【摘要】：目的:檢測結(jié)直腸癌組織和結(jié)直腸癌細胞系中miR-1207-5p的表達水平,分析miR-1207-5p的表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征以及預(yù)后之間的關(guān)系。再通過細胞轉(zhuǎn)染建立異常表達miR-1207-5p的細胞模型,分析miR-1207-5p對結(jié)直腸癌細胞系生物學(xué)行為的影響,為結(jié)直腸癌診斷、治療以及相關(guān)研究提供新的靶點。方法:1.miR-1207-5p在結(jié)直腸癌組織及細胞系中的表達提取組織及細胞系中的總RNA,采用熒光定量PCR的方法檢測40例患者結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織中miR-1207-5p的相對表達量,同時檢測miR-1207-5p在HCT116、SW480和SW620三種結(jié)直腸癌細胞系中的相對表達量。2.miR-1207-5p與結(jié)直腸癌患者臨床病理學(xué)特征及預(yù)后之間的關(guān)系收集40例結(jié)直腸癌患者的臨床病理資料,并對患者進行術(shù)后隨訪。分析miR-1207-5p的相對表達量與患者臨床病理學(xué)特征以及預(yù)后之間的關(guān)系。3.miR-1207-5p對結(jié)直腸癌細胞系SW480生物學(xué)行為的影響利用陽離子脂質(zhì)體方法,將miR-1207-5p mimics以及相應(yīng)的NC(mimics control)轉(zhuǎn)染至SW480中,利用熒光定量PCR驗證轉(zhuǎn)染效果,并對異常表達miR-1207-5p的細胞模型進行CCK-8實驗、克隆形成實驗、劃痕實驗、細胞周期檢測等相關(guān)細胞學(xué)實驗,并分析miR-1207-5p對SW480生物學(xué)行為的影響。4.統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,用Graph Pad Prism5軟件進行相關(guān)圖表的制作。miR-1207-5p的相對表達量用2-ΔΔCT值衡量,采用配對樣本t檢驗(Wilcoxon Matched Pairs Test)分析結(jié)直腸癌組織及配對正常組織中miR-1207-5p的表達量,采用獨立樣本t檢驗(Student’s t-test)分析細胞系中miR-1207-5p的表達量。miR-1207-5p表達量與患者臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系用χ2檢驗分析�；颊咝g(shù)后生存狀況用Kaplan-Meier生存曲線分析,miR-1207-5p的表達量與患者術(shù)后生存狀況之間的關(guān)系用log-rank test檢驗分析。本研究所涉及的檢驗均為雙側(cè)檢驗,檢驗水準α=0.05,P0.05時認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.miR-1207-5p在結(jié)直腸癌組織和細胞系中的表達40例患者結(jié)直腸癌組織及其配對正常組織中,miR-1207-5p在結(jié)直腸癌組織中相對表達量(mean±SD:0.0546±0.0131)顯著低于癌旁正常組織(mean±SD:0.1928±0.0317,P0.01)。將正常組織中miR-1207-5p的表達量標準化為1之后,miR-1207-5p在HCT116、SW480和SW620中相對表達量分別為0.1258、0.0414和0.5065,三種細胞系中miR-1207-5p的表達量與對照組相比均明顯降低(P0.01)。2.miR-1207-5p與結(jié)直腸癌患者臨床病理學(xué)特征及預(yù)后之間的關(guān)系依據(jù)miR-1207-5p表達量的平均值將40例患者分為相對高表達組和相對低表達組,相對低表達組的患者,腫瘤臨床分期更晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率更高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.018、P=0.033)。miR-1207-5p的表達量與患者其他臨床病理學(xué)特征,如年齡、性別、腫瘤位置、Dukes分期、脈管浸潤、神經(jīng)浸潤等之間未見相關(guān)性。通過生存分析發(fā)現(xiàn),相對低表達組患者具有更高死亡率,預(yù)后更差(P=0.049)。3.miR-1207-5p對結(jié)直腸癌細胞系SW480生物學(xué)行為的影響用熒光定量PCR方法證實,miR-1207-5p在轉(zhuǎn)染mimics組的表達量是NC組的40倍(P0.01)。內(nèi)源性上調(diào)miR-1207-5p的表達后,通過CCK-8實驗發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細胞的增殖能力顯著降低(72h,P0.05),(96h,P0.01),通過克隆形成實驗發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細胞的克隆形成能力明顯降低(P0.01),通過劃痕實驗發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細胞的遷移能力顯著降低(P0.01),流式細胞儀分析細胞周期發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細胞S+G2期比例顯著降低(P0.05),說明miR-1207-5p可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的抑制作用。結(jié)論:1.miR-1207-5p在結(jié)直腸癌組織中顯著低表達。2.miR-1207-5p的表達量與結(jié)直腸癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后顯著相關(guān)。3.miR-1207-5p抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖、遷移,減慢細胞周期進程。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.3

【參考文獻】

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本文編號：2661711