【摘要】：目的:胃癌是引起癌癥相關(guān)死亡的主要疾病之一。一些微小核糖核酸(miRNA)已被證實(shí)在胃癌的生長(zhǎng)和侵襲中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。本研究主要為了驗(yàn)證miR-638在胃癌中的主要作用,探究其潛在的靶基因,以及發(fā)揮作用的具體機(jī)制。方法:我們通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(qRT-PCR)檢測(cè)了胃癌患者癌與癌旁的組織樣本中miR-638的表達(dá)水平,同樣也檢測(cè)了胃癌細(xì)胞株SGC-7901和SC-M1中miR-638的含量。通過(guò)細(xì)胞流式技術(shù)檢測(cè)分析細(xì)胞周期,運(yùn)用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,通過(guò)Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的侵襲力變化。進(jìn)一步地,使用生物信息技術(shù)預(yù)測(cè)miR-638的潛在靶基因,并聯(lián)合q RT-PCR和蛋白免疫印跡法在RNA和蛋白水平對(duì)SOX2進(jìn)行了驗(yàn)證。而后采用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢驗(yàn)miR-638對(duì)SOX2是否存在靶向抑制的作用。最后利用SOX2的小干擾RNA驗(yàn)證miR-638、SOX2以及胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。結(jié)果:miR-638在胃癌患者癌組織中的表達(dá)水平相較于癌旁組織中是下降的,并且其含量和胃癌TNM分期以及淋巴轉(zhuǎn)移情況呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性。而在胃癌細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),miR-638含量的下降可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖能力和侵襲能力、干擾細(xì)胞周期變化。而轉(zhuǎn)錄因子SOX2在胃癌組織中呈高表達(dá),與miRNA-638的含量呈負(fù)相關(guān)性。通過(guò)直接與SOX2基因3’末端非翻譯區(qū)結(jié)合,過(guò)表達(dá)的miR-638可以有效抑制轉(zhuǎn)錄因子SOX2的表達(dá)。而通過(guò)小干擾RNA抑制SOX2的表達(dá)可以在一定程度上逆轉(zhuǎn)miRNA-638下調(diào)對(duì)胃癌細(xì)胞株增殖能力和侵襲能力的促進(jìn)作用。結(jié)論:本研究表明miRNA-638在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起著抑癌因子的作用,其低表達(dá)會(huì)引起轉(zhuǎn)錄因子SOX2的上調(diào),繼而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力。
【圖文】：

癌組織中相對(duì)表達(dá)量為 5.637±1.214，而癌旁組織中為 11.220±3.148（p <0.05, 圖1B）。圖 1： miR-638 在胃癌患者組織標(biāo)本中呈下調(diào)趨勢(shì)（A）使用 qRT-PCR 檢測(cè) 68 例胃癌患者的癌和癌旁組織中的 miR-638 的含量；（B）miR-638 的平均相對(duì)表達(dá)水平分析；（C）68 例中有 50 例癌組織中的 miR-638 含量較癌旁組織中顯著降低。（*，P < 0.05）如表格 1 所示，我們對(duì)胃癌組織中 miR-638 的相對(duì)表達(dá)水平和患者的臨床病例特征做了相關(guān)性分析。先將 68 例樣本所測(cè)得的 miR-638 相對(duì)表達(dá)量由低到高排序，而后分為中位數(shù)以下的低表達(dá)組和中位數(shù)以上的高表達(dá)組，再將其與臨床特征結(jié)合進(jìn)行

10圖 2：miR-638 具有抑制胃癌細(xì)胞增殖，，誘導(dǎo)細(xì)胞阻滯的作用（A）在胃癌細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染 miR-638 模擬物（mimics）、抑制物（inhibitor）以及相應(yīng)的對(duì)照分子（mimics-NC, inhibitor-NC）后進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)；（B）使用 CCK-8在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染過(guò)后的胃癌細(xì)胞活性，繪制生長(zhǎng)曲線；（C）使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)并分析轉(zhuǎn)染 miR-638 模擬物和抑制物對(duì)胃癌細(xì)胞周期的影響；（D）對(duì)不同周期階段的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行比較。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.2

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4 吳莉s

本文編號(hào)：2649260