【摘要】：目的:胃癌是引起癌癥相關(guān)死亡的主要疾病之一。一些微小核糖核酸(miRNA)已被證實在胃癌的生長和侵襲中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。本研究主要為了驗證miR-638在胃癌中的主要作用,探究其潛在的靶基因,以及發(fā)揮作用的具體機制。方法:我們通過實時熒光定量PCR技術(shù)(qRT-PCR)檢測了胃癌患者癌與癌旁的組織樣本中miR-638的表達水平,同樣也檢測了胃癌細胞株SGC-7901和SC-M1中miR-638的含量。通過細胞流式技術(shù)檢測分析細胞周期,運用CCK-8檢測細胞增殖情況,通過Transwell細胞體外侵襲實驗評估實驗細胞的侵襲力變化。進一步地,使用生物信息技術(shù)預(yù)測miR-638的潛在靶基因,并聯(lián)合q RT-PCR和蛋白免疫印跡法在RNA和蛋白水平對SOX2進行了驗證。而后采用熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z驗miR-638對SOX2是否存在靶向抑制的作用。最后利用SOX2的小干擾RNA驗證miR-638、SOX2以及胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。結(jié)果:miR-638在胃癌患者癌組織中的表達水平相較于癌旁組織中是下降的,并且其含量和胃癌TNM分期以及淋巴轉(zhuǎn)移情況呈現(xiàn)負相關(guān)性。而在胃癌細胞的體外實驗中我們發(fā)現(xiàn),miR-638含量的下降可以促進胃癌細胞的增殖能力和侵襲能力、干擾細胞周期變化。而轉(zhuǎn)錄因子SOX2在胃癌組織中呈高表達,與miRNA-638的含量呈負相關(guān)性。通過直接與SOX2基因3’末端非翻譯區(qū)結(jié)合,過表達的miR-638可以有效抑制轉(zhuǎn)錄因子SOX2的表達。而通過小干擾RNA抑制SOX2的表達可以在一定程度上逆轉(zhuǎn)miRNA-638下調(diào)對胃癌細胞株增殖能力和侵襲能力的促進作用。結(jié)論:本研究表明miRNA-638在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起著抑癌因子的作用,其低表達會引起轉(zhuǎn)錄因子SOX2的上調(diào),繼而促進胃癌細胞的增殖和侵襲能力。
【圖文】：

癌組織中相對表達量為 5.637±1.214，而癌旁組織中為 11.220±3.148（p <0.05, 圖1B）。圖 1： miR-638 在胃癌患者組織標本中呈下調(diào)趨勢（A）使用 qRT-PCR 檢測 68 例胃癌患者的癌和癌旁組織中的 miR-638 的含量；（B）miR-638 的平均相對表達水平分析；（C）68 例中有 50 例癌組織中的 miR-638 含量較癌旁組織中顯著降低。（*，P < 0.05）如表格 1 所示，我們對胃癌組織中 miR-638 的相對表達水平和患者的臨床病例特征做了相關(guān)性分析。先將 68 例樣本所測得的 miR-638 相對表達量由低到高排序，而后分為中位數(shù)以下的低表達組和中位數(shù)以上的高表達組，再將其與臨床特征結(jié)合進行

10圖 2：miR-638 具有抑制胃癌細胞增殖，，誘導(dǎo)細胞阻滯的作用（A）在胃癌細胞株中轉(zhuǎn)染 miR-638 模擬物（mimics）、抑制物（inhibitor）以及相應(yīng)的對照分子（mimics-NC, inhibitor-NC）后進行轉(zhuǎn)染效率檢測；（B）使用 CCK-8在不同時間點檢測轉(zhuǎn)染過后的胃癌細胞活性，繪制生長曲線；（C）使用流式細胞儀檢測并分析轉(zhuǎn)染 miR-638 模擬物和抑制物對胃癌細胞周期的影響；（D）對不同周期階段的細胞數(shù)進行比較。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2

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4 吳莉s

本文編號：2649260