發(fā)布時(shí)間：2020-05-13 17:02

【摘要】：目的:以肺癌A549細(xì)胞作為研究對(duì)象,探討白花蛇舌草總黃酮與順鉑聯(lián)合對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡的影響及可能機(jī)制。方法:用體外培養(yǎng)法培養(yǎng)肺癌A549細(xì)胞,采用對(duì)數(shù)期的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行該項(xiàng)試驗(yàn),隨機(jī)分為四個(gè)實(shí)驗(yàn)組:陰性對(duì)照組;白花蛇舌草總黃酮組;順鉑組;聯(lián)合組(白花蛇舌草總黃酮+順鉑組)。采用MTT法來檢測(cè)白花蛇舌草總黃酮、順鉑兩種藥物單用及二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖的影響,并采用Q值公式來進(jìn)行評(píng)估兩藥聯(lián)合干預(yù)的作用效果;給予流式細(xì)胞分析儀檢查并測(cè)定兩種干預(yù)藥物對(duì)于細(xì)胞的分化周期以及細(xì)胞的凋亡率的作用效果;RT-PCR技術(shù)檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白p-AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bax m RNA的表達(dá)水平;Western bloting檢測(cè)p-AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:1、與陰性對(duì)照組對(duì)比,白花蛇舌草總黃酮組、順鉑組對(duì)肺癌A549細(xì)胞的增殖呈現(xiàn)時(shí)間-濃度依賴抑制作用,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);聯(lián)合組優(yōu)于白花蛇舌草總黃酮組、順鉑組,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);兩藥聯(lián)合干預(yù)的作用表現(xiàn)為單純相加。2、在使用藥物干預(yù)肺癌A549細(xì)胞48小時(shí)以后,白花蛇舌草總黃酮組G1期細(xì)胞的比例升高,S、G2期細(xì)胞比例下降,與陰性對(duì)照組比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);順鉑組S期比例升高,與陰性對(duì)照組比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與陰性對(duì)照組及順鉑組比較,聯(lián)合組G1期細(xì)胞比例升高,與陰性對(duì)照組及白花蛇舌草總黃酮組比較,聯(lián)合組S期比例升高,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。白花蛇舌草總黃酮及順鉑均能誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞凋亡,白花蛇舌草總黃酮組、順鉑組凋亡率分別為(10.870±0.442)%、(16.648±0.307)%,與正常對(duì)照組[(1.152±0.275)%]比,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),聯(lián)合組的A549細(xì)胞凋亡率[(19.856±0.649)%],比白花蛇舌總黃酮組、順鉑組有增加,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、與陰性對(duì)照組對(duì)比,白花蛇舌草總黃酮組、順鉑組明顯抑制肺癌A549細(xì)胞p-AKT、BCL-2表達(dá)(P0.05),明顯促進(jìn)Caspase-9、Bax蛋白的表達(dá)(P0.05);與陰性對(duì)照組和單一藥物干預(yù)組相比較,聯(lián)合組的協(xié)同作用更強(qiáng),差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、白花蛇舌草總黃酮、順鉑均具有抑制肺癌A549細(xì)胞增殖及促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用,兩藥聯(lián)合作用明顯加強(qiáng)。2、白花蛇舌草總黃酮聯(lián)合順鉑促進(jìn)肺癌A549細(xì)胞的凋亡的機(jī)制可能是通過降低p-AKT的表達(dá)程度,從而增強(qiáng)Caspase-9的表達(dá)程度、下調(diào)Bcl-2的表達(dá)程度、上調(diào)Bax的表達(dá)程度,升高Bax/Bcl-2的比值。
【圖文】：

3.3 白花蛇舌草總黃酮聯(lián)合順鉑對(duì)肺癌 A549 細(xì)胞 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax 及蛋白表達(dá)的影響3.3.1 白花蛇舌草總黃酮、順鉑對(duì)肺腺癌 A549 細(xì)胞 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax mRNA 表達(dá)的影響白花蛇舌草總黃酮、順鉑均可以抑制 p-AKT、BCL-2 mRNA 的表達(dá)，促進(jìn)肺腺癌 A549 細(xì)胞 Bax、Caspase-9 mRNA 表達(dá)，并且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。白花蛇舌草總黃酮與順鉑聯(lián)合作用效果更強(qiáng)，與單一藥物組相比較，，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見圖 3.3.1.1。應(yīng)用電腦圖像分析系統(tǒng)分析 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax 和內(nèi)參 Actin 之間的灰度值，pAKT/Actin、Caspase-9/Actin、BCL-2/Actin、Bax/Actin 灰度值比值見表3.3.1、圖 3.3.1.2。逡逡

圖 3.3.1.2 FHD、DDP 對(duì) A549 細(xì)胞 p-AKT、caspase-9 、BCL-2、Bax mRNA 表達(dá)的比較3.3.2 FHD、DDP 對(duì) A549 細(xì)胞 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax 蛋白表達(dá)水平的影響同陰性對(duì)照組相比較，白花蛇舌草總黃酮、順鉑均可以明顯降低 p-AKT、BCL-2 蛋白的表達(dá)水平，提高促凋亡蛋白 Caspase-9、Bax 蛋白的表達(dá)。與陰性對(duì)照組以及單一用藥組相比較，聯(lián)合用藥組作用效果更明顯，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見圖 3.3.2.1。應(yīng)用電腦圖像分析系統(tǒng)分析 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax 和內(nèi)參 Actin 的灰度值，p-AKT/Actin、Caspase-9/Actin、BCL-2/Actin、Bax/Actin 灰度值比值見表 3.3.2、圖 3.3.2.2。00.10.2對(duì)照組 FHD組 DDP組 FHD+DDP組
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2662260