【摘要】：目的設(shè)計并制備HN-1多肽表面修飾的阿霉素(DOX)納米粒HPD,初步研究其理化性質(zhì)及對口腔鱗癌(OSCC)移植瘤的體內(nèi)外靶向性。內(nèi)容本論文研究的內(nèi)容主要分為以下四部分:一、HN-1多肽在細胞水平對OSCC的靶向性考察。二、PD、HPD納米粒的制備及其表征。三、HPD納米粒的體外穩(wěn)定性研究:HPD納米粒的穩(wěn)定性分析。四、HPD納米粒的體內(nèi)研究,HPD納米粒在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)行為考察、OSCC荷瘤小鼠模型的構(gòu)建、HPD納米粒在腫瘤組織以及正常器官的分布情況。方法1.HN-1多肽在細胞水平對OSCC的靶向性考察:將CAL-27、SCC-25、HepG2細胞分別與含F(xiàn)ITC-HN-1、FITC-Ir(非靶向肽)的培養(yǎng)基共同培養(yǎng),然后通過流式細胞術(shù)對多肽入胞率進行檢測。2.PD、HPD納米粒的制備及其表征:首先合成SA-DOX(SAD),從而在DOX的氨基上修飾上羧基,再將SAD偶聯(lián)到NH2-PEG-NH2上,通過改良納米沉淀法制備PD納米粒。然后,將適量HN-1-NHS投入到PD納米粒溶液中,通過與制備PD納米粒相同的方法,獲得HPD納米粒的水溶液。使用電位-粒徑分析儀測定PD、HPD納米粒的粒徑大小、分布,并通過HT7700透射電子顯微鏡觀察其形貌。3.HPD納米粒的體外穩(wěn)定性研究:HPD納米粒的穩(wěn)定性分析,將HPD納米粒溶液分別用H_2O、PBS和含10%FBS的PBS稀釋保存,并于第1、3、5、7天分別測量其粒徑大小和分布變化。4.HPD納米粒的體內(nèi)作用研究:藥物代謝動力學(xué)實驗考察HPD納米粒在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)行為,構(gòu)建OSCC異體移植瘤模型并用小動物活體成像技術(shù)考察HPD納米粒在腫瘤組織以及正常器官的分布情況:將荷瘤裸鼠分為生理鹽水組(空白對照組),游離DOX組,PD和HPD納米粒組,各實驗組裸鼠均按DOX當(dāng)量為8.0 mg/kg分別經(jīng)尾靜脈注入游離DOX、PD和HPD納米粒溶液。8小時和24小時后,采用脊椎脫臼法處死各組1只裸鼠,完整收集成瘤裸鼠腹股溝皮下腫瘤組織和主要器官,于小動物活體成像系統(tǒng)下觀察分析DOX熒光在腫瘤組織以及正常器官的分布情況。結(jié)果1.流式細胞儀測定多肽入胞率的結(jié)果顯示,HN-1能更加顯著地被OSCC細胞CAL-27和SCC-25攝取,并且與Ir相比,其細胞攝取率達3倍以上;同時,這兩種肽在肝癌細胞HepG2中的入胞率均較低。2.成功合成了HPD納米粒,HPD納米粒呈規(guī)則的球狀分布,粒徑均一,大小為150±5.0 nm,多分散系數(shù)(PDI)為0.206±0.012。3.HPD納米粒分別在3種溶劑H_2O、PBS、10%FBS中保存1、3、5、7天后粒徑大小及分布均無明顯變化,制備的HPD納米粒穩(wěn)定性良好。4.PD和HPD納米粒組在大鼠體內(nèi)的循環(huán)時間、最大血藥濃度明顯高于游離DOX組,經(jīng)納米技術(shù)包載藥物后可以顯著延長其在體內(nèi)的循環(huán)時間,長時間維持有效藥物濃度,增強抗腫瘤作用。給藥后,PD和HPD納米粒改變了DOX的組織分布,與游離DOX相比,PD和HPD納米粒遞送的DOX在腫瘤的分布顯著增強;此外,由HPD納米粒遞送,在腫瘤中蓄積的DOX明顯多于PD納米粒,HN-1的表面修飾實現(xiàn)了納米粒對OSCC的主動靶向遞送。結(jié)論本研究成功驗證了HN-1對OSCC細胞的靶向性;成功合成了HN-1表面修飾DOX的納米粒HPD;HPD納米粒在體內(nèi)外具有較好的穩(wěn)定性;能夠延長藥物在血液中的循環(huán)時間,維持有效的藥物濃度;同時,在荷瘤小鼠中,HPD納米粒改變了DOX的組織分布,能將DOX成功遞送到腫瘤組織,增強了抗腫瘤療效,降低了DOX的毒性作用。與PD納米粒相比,由HPD納米粒遞送的DOX顯示出更強的腫瘤分布特性,具有特異性靶向治療OSCC移植瘤的能力。
【圖文】：

圖 1 多肽 NH-1 和 Ir 在細胞 CAL-27、SCC-25 和 HepG2 中的流式圖及入胞率比較1.3 討論流式細胞術(shù)是一種利用流式細胞儀進行單細胞定量分析以及分別篩選出來的技術(shù)，是單克隆抗體技術(shù)、細胞免疫化學(xué)技術(shù)、激光和電子計算機科學(xué)等高度發(fā)展以及綜合利用的產(chǎn)物［23］。流式細胞儀是對細胞特性進行自動分析和分選的裝置，它可以快速地測量分析、存儲、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參數(shù)，并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把指定的細胞亞群從中分選出來。此處應(yīng)用 FITC 作為熒光標(biāo)記，作為參量觀察兩種肽進入細胞中，從而將這種細胞分選出來，用來比較。Jozsef Dudas, Christin Idler 等人為了研究 HN-1 多肽對 HNSCC 的靶向性，，通過 HN-1 多肽與三組細胞：BEAS-2B、SCC-25 和 Detroit562 分別培養(yǎng) 24 小時后，得出 HN-1 多肽在 SCC-25、Detroit562、BEAS-2B 的攝取率依次為：56.15%，

制備 HPD 納米粒時，將 30 mg HN-1-NHS 加入到上述 PD 納米粒的膠液中，然后在室溫下攪拌反應(yīng) 48 h。之后，通過與制備 PD 納米粒相同的方理反應(yīng)物膠體溶液，由此獲得 HPD 納米粒的水溶液。相同條件下，重復(fù)組上述合成反應(yīng)，均在避光條件下完成。使用粒徑分析儀分析 PD、HPD 納的粒徑大小及其分布，得平均值，并通過 HT7700 透射電子顯微鏡觀察其粒貌。2.2 結(jié)果2.2.1 PD、HPD 納米粒的制備避光條件下成功合成了 PD、HPD 納米粒冷凍干燥產(chǎn)物及相對應(yīng)的納米液。2.2.2 PD、HPD 納米粒的表征PD、HPD 納米粒在電鏡下呈規(guī)則的球狀分布，粒徑大小依次為 140 ±5150 ±5.0 nm，多分散系數(shù)（PDI）依次為 0.232 ±0.004、0.206 ±0.012，見表 1。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.8

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 趙書濤;武曉東;王策;陳永勤;唐玉國;;流式細胞儀的原理、應(yīng)用及最新進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2011年22期

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1 李洪軍;抗腫瘤多級納米藥物遞送系統(tǒng)的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2017年

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1 郭艷余;阿霉素復(fù)合脂質(zhì)納米圓盤的制備與性質(zhì)研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2014年

本文編號：2654411