【摘要】：目的構(gòu)建表達(dá)C端截短HBX基因和蛋白的人肝癌HepG2細(xì)胞模型,并探討其對HepG2細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和凋亡的影響。方法1.以肝癌組織中HBX常見的整合片段HBXΔ32(C端缺失32個氨基酸的HBX,全長369bp)、HBXΔ4(C端缺失4個氨基酸的HBX,全長453bp)和野生型HBX(全長465bp)為目的片段,分別構(gòu)建腺病毒載體并轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞。以轉(zhuǎn)染后的LV5-HBXΔ32、LV5-HBXΔ4、LV5-HBX細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,LV5-NC(空病毒)和HepG2細(xì)胞為對照組探討C端截短HBX對HepG2細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。2.采用qPCR和WB的方法分別檢測轉(zhuǎn)染后的各組細(xì)胞HBX基因和蛋白的表達(dá)情況,判斷轉(zhuǎn)染是否成功。3.在培養(yǎng)基中加入CCK8,分別于1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)后檢測并比較各組細(xì)胞OD值,探討C端截短HBX對HepG2細(xì)胞增殖的影響。4.采用transwell實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的侵襲和遷移能力,探討C端截短HBX對HepG2細(xì)胞侵襲和遷移的影響。5.采用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞凋亡的情況,探討C端截短HBX對HepG2細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果1.本研究成功構(gòu)建了表達(dá)C端截短HBX基因和蛋白的HepG2細(xì)胞,鏡下可觀察到GFP綠色熒光信號,經(jīng)qPCR和WB驗(yàn)證有HBX mRNA和蛋白的表達(dá)。2.HBXΔ32、HBXΔ4、HBX、NC、HepG2各組細(xì)胞之間的增殖能力有差異,每個檢測時(shí)間點(diǎn)其OD值差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。經(jīng)兩兩比較發(fā)現(xiàn),每個檢測時(shí)間點(diǎn)HBXΔ32和HBXΔ4組細(xì)胞OD值均高于其他各組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05),而HBXΔ32和HBXΔ4組之間細(xì)胞的OD值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.HBXΔ32、HBXΔ4、HBX、NC、HepG2各組發(fā)生侵襲的細(xì)胞數(shù)分別為277.89±20.64、266.78±22.09、163.44±21.02、157.78±22.02和160.56±21.51,各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。經(jīng)兩兩比較發(fā)現(xiàn),HBXΔ32和HBXΔ4組侵襲細(xì)胞數(shù)均高于其他各組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05),而HBXΔ32和HBXΔ4組之間侵襲細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.856)。4.HBXΔ32、HBXΔ4、HBX、NC、HepG2各組發(fā)生遷移的細(xì)胞數(shù)分別為95.22±16.84、94.44±12.99、66.56±9.50、71.00±8.79和69.78±9.71,各組之間遷移細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。經(jīng)兩兩比較發(fā)現(xiàn),HBXΔ32和HBXΔ4組遷移細(xì)胞數(shù)均高于其他各組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05),而HBXΔ32和HBXΔ4組之間遷移細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.588)。5.HBXΔ32、HBXΔ4、HBX、NC、HepG2各組之間細(xì)胞凋亡率分別為1.43±0.522%、1.14±0.236%、1.06±0.033%、1.26±0.466%、1.24±0.653%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.505)。結(jié)論C端截短的HBXΔ32、HBXΔ4對人肝癌HepG2細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移能力有一定的促進(jìn)作用,并未發(fā)現(xiàn)其對HepG2細(xì)胞的凋亡有影響。HBX C端的后4-32個氨基酸可能不是影響肝癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的主要功能域。本研究初步解釋了C端截短的HBX基因的整合在廣西肝癌高發(fā)區(qū)肝癌發(fā)病中所起的作用,為HBV相關(guān)性HCC的病因?qū)W探討和綜合防治提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論參考。
【圖文】：

C 端截短 HBX 對 HepG2 細(xì)胞生物學(xué)活性的影響 碩士學(xué)位結(jié) 果1. 腺病毒結(jié)構(gòu)和測序結(jié)果1.1 腺病毒結(jié)構(gòu)該腺病毒由上海生工生物工程股份有限公司構(gòu)建，，結(jié)構(gòu)如圖 3-1所示腺病毒的穿梭質(zhì)粒為 LV5，該質(zhì)粒包含表達(dá)綠色熒光蛋白的 GFP 基因以及呤霉素和氨芐青霉素抗性基因（后續(xù)篩選實(shí)驗(yàn)需要），啟動子為 CMV 和 Eα ,酶切位點(diǎn)為 NotI/NsiI。

C 端截短 HBX 對 HepG2 細(xì)胞生物學(xué)活性的影響 碩士學(xué)位論文1.2 測序結(jié)果該腺病毒構(gòu)建完成后由上海生工生物工程股份有限公司測序驗(yàn)證，測序結(jié)果如圖 3-2、3-3、3-4 所示。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉東良;賈海燕;魏建超;李蓓蓓;;截短側(cè)耳類藥物耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[J];畜牧與獸醫(yī);2017年02期

2 王一白;覃粒子;劉宇;王長輝;;塞錐截短對塞式噴管性能影響的實(shí)驗(yàn)[J];北京航空航天大學(xué)學(xué)報(bào);2008年01期

3 宋建華;略論西語縮略語[J];外國語(上海外國語學(xué)院學(xué)報(bào));1989年05期

4 陳錦明;李卡凡;黃東輝;;經(jīng)口莖突截短術(shù)在臨床上的應(yīng)用效果分析[J];臨床合理用藥雜志;2011年30期

5 吳克禮;俄語截短詞淺探[J];中國俄語教學(xué);1984年03期

6 王長河;;談以字母o結(jié)尾的截短詞[J];英語知識;1992年07期

7 韓聚強(qiáng),胡大榮,李娟,范公忍,胡學(xué)玲,劉超英,劉勇,邸雅南,吳憶貧;乙型肝炎病毒C基因截短對S基因轉(zhuǎn)錄與表達(dá)的影響[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2003年11期

8 薛寧地;;英語截短詞所反映的語言變異與變化[J];韶關(guān)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年09期

9 田樹昌;孫玉琴;劉健;徐輝;吉增宏;;莖突折斷術(shù)與截短術(shù)治療莖突綜合征的療效比較[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2011年11期

10 姜成剛;馬建;高旭;林躍智;趙立平;華育平;劉娣;周建華;;馬傳染性貧血病毒弱毒疫苗株跨膜蛋白截短突變對其體外復(fù)制特性影響[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2010年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳鐵鳳;;俄語口語截短復(fù)合詞研究[A];中國首屆“海峽兩岸俄語教學(xué)與研究學(xué)術(shù)討論會”論文摘要集[C];2005年

2 陳鐵鳳;;俄語口語截短復(fù)合詞研究[A];中國首屆“海峽兩岸俄語教學(xué)與研究學(xué)術(shù)討論會”論文集[C];2005年

3 鄭敏;金寧一;魯會軍;李昌;馬鳴瀟;;口蹄疫病毒3ABC基因截短體在畢赤酵母中表達(dá)及鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

4 戚亭;崔尚金;張超范;;截短的豬繁殖與呼吸綜合征病毒M蛋白的原核表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

5 袁志棟;王志亮;;兩種PrP截短型多肽的神經(jīng)毒性的研究進(jìn)展[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

6 李靜舒;王轉(zhuǎn)花;;截短型rBTI的表達(dá)、純化及性質(zhì)研究[A];泛環(huán)渤海地區(qū)九省市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會——2011年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2011年

7 朱衛(wèi)霞;袁萬哲;李麗敏;宋勤葉;李潭清;;截短豬流行性腹瀉病毒N蛋白的可溶性表達(dá)及其抗原活性[A];第七屆中國畜牧科技論壇論文集[C];2016年

8 張國俊;鄒謹(jǐn);徐明愷;周雋逸;張惠文;;活性增強(qiáng)的SEC2截短突變蛋白的構(gòu)建及其生物活性研究[A];第四屆泛環(huán)渤海生物化學(xué)與分子生物學(xué)會學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2013年

9 姜成剛;高旭;馬建;林躍智;趙立平;呂曉玲;周建華;;跨膜蛋白截短突變對馬傳染性貧血弱毒疫苗株體內(nèi)復(fù)制特性和免疫誘導(dǎo)能力的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

10 白曄;張慧;鐘福春;董荔紅;陳良遠(yuǎn);鄭雙林;蘭風(fēng)華;;C57 BL/6小鼠Ldhc截短突變誘導(dǎo)的顯性負(fù)性效應(yīng)研究[A];第十一屆全國遺傳病診斷與產(chǎn)前診斷學(xué)術(shù)交流會暨第二屆海峽兩岸醫(yī)藥衛(wèi)生交流協(xié)會遺傳與生殖專業(yè)委員會年會論文集[C];2018年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 張燦燦邋通訊員 楊英莉;采用硬腭截短術(shù)根治鼾癥[N];健康報(bào);2007年

2 ;趁冬巧剪枝 果樹早掛果[N];徐州日報(bào);2005年

3 李增生;我眼中的民工素質(zhì)缺的不僅僅是技術(shù)[N];農(nóng)民日報(bào);2004年

4 記者 謝昭萍 特約記者 肖萍;我國碳納米管截短技術(shù)獲得突破[N];中國化工報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 陳紅;HGF啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件截短改變與胃癌發(fā)生相關(guān)性研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2009年

2 周飛;乙型肝炎病毒感染肝細(xì)胞癌患者中截短型中蛋白的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

3 施少華;表達(dá)截短N(yùn)S1和嵌合HA新型H5N1亞型禽流感疫苗的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

4 賈東旭;Sphingopyxis sp.113P3聚乙烯醇脫氫酶的異源高效表達(dá)研究[D];江南大學(xué);2013年

5 張勇;人AIF C-末端截短體的促細(xì)胞凋亡活性及其分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

6 凌寧;截短的乙型肝炎表面抗原分子的表達(dá)及其抗原特性的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

7 韓聚強(qiáng);改造HBV作為肝靶向性基因治療載體的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 方向;C端截短HBX對HepG2細(xì)胞生物學(xué)活性的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

2 管國丹;截短N(yùn)SP2的真核表達(dá)及其在PRRSV復(fù)制中的作用研究[D];貴州大學(xué);2018年

3 張祥;不同融合方式表達(dá)人全長PDE4B2及其截短突變體的比較[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

4 李華;完整型及截短型人胰島素樣生長因子Ⅰ基因的克隆及其表達(dá)[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

5 張景盼;酸性α-淀粉酶基因的截短突變及性質(zhì)研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 李靜舒;截短型rBTI的表達(dá)、純化及性質(zhì)研究[D];山西大學(xué);2011年

7 房珊珊;IHNV糖蛋白的截短表達(dá)及免疫原性檢測[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 闞伯紅;截短型人骨保護(hù)素哺乳類載體的構(gòu)建、優(yōu)化及表達(dá)[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年

9 肖晶晶;截短型4EBP2基因治療誘導(dǎo)乳腺癌消退的實(shí)驗(yàn)研究[D];西北大學(xué);2013年

10 王銳;UWB通信系統(tǒng)中的信道截短算法研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2008年

本文編號：2654488