【摘要】：原發(fā)性肝癌具有高死亡率和高發(fā)病率的特點,嚴重威脅人類健康。多種因素可以誘導肝臟腫瘤的發(fā)生發(fā)展,近年來的研究表明多個基因參與肝臟腫瘤進程,但是具體機制仍需不斷探索。研究報道肝臟合成的膽汁酸是一種重要的信號分子,適宜濃度的膽汁酸有利于脂類等物質的消化吸收和肝臟再生及修復;當膽汁淤積時,過高濃度的膽汁酸則會損傷肝細胞導致炎癥,甚至肝臟腫瘤的發(fā)生。膽汁酸受體Fxr(Farnesoid X Receptor,法尼醇受體)參與膽汁酸合成、轉運、代謝,維持體內膽汁酸平衡,防止高濃度膽汁酸造成的毒害作用。Fxr~(-/-)的小鼠自發(fā)生成腫瘤,隨后多項研究表明Fxr是一個腫瘤抑制因子。Dlk1(Delta-like 1,δ樣蛋白同系物1)作為一種印跡基因,與腫瘤生成密切相關,已被證實它可以促進惡性腫瘤發(fā)展,并且有望成為早期肝臟腫瘤診斷標志物。由于Fxr和Dlk1在肝臟腫瘤進程中均扮演重要角色,本研究假設Fxr與Dlk1之間存在某種調控關系,并首次證實Dlk1是Fxr的下游基因,初步揭示了Fxr抑制Dlk1表達的分子機理。主要研究內容如下:1.激活Fxr抑制Dlk1表達使用Fxr特異性激動劑GW4064分別處理骨髓間充質干細胞BMSC和人肝臟腫瘤細胞Huh7 24 h,QRT-PCR檢測Fxr下游基因Bsep或Shp表達顯著升高,確定Fxr已激活;QRT-PCR和Western Blot檢測Dlk1表達顯著降低,這些結果表明激活Fxr抑制Dlk1表達。2.激活Fxr抑制Dlk1啟動子的轉錄活性為了驗證Fxr是否直接調控Dlk1表達,我們構建了包含預測結合位點的pGL3-Dlk1啟動子報告基因質粒,轉染Hep1-6細胞并使用Fxr特異性激動劑GW4064處理24 h,雙熒光素酶報告基因檢測結果顯示,GW4064顯著下調pGL3-Dlk1啟動子轉錄活性。3.建立小鼠肝損傷模型在C57/BL小鼠的標準日糧中添加0.1%3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氫-2,4,6-三甲基吡啶(3,5-Diethoxycarbonyl-1,4-Dihydro-2,4,6-Collidine,DDC),飼喂小鼠7天以建立肝損傷模型。結果顯示血清丙氨酸轉氨酶(Alanine Ami-notransferase,ALT)和天冬氨酸轉氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)水平顯著升高;蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-Eosin Staining,HE)發(fā)現(xiàn)肝臟匯管區(qū)出現(xiàn)炎性細胞浸潤,表明成功建立肝損傷模型。4.在小鼠肝損傷模型中,CDCA減輕DDC所致肝臟損傷在小鼠的標準日糧中添加0.1%DDC同時使用20 mg/kg鵝脫氧膽酸(Chenodeoxycholic Acid,CDCA)每天對其進行灌胃處理,7天后采集肝臟組織。CDCA處理后,QRT-PCR檢測Bsep升高,Western Blot檢測Dlk1表達顯著下調。同時觀察到CDCA灌胃處理后,血清ALT、AST水平降低,HE染色結果也顯示CDCA組肝臟炎癥明顯減輕。這些結果表明CDCA通過激活Fxr抑制Dlk1表達,可能是減輕DDC所致肝臟損傷的原因。
【圖文】：

DNA 結合域（DBD），鉸鏈區(qū)（Hinge Region）等（Wang et al 2008; Fausto et al 2012）（圖1-1）。DBD 區(qū)的鋅指結構與 DNA 結合和二聚化有關；當配體結合到 LBD 區(qū)域后，改變核受體原有的空間構象，使之與靶基因啟動子區(qū)域的 Fxr 反應元件（FXRResponse Element, FXRE）結合，調控靶基因轉錄。人源 Fxr 位于染色體 12q23.1，包含 10 個內含子和 11 個外顯子，共有 76997 個堿基。小鼠 Fxr 基因轉錄后可分為 4 個亞型：Fxr 1、Fxr 2、Fxrβ1 和 Fxrβ2（Zhang et al 2002; Cai et al 2007），4 個亞型組織分布并不相同，說明它們的生理功能也許存在差異。最初的研究顯示 Fxr 僅表達于腎上腺、腎臟和肝腸系統(tǒng)（Forman et al 1995），后來研究人員運用實時 PCR 技術表明 Fxr 也表達于胃、肺、心和脂肪

膽汁酸核受體 Fxr 對 Dlk1 表達影響及機制1.2.4 Fxr 與肝臟腫瘤膽汁酸濃度過高可促進肝細胞惡性轉化（Perez and Briz 2009），膽汁酸受體Fxr 參與其合成、轉運、代謝等過程，維持體內膽汁酸穩(wěn)態(tài)。肝臟 Fxr 調控膽鹽輸出泵（Bile Salt Export Pump, Bsep）等膽汁酸轉運體基因的轉錄，參與膽汁酸肝腸循環(huán)（Soroka et al 2010; Lan et al 2012）。Fxr 還通過誘導小分子異源二聚體伴侶（Short Hetero Dimer Partner, Shp）基因的轉錄，進而調控一系列下游通路基因以促進膽汁酸排泄（Vanwijngaerden et al 2011; Seok et al 2013）。Fxr 調控多條信號通路以平衡體內膽汁酸水平，，避免高濃度膽汁酸引起的毒害作用（Chiang2009）（圖 1-2）。
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 熊浩君;趙凱;陳姍;何鳳田;陳丙波;;法尼酯衍生物X受體(FXR)在糖尿病腎病中的研究進展[J];中國比較醫(yī)學雜志;2012年07期

2 李爍,張志文,管又飛;膽汁酸受體FXR的研究進展[J];生理科學進展;2003年04期

3 晁祥嵩;國麟祺;丁隆;;肝再生過程中膽汁酸對FXR的影響[J];黑龍江醫(yī)藥科學;2014年03期

4 傅冬和;劉仲華;黃建安;陳金華;蔡正安;趙淑娟;;高通量篩選研究茯磚茶對FXR模型的作用[J];食品科學;2007年05期

5 盛黎;范竹萍;;核受體FXR與代謝綜合征[J];國際消化病雜志;2007年04期

6 印永祥;張巖;趙華;;法尼酯X受體FXR在乳腺浸潤性導管癌中的表達[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2011年01期

7 楊梅;張富春;張文寶;;膽汁酸及FXR在細胞增生和分化中的作用研究進展[J];科技導報;2017年04期

8 段興平;孟強;劉克辛;;非酒精性脂肪性肝炎治療的潛在新靶點:核受體FXR[J];世界華人消化雜志;2016年15期

9 陳徐佳;馬嵐青;;膽汁酸核受體FXR在非酒精性脂肪性肝病中的作用[J];世界華人消化雜志;2015年08期

10 孟強;劉克辛;;核受體FXR在肝再生中的作用[J];世界華人消化雜志;2013年34期

相關會議論文 前10條

1 傅冬和;劉仲華;黃建安;陳金華;蔡正安;趙淑娟;;茯磚茶對FXR作用的高通量篩選研究[A];第四屆海峽兩岸茶業(yè)學術研討會論文集[C];2006年

2 傅冬和;劉仲華;黃建安;陳金華;蔡正安;趙淑娟;;高通量篩選研究茯磚茶對FXR的作用[A];湖南省茶葉學會2007年學術年會論文集[C];2007年

3 婁桂予;;葡萄糖對FXR基因啟動子的調節(jié)[A];第九屆西南三省一市生物化學與分子生物學學術交流會論文集[C];2008年

4 李爍;金正賢;黃世錚;劉晶;王華e

本文編號：2665686