【摘要】：目的:探討miR-125b對ART4蛋白的調(diào)控作用及在肝癌細(xì)胞中對其增殖和侵襲能力的影響。方法:q PCR檢測肝癌組織和肝癌細(xì)胞中miR-125b的表達情況;過表達miR-125b后q PCR檢測ART4的表達;雙熒光素酶實驗檢測miR-125b和ART4的關(guān)系;MTT實驗檢測過表達miR-125b對肝癌細(xì)胞增殖能力的影響;Transwell侵襲實驗檢測miR-125b的過表達對肝癌細(xì)胞侵襲能力的影響;MTT實驗檢測過表達ART4后逆轉(zhuǎn)miR-125b對肝癌細(xì)胞增殖能力的影響;Transwell侵襲實驗檢測過表達ART4后逆轉(zhuǎn)miR-125b對肝癌細(xì)胞侵襲能力的影響。結(jié)果:miR-125b在肝癌細(xì)胞中表達水平較低,過表達miR-125b可以有效抑制ART4蛋白的表達;過表達miR-125b可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖侵襲能力;過表達ART4后可以逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞被miR-125b抑制的增殖侵襲能力。結(jié)論:miR-125b在肝癌中表達下調(diào),同時miR-125b可以調(diào)控ART4的表達影響肝癌細(xì)胞增殖和侵襲能力。
【圖文】：

A)。在不同肝癌細(xì)胞株中，在所有4種肝癌細(xì)胞株(SMMC-7721、HepG2、MHCC-97L和HCC-LM3)中觀察到miＲ-125b的表達均較低，未超過50%相對表達量，其中(圖1B)SMMC-7721和其他細(xì)胞株相比，miＲ-125b表達最低，而且SMMC-7721的侵襲性相對較強。因此，我們選擇了SMMC-7721細(xì)胞株進行后續(xù)研究。2.2雙熒光素酶驗證miＲ-125b與AＲT4的關(guān)聯(lián)我們通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，下游幾種致瘤性相關(guān)基因可作為miＲ-125b的潛在靶標(biāo)，包括MMP11、EＲBB2、EＲBB3、EDN1、VEGF-A、AＲT4和BCL-9L等等。而且miＲ-125b和下游AＲT4基因有相似可圖1miＲ-125b的表達在肝癌癌組織和細(xì)胞株中的表達Fig．1ExpressionofmiＲ-125binlivercancertissuesandcelllinesNote:*.P＜0.05.結(jié)合的位點，為了驗證二者之間是否有調(diào)節(jié)關(guān)系，我們進行雙熒光素酶標(biāo)記實驗。首先我們構(gòu)建了攜帶3'-UTＲ的熒光素酶報告因子，其中每個基因的結(jié)合位點與miＲ-125b結(jié)合位點相對應(yīng)。熒光素酶測定顯示miＲ-125b下游結(jié)合3'-UTＲ結(jié)合位點與AＲT4相符合，而不是其他靶點基因，，過表達miＲ-125b可以導(dǎo)致熒光素酶活性的顯著降低(圖2B)。過表達miＲ-125b后可明顯抑制SMMC-7721細(xì)胞中AＲT4的表達(圖2A)。表明miＲ-125b可以調(diào)控下游AＲT4的基因表達情況，可能是通過調(diào)控AＲT4的表達影響肝癌細(xì)胞株的生物學(xué)行為。2.3過表達MiＲ-125b抑制肝癌細(xì)胞株的增殖能力為了研究miＲ-125b對肝細(xì)胞癌增殖能力的影響，使用SMMC-7721細(xì)胞株進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染以增加miＲ-125b的表達。如圖3所示，與對照組相比，qPCＲ分析證實，轉(zhuǎn)染miＲ-125-mimic后，SMMC-7721細(xì)胞株中miＲ-125b表達水平明顯上調(diào)。然后進行MTT實驗檢測miＲ-125b對SMMC-7721細(xì)胞增殖情況的影圖2miＲ-125b與AＲT4之間的相互關(guān)系Fig．2Ｒelationship

顯著降低(圖2B)。過表達miＲ-125b后可明顯抑制SMMC-7721細(xì)胞中AＲT4的表達(圖2A)。表明miＲ-125b可以調(diào)控下游AＲT4的基因表達情況，可能是通過調(diào)控AＲT4的表達影響肝癌細(xì)胞株的生物學(xué)行為。2.3過表達MiＲ-125b抑制肝癌細(xì)胞株的增殖能力為了研究miＲ-125b對肝細(xì)胞癌增殖能力的影響，使用SMMC-7721細(xì)胞株進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染以增加miＲ-125b的表達。如圖3所示，與對照組相比，qPCＲ分析證實，轉(zhuǎn)染miＲ-125-mimic后，SMMC-7721細(xì)胞株中miＲ-125b表達水平明顯上調(diào)。然后進行MTT實驗檢測miＲ-125b對SMMC-7721細(xì)胞增殖情況的影圖2miＲ-125b與AＲT4之間的相互關(guān)系Fig．2ＲelationshipbetweenmiＲ-125bandAＲT4Note:A.EffectofmiＲ-125bonexpressionofAＲT4;B.DoubleluciferasetoverifytherelationshipbetweenmiＲ-125bandAＲT4，*.P＜0.05.圖3miＲ-125b對肝癌細(xì)胞增殖能力的影響Fig．3EffectofmiＲ-125bonproliferationoflivercancercells李建華等miＲ-125b調(diào)控AＲT4蛋白對肝癌細(xì)胞增殖和侵襲的影響第12期·1767·

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本文編號：2658473