【摘要】：目的設(shè)計(jì)并制備HN-1多肽表面修飾的阿霉素(DOX)納米粒HPD,初步研究其理化性質(zhì)及對(duì)口腔鱗癌(OSCC)移植瘤的體內(nèi)外靶向性。內(nèi)容本論文研究的內(nèi)容主要分為以下四部分:一、HN-1多肽在細(xì)胞水平對(duì)OSCC的靶向性考察。二、PD、HPD納米粒的制備及其表征。三、HPD納米粒的體外穩(wěn)定性研究:HPD納米粒的穩(wěn)定性分析。四、HPD納米粒的體內(nèi)研究,HPD納米粒在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)行為考察、OSCC荷瘤小鼠模型的構(gòu)建、HPD納米粒在腫瘤組織以及正常器官的分布情況。方法1.HN-1多肽在細(xì)胞水平對(duì)OSCC的靶向性考察:將CAL-27、SCC-25、HepG2細(xì)胞分別與含F(xiàn)ITC-HN-1、FITC-Ir(非靶向肽)的培養(yǎng)基共同培養(yǎng),然后通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)多肽入胞率進(jìn)行檢測(cè)。2.PD、HPD納米粒的制備及其表征:首先合成SA-DOX(SAD),從而在DOX的氨基上修飾上羧基,再將SAD偶聯(lián)到NH2-PEG-NH2上,通過(guò)改良納米沉淀法制備PD納米粒。然后,將適量HN-1-NHS投入到PD納米粒溶液中,通過(guò)與制備PD納米粒相同的方法,獲得HPD納米粒的水溶液。使用電位-粒徑分析儀測(cè)定PD、HPD納米粒的粒徑大小、分布,并通過(guò)HT7700透射電子顯微鏡觀察其形貌。3.HPD納米粒的體外穩(wěn)定性研究:HPD納米粒的穩(wěn)定性分析,將HPD納米粒溶液分別用H_2O、PBS和含10%FBS的PBS稀釋保存,并于第1、3、5、7天分別測(cè)量其粒徑大小和分布變化。4.HPD納米粒的體內(nèi)作用研究:藥物代謝動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)考察HPD納米粒在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)行為,構(gòu)建OSCC異體移植瘤模型并用小動(dòng)物活體成像技術(shù)考察HPD納米粒在腫瘤組織以及正常器官的分布情況:將荷瘤裸鼠分為生理鹽水組(空白對(duì)照組),游離DOX組,PD和HPD納米粒組,各實(shí)驗(yàn)組裸鼠均按DOX當(dāng)量為8.0 mg/kg分別經(jīng)尾靜脈注入游離DOX、PD和HPD納米粒溶液。8小時(shí)和24小時(shí)后,采用脊椎脫臼法處死各組1只裸鼠,完整收集成瘤裸鼠腹股溝皮下腫瘤組織和主要器官,于小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)下觀察分析DOX熒光在腫瘤組織以及正常器官的分布情況。結(jié)果1.流式細(xì)胞儀測(cè)定多肽入胞率的結(jié)果顯示,HN-1能更加顯著地被OSCC細(xì)胞CAL-27和SCC-25攝取,并且與Ir相比,其細(xì)胞攝取率達(dá)3倍以上;同時(shí),這兩種肽在肝癌細(xì)胞HepG2中的入胞率均較低。2.成功合成了HPD納米粒,HPD納米粒呈規(guī)則的球狀分布,粒徑均一,大小為150±5.0 nm,多分散系數(shù)(PDI)為0.206±0.012。3.HPD納米粒分別在3種溶劑H_2O、PBS、10%FBS中保存1、3、5、7天后粒徑大小及分布均無(wú)明顯變化,制備的HPD納米粒穩(wěn)定性良好。4.PD和HPD納米粒組在大鼠體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間、最大血藥濃度明顯高于游離DOX組,經(jīng)納米技術(shù)包載藥物后可以顯著延長(zhǎng)其在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間,長(zhǎng)時(shí)間維持有效藥物濃度,增強(qiáng)抗腫瘤作用。給藥后,PD和HPD納米粒改變了DOX的組織分布,與游離DOX相比,PD和HPD納米粒遞送的DOX在腫瘤的分布顯著增強(qiáng);此外,由HPD納米粒遞送,在腫瘤中蓄積的DOX明顯多于PD納米粒,HN-1的表面修飾實(shí)現(xiàn)了納米粒對(duì)OSCC的主動(dòng)靶向遞送。結(jié)論本研究成功驗(yàn)證了HN-1對(duì)OSCC細(xì)胞的靶向性;成功合成了HN-1表面修飾DOX的納米粒HPD;HPD納米粒在體內(nèi)外具有較好的穩(wěn)定性;能夠延長(zhǎng)藥物在血液中的循環(huán)時(shí)間,維持有效的藥物濃度;同時(shí),在荷瘤小鼠中,HPD納米粒改變了DOX的組織分布,能將DOX成功遞送到腫瘤組織,增強(qiáng)了抗腫瘤療效,降低了DOX的毒性作用。與PD納米粒相比,由HPD納米粒遞送的DOX顯示出更強(qiáng)的腫瘤分布特性,具有特異性靶向治療OSCC移植瘤的能力。
【圖文】：

圖 1 多肽 NH-1 和 Ir 在細(xì)胞 CAL-27、SCC-25 和 HepG2 中的流式圖及入胞率比較1.3 討論流式細(xì)胞術(shù)是一種利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行單細(xì)胞定量分析以及分別篩選出來(lái)的技術(shù)，是單克隆抗體技術(shù)、細(xì)胞免疫化學(xué)技術(shù)、激光和電子計(jì)算機(jī)科學(xué)等高度發(fā)展以及綜合利用的產(chǎn)物［23］。流式細(xì)胞儀是對(duì)細(xì)胞特性進(jìn)行自動(dòng)分析和分選的裝置，它可以快速地測(cè)量分析、存儲(chǔ)、顯示懸浮在液體中的分散細(xì)胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參數(shù)，并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把指定的細(xì)胞亞群從中分選出來(lái)。此處應(yīng)用 FITC 作為熒光標(biāo)記，作為參量觀察兩種肽進(jìn)入細(xì)胞中，從而將這種細(xì)胞分選出來(lái)，用來(lái)比較。Jozsef Dudas, Christin Idler 等人為了研究 HN-1 多肽對(duì) HNSCC 的靶向性，，通過(guò) HN-1 多肽與三組細(xì)胞：BEAS-2B、SCC-25 和 Detroit562 分別培養(yǎng) 24 小時(shí)后，得出 HN-1 多肽在 SCC-25、Detroit562、BEAS-2B 的攝取率依次為：56.15%，

制備 HPD 納米粒時(shí)，將 30 mg HN-1-NHS 加入到上述 PD 納米粒的膠液中，然后在室溫下攪拌反應(yīng) 48 h。之后，通過(guò)與制備 PD 納米粒相同的方理反應(yīng)物膠體溶液，由此獲得 HPD 納米粒的水溶液。相同條件下，重復(fù)組上述合成反應(yīng)，均在避光條件下完成。使用粒徑分析儀分析 PD、HPD 納的粒徑大小及其分布，得平均值，并通過(guò) HT7700 透射電子顯微鏡觀察其粒貌。2.2 結(jié)果2.2.1 PD、HPD 納米粒的制備避光條件下成功合成了 PD、HPD 納米粒冷凍干燥產(chǎn)物及相對(duì)應(yīng)的納米液。2.2.2 PD、HPD 納米粒的表征PD、HPD 納米粒在電鏡下呈規(guī)則的球狀分布，粒徑大小依次為 140 ±5150 ±5.0 nm，多分散系數(shù)（PDI）依次為 0.232 ±0.004、0.206 ±0.012，見(jiàn)表 1。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R739.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 趙書(shū)濤;武曉東;王策;陳永勤;唐玉國(guó);;流式細(xì)胞儀的原理、應(yīng)用及最新進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年22期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李洪軍;抗腫瘤多級(jí)納米藥物遞送系統(tǒng)的研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 郭艷余;阿霉素復(fù)合脂質(zhì)納米圓盤(pán)的制備與性質(zhì)研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2654411