【摘要】：食管癌是世界上第八大最常見的惡性腫瘤,全球每年有超過45萬新發(fā)病例。根據(jù)病理類型不同,食管癌主要分為食管鱗狀細(xì)胞癌(簡稱食管鱗癌,ESCC)和食管腺癌(EAC)。我國的食管癌以食管鱗癌為主,食管鱗癌的發(fā)病率和的腫瘤相關(guān)死亡率都占全部惡性腫瘤的第四位。課題組前期通過全基因組測序、全外顯子測序和比較基因組雜交全面而系統(tǒng)地揭示了食管鱗癌的基因組改變情況,并且首次發(fā)現(xiàn)FAM135B是一個新的腫瘤相關(guān)基因。本課題以實驗室前期研究成果為基礎(chǔ),以新基因FAM135B為研究對象,研究了其在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的功能和作用機(jī)制,也為進(jìn)一步研究其臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。我們首先通過人食管鱗癌組織芯片的免疫組化染色研究FAM135B蛋白表達(dá)量和臨床指標(biāo)以及患者預(yù)后的關(guān)系,研究發(fā)現(xiàn)FAM135B蛋白在食管鱗癌細(xì)胞胞漿中的表達(dá)量顯著高于癌旁對照,并且其表達(dá)量和患者的生存預(yù)后顯著相關(guān),揭示了FAM135B的重要臨床意義。接下來通過細(xì)胞實驗,我們發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定高表達(dá)FAM135B可增強(qiáng)食管鱗癌細(xì)胞的惡性表型,包括增殖、克隆形成、細(xì)胞周期進(jìn)展以及對順鉑誘導(dǎo)凋亡的抵抗。裸鼠皮下的增殖實驗證明FAM135B能顯著增強(qiáng)食管鱗癌細(xì)胞在體內(nèi)增殖能力。然后我們通過免疫共沉淀和質(zhì)譜鑒定的方法獲得了和FAM135B相互作用的蛋白,并利用免疫熒光、western blot、流式細(xì)胞儀和qPCR等方法研究了FAM135B在食管鱗癌中促癌的作用機(jī)制。免疫共沉淀和質(zhì)譜分析結(jié)果表明FAM135B和GRN具有相互作用。信號通路分析表明FAM135B通過促進(jìn)GRN的分泌從而活化PI3K/AKT/mTOR通路,最終起到促進(jìn)腫瘤增殖和對順鉑耐藥的作用。在此過程中FAM135B和GRN形成正反饋,增強(qiáng)各自的促癌作用,并且這一作用可以被mTOR的抑制劑雷帕霉素和GRN的siRNA抑制。由于GRN是一個重要的生長因子,有大量報道證明其在肝癌等癌種中發(fā)揮了重要功能,但是其在食管鱗癌里的研究并不多。細(xì)胞實驗結(jié)果表明,GRN能促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞增殖以及降低對順鉑的敏感性。為了研究GRN在食管鱗癌中的臨床意義,我們利用人食管鱗癌組織芯片的免疫組化染色研究了 GRN蛋白表達(dá)量和臨床指標(biāo)以及患者預(yù)后的關(guān)系,研究發(fā)現(xiàn)GRN在食管鱗癌組織中的表達(dá)量顯著高于癌旁對照,并且雖然GRN蛋白和食管鱗癌患者的生存預(yù)后不具有顯著相關(guān)性,但是同時高表達(dá)FAM135B和GRN的患者生存預(yù)后顯著變差,五年生存率為0,COX回歸分析還表明同時高表達(dá)FAM135B和GRN可以作為是食管鱗癌獨立的預(yù)后因素。此外,我們還通過構(gòu)建FAM135B高表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠觀察了 FAM135B對小鼠發(fā)育和自發(fā)成瘤的影響,并利用化學(xué)藥物4-NQO誘導(dǎo)食管癌發(fā)生模型,研究FAM135B在此過程中的作用。演技結(jié)果表明FAM135B轉(zhuǎn)基因小鼠易于自發(fā)多種腫瘤,包括肝癌、卵巢癌等。在4-NQO誘導(dǎo)下,轉(zhuǎn)基因小鼠形成的食管腫瘤顯著多于對照小鼠,且小鼠的生存期顯著縮短。最后,通過ELISA試劑盒檢和Western blot檢測食管鱗癌細(xì)胞分泌的GRN水平和小鼠血清中GRN水平,發(fā)現(xiàn)FAM135B高表達(dá)后,食管鱗癌細(xì)胞分泌的GRN顯著增加,轉(zhuǎn)基因小鼠血清中GRN水平也顯著高于對照。這一結(jié)果提示血清中GRN可能具有一定臨床診斷和復(fù)發(fā)監(jiān)測的意義。本課題研究了 FAM135B及其相互作用蛋白GRN在食管鱗癌中的功能和作用機(jī)制,同時也初步研究了兩者和臨床指標(biāo)的相關(guān)性,為進(jìn)一步研究其應(yīng)用價值提供了理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

食管癌是世界上第八大最常見的惡性腫瘤，全球每年有超過４５萬新發(fā)病例逡逑［Ｆｅｒｌａｙｅｔａｌ．，邋２０１５］。食管癌相關(guān)死亡率在全部癌癥相關(guān)死亡率中排名第六，是發(fā)病逡逑率和死亡率都很高的惡性腫瘤（圖１）。根據(jù)病理類型不同，食管癌主要可以分為兩逡逑類：食管淲狀細(xì)胞癌（簡稱食管淲癌，，ＥＳＣＣ）和食管腺癌（ＥＡＣ）。近年來食管腺逡逑癌的發(fā)病率有所升高，但食管淲狀上皮細(xì)胞癌仍然是占比最大的食管癌［Ｐｅｎｎａｔｈｕｒｅｔ逡逑ａｌ．，２０１３］。逡逑Ｅｓｔｉｍａｔｅｄ邋ｎｕｍｂｅｒ邋（ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ邋ａｎｄ邋ｍｏｒｔａｌｉｔｙ），邋ｂｏｔｈ邋ｓｅｘｅｓ，邋（ｔｏｐ邋１０邋ｃａｎｃｅｒ邋ｓｉｔｅｓ）邋ｉｎ邋２０１２逡逑Ｉ邐■邋ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ逡逑■邋Ｍｏｒｔａｌｌｔｙ邐Ｗｏｒｌｄ邐Ｃｈｉｎａ逡逑Ｌｕｎｇ逡逑Ｃｏｌｏｒｅｃｔｕｍ逡逑｜邐Ｂｒｅａｓｔ逡逑Ｓｔｏｍａｃｈ逡逑＿邋—逡逑Ｐｒｏｓｔａｔｅ逡逑Ｏｅｓｏｐｈａｇｕｓ逡逑Ｃｅｒｖｉｘ邋ｕｔｅｒｉ逡逑悘Ｉ逡逑Ｐａｎｃｒｅａｓ逡逑Ｌｅｕｋａｅｍｉａ逡逑２００００００．０邋１００００００．０邋0！0邋１００００００．０邋２００００００．０逡逑_瀇瀗齲登淇鄭澹祝猓鰨潁觶幔簦錚潁澹ǎ瑁酰皰澹紓�。．抓．倽}瘟耍掊澹懇誨澹咭誨義希翦澹桑睿簦澹恚停椋錚睿幔戾澹粒紓澹睿悖澹媯錚蟈澹遙澹螅澹幔潁悖楨澹錚鑠澹茫幔睿悖澹蟈澹玻埃保稿危恚殄義賢跡比蠔橢泄鬧琢齜⒉÷屎退勞雎叔義希疲椋紓酰潁邋澹卞澹茫幔睿悖澹蟈澹恚錚潁猓椋洌椋簦澹幔睿溴澹洌澹幔簦楨澹潁幔簦邋澹幔潁錚酰睿溴澹簦瑁邋澹鰨錚潁歟溴澹幔睿溴澹椋鑠澹茫瑁椋睿徨義現(xiàn)泄鞘徹馨┑母叻⒌厙

本文編號：2665929