發(fā)布時間：2020-05-16 17:36

【摘要】：目的:探討伯舒替尼(Bosutinib)對肝癌細胞Hep G2的放療增敏效果及其可能的機制,為臨床上提高肝癌的放療效果提供實驗依據(jù)。方法:實驗設計為單純藥物組、單純放療組(2Gy)、單純放療組(4Gy)藥物+放療組(2Gy)和藥物+放療組(4Gy);采用CCK-8法檢測,選取兩個時間點(24h、48h)檢測不同藥物濃度與不同放射劑量對人肝癌細胞Hep G2的抑制作用;進一步通過細胞克隆實驗觀察細胞存活情況。最后用流式細胞儀檢測各組的細胞周期。應用統(tǒng)計軟件SPSS22.0處理數(shù)據(jù),運用多元相關方法、方差分析方法,分析各因素對人肝癌細胞Hep G2的抑制作用以及各因素之間的作用。結果:1.單純藥物組的肝癌細胞Hep G2的生長抑制率,作用24h、48h后分別為1000n M/ml、600n M/ml。細胞存活分數(shù)有時間-劑量效應,方差分析結果顯示,當藥物濃度大于200 n M/ml后的藥物濃度和作用時間的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。放療劑量、伯舒替尼濃度均對人肝癌細胞Hep G2的生長有抑制作用,而且藥物濃度和放療劑量具有協(xié)同作用。通過分析肝癌細胞的抑制率與伯舒替尼濃度、時間的相關性、放療劑量,結果發(fā)現(xiàn),生長抑制率受放療劑量、伯舒替尼濃度、作用時間的影響,呈正相關關系,數(shù)據(jù)結果通過分析均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。實驗的結果提示伯舒替尼對肝癌細胞株Hep G2的生長抑制率有顯著的影響,在肝癌細胞體外培養(yǎng)實驗中顯示出增敏效應,同時增敏效果隨著放療劑量越大更加明顯。2.細胞克隆實驗中,伯舒替尼藥物濃度設定為100n M/ml時候,單純伯舒替尼藥物聯(lián)合放療后對人肝癌細胞Hep G2的生長增殖起到較強的抑制作用,隨著放療劑量的增加,伯舒替尼藥物聯(lián)合放療對Hep G2細胞的增殖抑制作用更加明顯。3.不同藥物濃度處理24、48h后,檢測細胞的周期分布,發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度和作用時間的增加,細胞G1、G2、S期所占比例均發(fā)生了變化。隨著伯舒替尼藥物濃度增加在作用24h內檢測,細胞周期中的S期所占細胞周期的百分比逐漸減少,通過作用時間的增加,即48h后,S期所占細胞周期的比例降低的更加明顯。伯舒替尼聯(lián)合放療后,檢測各細胞周期所占百分比,結果經(jīng)過分析后均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。肝癌細胞周期的分布改變更加明顯。結論:伯舒替尼可以明顯的抑制肝癌細胞生長,伯舒替尼藥物聯(lián)合放療對Hep G2細胞的增殖有更加明顯的抑制作用。伯舒替尼具有較強的放療增敏作用,其作用機制可能是通過改變細胞周期時相的分布實現(xiàn)。
【圖文】：

圖 3 不同濃度藥物作用 24h、48h 后 CCK-8 檢測的細胞存活分數(shù)表 4 單純藥物組、放療 2Gy、4Gy 后單純放療組與藥物+放療組后 CCK-8 檢的 SF 值方差分析表比較（x士s n=3）2Gy 4Gy24h P 值 48h P 值 24h P 值 48h P 值藥物組0.8066 士0.01520.000 0.7165 士0.03590.0000.8067 士0.01520.000 0.7165 士0.03590.000放療組0.9464 士0.00780.001 0.9083 士0.01540.0000.9038 士0.00840.000 0.8675 士0.01150.000物+放療0.7118 士0.03110.000 0.6937 士0.00740.000 0.6284 士0.00150.000 0.5574 士0.01460.000表 5 放療 2Gy 時不同濃度的作用 24h、48h 后 CCK-8 檢測的 SF 值方差分析表x 士 s n=3）濃度 nM/ml 作用時間 24h P 值 作用 48h P 值

環(huán)境下的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將培養(yǎng) 10-14d 后的細胞按照步驟 2 計算細胞克隆數(shù)，整理并分析實驗結果。2.3.實驗結果伯舒替尼藥物在不同濃度作用 10 天后，首先選擇顯微鏡計算大于 50 個細胞的細胞團，大于 50 個細胞的細胞團算做是一個細胞克隆，然后計數(shù)每個細胞培養(yǎng)皿中細胞的克隆數(shù)，，我們發(fā)現(xiàn)細胞培養(yǎng)皿內，細胞的克隆數(shù)值隨伯舒替尼藥物的濃度增加而減少（見圖 7）。在伯舒替尼藥物濃度設定為 100nM/ml 時候,單純伯舒替尼藥物聯(lián)合放療后，實驗結果發(fā)現(xiàn)藥物聯(lián)合放療對人肝癌細胞 HepG2的生長增殖起到良好的抑制作用，另外，隨著放療劑量的增加，伯舒替尼藥物聯(lián)合放療對 HepG2 細胞的增殖抑制作用更加明顯（見圖 8）。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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本文編號：2667078