【摘要】：研究背景與目的胃癌(gastric carcinoma,GC)是世界范圍內(nèi)最常見惡性腫瘤之一,也是腫瘤相關(guān)死亡的第二大原因。胃癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移依然是威脅患者生存及疾病經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的重要因素。既往研究顯示酸性核磷蛋白32E(acidic nuclear phosphoprotein 32 kilodalton E,ANP32E)具有調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、突觸形成和H2A.Z染色質(zhì)組裝等功能。在腫瘤調(diào)節(jié)方面中,ANP32E也被發(fā)現(xiàn)在一系列腫瘤組織中顯著上調(diào)并與腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)聯(lián)。目前,有關(guān)ANP32E在胃癌中的功能研究尚缺乏報(bào)道。因此在本研究中,ANP32E的在胃癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)水平,分析其與患者臨床結(jié)局的相關(guān)關(guān)系并進(jìn)行ANP32E生物學(xué)功能分析,以期為胃癌患者的治療和預(yù)后分子標(biāo)記物的查找提供理論依據(jù)。研究方法為明確胃癌組織與癌旁組織及胃癌細(xì)胞株與正常胃黏膜上皮細(xì)胞之間ANP32E的表達(dá)水平差異,本研究采用熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、Wester blot及免疫組化(immunohistochemical,IHC)的方法進(jìn)行檢測。為了明確ANP32E表達(dá)的臨床意義,使用卡方檢驗(yàn)方法分析ANP32E表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的相關(guān)性,為了比較不同病理參數(shù)與胃癌患者5年生存時(shí)間之間的關(guān)系,使用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線。使用Cox模型進(jìn)行胃癌進(jìn)展的多因素風(fēng)險(xiǎn)分析。為了明確ANP32E在胃癌轉(zhuǎn)移中的功能,使用慢病毒載體構(gòu)建ANP32E過表達(dá)細(xì)胞株以及shRNA介導(dǎo)的ANP32E抑制細(xì)胞株。使用traswell實(shí)驗(yàn)檢測ANP32E過表達(dá)和抑制對胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。使用qRT-PCR和Wester blot檢測轉(zhuǎn)移相關(guān)E-cadherin,MMP-7的mRNA和蛋白表達(dá)水平。研究結(jié)果ANP32E在胃癌臨床樣本顯著上調(diào),相比于正常人胃黏膜上皮細(xì)胞(GES1),8株胃癌細(xì)胞中(NCI-N87,AGS,MKN45,SGC7901,MKN28,HGC27,MGC803與KATO3)ANP32E表達(dá)也顯著上調(diào)。臨床資料的關(guān)聯(lián)分析顯示,胃癌患者的ANP32E表達(dá)水平與胃癌浸潤程度及臨床分期正相關(guān)。其中,Ⅲ+Ⅳ期患者的ANP32E表達(dá)的頻率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期患者。未侵及漿膜層胃癌陽性ANP32E表達(dá)的頻率低于發(fā)生漿膜層浸潤患者。對ANP32E的高表達(dá)和低表達(dá)患者進(jìn)行生存分析發(fā)現(xiàn),ANP32E低表達(dá)的胃癌患者術(shù)后5年生存率顯著高于ANP32E高表達(dá)患者。使用慢病毒過表達(dá)和抑制胃癌細(xì)胞中ANP32E的水平后,劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)顯示ANP32E可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲水平,而抑制ANP32E表達(dá)可以顯著降低胃癌細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移能力。同時(shí),過表達(dá)ANP32E,E-cadherin,MMP-7的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào);而在ANP32E表達(dá)抑制細(xì)胞中,E-cadherin,MMP-7的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著下降。研究結(jié)論ANP32E的表達(dá)在胃癌組織上調(diào),ANP32E的高表達(dá)與胃癌患者的不良預(yù)后有關(guān),ANP32E可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲,其潛在調(diào)節(jié)機(jī)制與上調(diào)E-cadherin,MMP-7的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

癌組織（圖 1g&h）。分級的依據(jù)為：ANP32E 低表達(dá)（-）的胃癌組織，陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)/視野內(nèi)總細(xì)胞數(shù)百分比低于 5%；5%<陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)/視野內(nèi)總細(xì)胞數(shù)百分比<50%；50%<陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)/視野內(nèi)總細(xì)胞數(shù)百分比<75%，75%<陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)/視野內(nèi)總細(xì)胞數(shù)百分比。

ANP32E陽性及陰性胃癌患者Kaplan-Meier生存曲線
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2

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本文編號：2667016