【摘要】：研究背景:隨著乳腺癌治療理念的更新及患者需求的不斷提高,乳腺癌術(shù)后的乳房再造地位已經(jīng)逐步提升至乳腺癌診療環(huán)節(jié)的一部分,相關(guān)再造術(shù)式得到充分開(kāi)發(fā)應(yīng)用。自體脂肪移植用于乳房再造具有生物相容性好、微創(chuàng)化且便于護(hù)理等優(yōu)勢(shì),廣受青睞。作為其重要的輔助方法,體外負(fù)壓擴(kuò)張裝置在乳房再造中使用并優(yōu)化了脂肪移植乳房再造的臨床效果。近年來(lái)脂肪移植技術(shù)廣泛應(yīng)用于乳房再造,其腫瘤安全性受到腫瘤與整形界廣泛關(guān)注。2009年,美國(guó)整形外科醫(yī)師協(xié)會(huì)發(fā)表觀點(diǎn):目前證據(jù)暫無(wú)法支撐脂肪移植促進(jìn)乳腺癌進(jìn)程的推論,暫可認(rèn)為脂肪移植是一種安全可靠的乳房再造方法。作為其重要輔助方法,體外負(fù)壓擴(kuò)張裝置的使用是否會(huì)影響乳腺癌進(jìn)展?解答這一問(wèn)題,對(duì)在乳房再造領(lǐng)域推廣該技術(shù)至關(guān)重要。研究目的:1、建立仿臨床作用模式的體外負(fù)壓乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)模型及動(dòng)物種植瘤原位負(fù)壓吸引模型;2、通過(guò)體外及體內(nèi)模型,比較研究間斷溫和負(fù)壓環(huán)境及常壓環(huán)境對(duì)三陰性乳腺癌生物學(xué)特性的影響:(1)比較間斷溫和負(fù)壓環(huán)境及常壓環(huán)境對(duì)三陰性乳腺癌侵襲力的影響;(2)比較間斷溫和負(fù)壓環(huán)境及常壓環(huán)境對(duì)三陰性乳腺癌增殖的影響;(3)比較間斷溫和負(fù)壓環(huán)境及常壓環(huán)境對(duì)三陰性乳腺癌死亡的影響。研究方法:1、體外負(fù)壓乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)模型及動(dòng)物種植瘤原位負(fù)壓吸引模型的建立(1)體外負(fù)壓細(xì)胞培養(yǎng)裝置:將聚丙烯材質(zhì)密閉箱改良為可調(diào)控入氣量的細(xì)胞培養(yǎng)裝置并連接一抽氣裝置后放置于培養(yǎng)箱內(nèi)。工作時(shí),通過(guò)調(diào)節(jié)箱內(nèi)進(jìn)出氣量達(dá)到平衡,形成穩(wěn)定-25 mmHg負(fù)壓;非工作時(shí),釋放入氣口閥門,使裝置與培養(yǎng)箱整體環(huán)境聯(lián)通。轉(zhuǎn)換周期為12小時(shí)。-25 mmHg組置于其中培養(yǎng);0 mmHg組置于常壓下培養(yǎng)。(2)動(dòng)物局部負(fù)壓作用皮下種植瘤模型:將0.15ml MDA-MB-231細(xì)胞懸液種植于兩側(cè)鼠背,一側(cè)為對(duì)照組,常壓條件下生長(zhǎng);另一側(cè)為負(fù)壓組,間斷溫和負(fù)壓干預(yù)下生長(zhǎng),每日干預(yù)時(shí)間為3小時(shí)。2、間斷溫和負(fù)壓環(huán)境及常壓環(huán)境對(duì)三陰性乳腺癌生物學(xué)特性影響的比較研究(1)對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞侵襲的比較研究:體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)建模成功后,Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)用于觀察負(fù)壓條件下細(xì)胞侵襲力的變化及IL-8分泌變化;同時(shí),在注射MDA-MB-231細(xì)胞懸液14天及28天時(shí)用免疫組織化學(xué)染色、實(shí)時(shí)PCR及Western blot檢測(cè)負(fù)壓干預(yù)下腫瘤血管密度、上皮間質(zhì)化程度及炎性情況。(2)對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖的比較研究:建模成功后,CCK-8實(shí)驗(yàn)連續(xù)動(dòng)態(tài)檢測(cè)MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖情況,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IL-6分泌情況;同時(shí),在注射MDA-MB-231細(xì)胞懸液第28天用免疫組化檢測(cè)實(shí)時(shí)乏氧細(xì)胞分布,第14天及28天用Western blot明確血管數(shù)目,注射后第1天、7天、14天、21天及28天動(dòng)態(tài)觀察瘤體單位面積熒光信號(hào)強(qiáng)度。(3)對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞死亡的比較研究:建模成功后,Muse儀AnnexinV試驗(yàn)檢測(cè)MDA-MB-231細(xì)胞體外凋亡情況,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TNF-α分泌情況;同時(shí),在注射MDA-MB-231細(xì)胞懸液第14天及28天HE染色及TUNEL染色組織切片觀察瘤體內(nèi)死細(xì)胞分布及數(shù)目。研究結(jié)果:1、間斷溫和負(fù)壓環(huán)境增加MDA-MB-231三陰性乳腺癌細(xì)胞侵襲力體外間斷溫和負(fù)壓條件下培養(yǎng)的MDA-MB-231三陰性乳腺癌細(xì)胞,侵襲能力強(qiáng)于常壓培養(yǎng)下同類細(xì)胞(p0.05),且IL-8分泌量多于常壓下培養(yǎng)的MDA-MB-231 細(xì)胞(p0.05)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)第14天獲取的負(fù)壓組MDA-MB-231腫瘤標(biāo)本在基因及蛋白表達(dá)層面較對(duì)照組呈現(xiàn)出更明顯的上皮間質(zhì)化傾向;第14天及第28天獲取的負(fù)壓組MDA-MB-231腫瘤標(biāo)本血管密度均大于對(duì)照組標(biāo)本(p0.05)。2、間斷溫和負(fù)壓環(huán)境對(duì)MDA-MB-231三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖無(wú)顯著影響體外間斷溫和負(fù)壓條件下培養(yǎng)的MDA-MB-231三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖力與常壓培養(yǎng)下同類細(xì)胞差別不顯著(p0.05),但I(xiàn)L-6分泌量多于常壓下培養(yǎng)的MDA-MB-231 細(xì)胞(p0.05)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)第14天獲取負(fù)壓組標(biāo)本的皮膚及皮下組織淺層乏氧細(xì)胞較常壓組多,但瘤體內(nèi)部乏氧細(xì)胞差異不顯著;第14天及第28天獲取的負(fù)壓組MDA-MB-231腫瘤標(biāo)本CD31蛋白表達(dá)量大于對(duì)照組標(biāo)本(p0.05),但Ki67陽(yáng)性細(xì)胞百分比兩組差異不顯著(p0.05)�；铙w熒光成像各時(shí)段兩組熒光信號(hào)強(qiáng)度變化趨勢(shì)類似,無(wú)明顯差異(p0.05)。3、間斷溫和負(fù)壓環(huán)境促進(jìn)MDA-MB-231三陰性乳腺癌細(xì)胞死亡體外間斷溫和負(fù)壓環(huán)境下培養(yǎng)的MDA-MB-231三陰性乳腺癌細(xì)胞凋亡比例較大,活細(xì)胞比例低于常壓培養(yǎng)同類細(xì)胞(p0.05),且TNF-α分泌量多于常壓培養(yǎng)的 MDA-MB-231 細(xì)胞(p0.05)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)第14天獲取的負(fù)壓組MDA-MB-231腫瘤標(biāo)本較對(duì)照組Caspase-3表達(dá)量增多;第28天獲取的負(fù)壓組MDA-MB-231腫瘤標(biāo)本壞死面積比例較常壓組標(biāo)本高(p0.05)。研究結(jié)論:1、間斷溫和負(fù)壓環(huán)境培養(yǎng)增加MDA-MB-231三陰性乳腺癌細(xì)胞侵襲力,促進(jìn)IL-8分泌,增加瘤體內(nèi)血管密度及腫瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)化程度。2、間斷溫和負(fù)壓環(huán)境培養(yǎng)對(duì)MDA-MB-231三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖影響不顯著,但可促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞分泌IL-6增多。同時(shí),動(dòng)物模型中,間斷溫和負(fù)壓直接作用可造成皮下組織淺層瞬時(shí)乏氧細(xì)胞增多,但皮下種植瘤瞬時(shí)乏氧細(xì)胞變化不明顯。間斷溫和負(fù)壓主要影響皮下種植瘤局部微環(huán)境,如增強(qiáng)炎性因子分泌及促進(jìn)血管增多。3、間斷溫和負(fù)壓使MDA-MB-231三陰性乳腺癌細(xì)胞凋亡比例增多,活細(xì)胞比例減少,同時(shí)促進(jìn)TNF-α分泌。在MDA-MB-231瘤體生長(zhǎng)早期,間斷溫和負(fù)壓可使凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)增多;在MDA-MB-231瘤體生長(zhǎng)中后期,間斷溫和負(fù)壓可使瘤體壞死面積比例明顯增大。
【圖文】：

斷溫和負(fù)壓對(duì)ＭＤＡ－ＭＢ－２３１三陰性乳腺細(xì)胞侵Ｉｎｆｌｏｗ邋Ａ邐Ｄ逡逑ｋｚ—＾邐ｉ—ｃ＝＞逡逑Ｏｕｔｆｌｏｗ逡逑斷溫和負(fù)壓細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)逡逑口；邋Ｂ進(jìn)氣口控制閥；Ｃ負(fù)壓監(jiān)測(cè)器；Ｄ細(xì)胞培養(yǎng)皿；Ｅ：通過(guò)Ｃ監(jiān)測(cè)系統(tǒng)內(nèi)負(fù)壓值，再根據(jù)Ｃ提示數(shù)據(jù)調(diào)節(jié)Ｂ，，使值恒定于－２５邋ｍｍＨｇ。逡逑

１．５－逡逑Ｉ邋，0．邋＿邋ｆ逡逑ＭＢ逡逑。．５．邋■逡逑０．０－Ｉ￣＾邐邋＼￣——逡逑ＯｍｍＨｇ邐－２５ｍｍＨｇ逡逑細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)逡逑組透膜ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細(xì)胞鏡下觀（２００邋Ｘ邋）；逡逑Ｈｇ邋組透膜邋ＭＤＡ－ＭＢ－２３１邋細(xì)胞鏡下觀（２０0ｘ）；逡逑膜細(xì)胞結(jié)晶紫脫色液在５９５ｎｍ測(cè)量的ＯＤ值的組間比較：．７６邋±０．０７，較常壓組（ＯｍｍＨｇ組）為１．０６邋±０．０６；提示多于常壓組（ｐ邋＜０．０５）。逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 穆大力;欒杰;郭小雙;辛敏強(qiáng);劉春軍;陳琳;;Brava輔助自體脂肪移植矯正乳房局部缺損[J];組織工程與重建外科雜志;2015年02期

2 王溯;陳曉蓉;;成年裸鼠和成人體表皮膚的比較組織形態(tài)學(xué)研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年08期

本文編號(hào)：2668729