發(fā)布時(shí)間：2020-05-13 09:06

【摘要】：目的:檢測結(jié)直腸癌組織和結(jié)直腸癌細(xì)胞系中miR-1207-5p的表達(dá)水平,分析miR-1207-5p的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征以及預(yù)后之間的關(guān)系。再通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染建立異常表達(dá)miR-1207-5p的細(xì)胞模型,分析miR-1207-5p對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系生物學(xué)行為的影響,為結(jié)直腸癌診斷、治療以及相關(guān)研究提供新的靶點(diǎn)。方法:1.miR-1207-5p在結(jié)直腸癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)提取組織及細(xì)胞系中的總RNA,采用熒光定量PCR的方法檢測40例患者結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織中miR-1207-5p的相對(duì)表達(dá)量,同時(shí)檢測miR-1207-5p在HCT116、SW480和SW620三種結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的相對(duì)表達(dá)量。2.miR-1207-5p與結(jié)直腸癌患者臨床病理學(xué)特征及預(yù)后之間的關(guān)系收集40例結(jié)直腸癌患者的臨床病理資料,并對(duì)患者進(jìn)行術(shù)后隨訪。分析miR-1207-5p的相對(duì)表達(dá)量與患者臨床病理學(xué)特征以及預(yù)后之間的關(guān)系。3.miR-1207-5p對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系SW480生物學(xué)行為的影響利用陽離子脂質(zhì)體方法,將miR-1207-5p mimics以及相應(yīng)的NC(mimics control)轉(zhuǎn)染至SW480中,利用熒光定量PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果,并對(duì)異常表達(dá)miR-1207-5p的細(xì)胞模型進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期檢測等相關(guān)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn),并分析miR-1207-5p對(duì)SW480生物學(xué)行為的影響。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,用Graph Pad Prism5軟件進(jìn)行相關(guān)圖表的制作。miR-1207-5p的相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCT值衡量,采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)(Wilcoxon Matched Pairs Test)分析結(jié)直腸癌組織及配對(duì)正常組織中miR-1207-5p的表達(dá)量,采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(Student’s t-test)分析細(xì)胞系中miR-1207-5p的表達(dá)量。miR-1207-5p表達(dá)量與患者臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系用χ2檢驗(yàn)分析�；颊咝g(shù)后生存狀況用Kaplan-Meier生存曲線分析,miR-1207-5p的表達(dá)量與患者術(shù)后生存狀況之間的關(guān)系用log-rank test檢驗(yàn)分析。本研究所涉及的檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P0.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.miR-1207-5p在結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)40例患者結(jié)直腸癌組織及其配對(duì)正常組織中,miR-1207-5p在結(jié)直腸癌組織中相對(duì)表達(dá)量(mean±SD:0.0546±0.0131)顯著低于癌旁正常組織(mean±SD:0.1928±0.0317,P0.01)。將正常組織中miR-1207-5p的表達(dá)量標(biāo)準(zhǔn)化為1之后,miR-1207-5p在HCT116、SW480和SW620中相對(duì)表達(dá)量分別為0.1258、0.0414和0.5065,三種細(xì)胞系中miR-1207-5p的表達(dá)量與對(duì)照組相比均明顯降低(P0.01)。2.miR-1207-5p與結(jié)直腸癌患者臨床病理學(xué)特征及預(yù)后之間的關(guān)系依據(jù)miR-1207-5p表達(dá)量的平均值將40例患者分為相對(duì)高表達(dá)組和相對(duì)低表達(dá)組,相對(duì)低表達(dá)組的患者,腫瘤臨床分期更晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率更高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018、P=0.033)。miR-1207-5p的表達(dá)量與患者其他臨床病理學(xué)特征,如年齡、性別、腫瘤位置、Dukes分期、脈管浸潤、神經(jīng)浸潤等之間未見相關(guān)性。通過生存分析發(fā)現(xiàn),相對(duì)低表達(dá)組患者具有更高死亡率,預(yù)后更差(P=0.049)。3.miR-1207-5p對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系SW480生物學(xué)行為的影響用熒光定量PCR方法證實(shí),miR-1207-5p在轉(zhuǎn)染mimics組的表達(dá)量是NC組的40倍(P0.01)。內(nèi)源性上調(diào)miR-1207-5p的表達(dá)后,通過CCK-8實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的增殖能力顯著降低(72h,P0.05),(96h,P0.01),通過克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的克隆形成能力明顯降低(P0.01),通過劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的遷移能力顯著降低(P0.01),流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞S+G2期比例顯著降低(P0.05),說明miR-1207-5p可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的抑制作用。結(jié)論:1.miR-1207-5p在結(jié)直腸癌組織中顯著低表達(dá)。2.miR-1207-5p的表達(dá)量與結(jié)直腸癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后顯著相關(guān)。3.miR-1207-5p抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、遷移,減慢細(xì)胞周期進(jìn)程。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2661711