獲取的負壓組MDA-MB-231腫瘤標本壞死面積比例較常壓組標本高(p0.05)。研究結(jié)論:1、間斷溫和負壓環(huán)境培養(yǎng)增加MDA-MB-231三陰性乳腺癌細胞侵襲力,促進IL-8分泌,增加瘤體內(nèi)血管密度及腫瘤細胞上皮間質(zhì)化程度。2、間斷溫和負壓環(huán)境培養(yǎng)對MDA-MB-231三陰性乳腺癌細胞增殖影響不顯著,但可促進MDA-MB-231細胞分泌IL-6增多。同時,動物模型中,間斷溫和負壓直接作用可造成皮下組織淺層瞬時乏氧細胞增多,但皮下種植瘤瞬時乏氧細胞變化不明顯。間斷溫和負壓主要影響皮下種植瘤局部微環(huán)境,如增強炎性因子分泌及促進血管增多。3、間斷溫和負壓使MDA-MB-231三陰性乳腺癌細胞凋亡比例增多,活細胞比例減少,同時促進TNF-α分泌。在MDA-MB-231瘤體生長早期,間斷溫和負壓可使凋亡相關(guān)蛋白表達增多;在MDA-MB-231瘤體生長中后期,間斷溫和負壓可使瘤體壞死面積比例明顯增大。
【圖文】：

斷溫和負壓對ＭＤＡ－ＭＢ－２３１三陰性乳腺細胞侵Ｉｎｆｌｏｗ邋Ａ邐Ｄ逡逑ｋｚ—＾邐ｉ—ｃ＝＞逡逑Ｏｕｔｆｌｏｗ逡逑斷溫和負壓細胞培養(yǎng)系統(tǒng)逡逑口；邋Ｂ進氣口控制閥；Ｃ負壓監(jiān)測器；Ｄ細胞培養(yǎng)皿；Ｅ：通過Ｃ監(jiān)測系統(tǒng)內(nèi)負壓值，再根據(jù)Ｃ提示數(shù)據(jù)調(diào)節(jié)Ｂ，，使值恒定于－２５邋ｍｍＨｇ。逡逑

１．５－逡逑Ｉ邋，0．邋＿邋ｆ逡逑ＭＢ逡逑。．５．邋■逡逑０．０－Ｉ￣＾邐邋＼￣——逡逑ＯｍｍＨｇ邐－２５ｍｍＨｇ逡逑細胞侵襲實驗逡逑組透膜ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞鏡下觀（２００邋Ｘ邋）；逡逑Ｈｇ邋組透膜邋ＭＤＡ－ＭＢ－２３１邋細胞鏡下觀（２０0ｘ）；逡逑膜細胞結(jié)晶紫脫色液在５９５ｎｍ測量的ＯＤ值的組間比較：．７６邋±０．０７，較常壓組（ＯｍｍＨｇ組）為１．０６邋±０．０６；提示多于常壓組（ｐ邋＜０．０５）。逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 穆大力;欒杰;郭小雙;辛敏強;劉春軍;陳琳;;Brava輔助自體脂肪移植矯正乳房局部缺損[J];組織工程與重建外科雜志;2015年02期

2 王溯;陳曉蓉;;成年裸鼠和成人體表皮膚的比較組織形態(tài)學(xué)研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2014年08期

本文編號：2668729