【摘要】：膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率均居泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中首位,嚴重危害世界各國人民的生命和健康。盡管75%的膀胱癌患者屬于5年生存率較高的非肌層浸潤膀胱癌(non-muscle-invasive bladder cancer,NMIBC),另外25%的患者屬于肌層浸潤膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)且在首次治療后容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。據(jù)不完全統(tǒng)計,全球每年膀胱腫瘤患者的死亡病例數(shù)超過15萬人,形勢極其嚴峻。目前臨床上對于膀胱癌的治療主要采用全膀胱手術(shù)切除為主,但術(shù)后復發(fā)率仍然很高,效果并不理想。因此,深入了解膀胱癌形成的分子機制,完善針對不同膀胱癌患者特異的診斷及治療方法,尋找膀胱癌特有的分子診斷標志物,以實現(xiàn)基因靶向診治。從而降低膀胱癌患者的發(fā)病率和死亡率,提高患者術(shù)后5年的生存率及生存質(zhì)量,是當今醫(yī)學需要解決的難題�？缒さ鞍�40(TMEM40)是一個大小為34 kDa,由233個氨基酸構(gòu)成且含有兩個結(jié)構(gòu)域的跨膜蛋白。在我們前期的研究中發(fā)現(xiàn),TMEM40在膀胱腫瘤中表達上調(diào),預測它可能是一個潛在的促癌基因。目前,人們對于TMEM40與膀胱癌的關(guān)系仍知之甚少,TMEM40在膀胱癌的預后、診斷及治療等方面的作用仍需要更進一步研究。首先,在當前的研究中我們通過qRT-PCR及WB檢測了膀胱癌細胞及組織中TMEM40在mRNA及蛋白水平的表達,結(jié)果表明TMEM40在膀胱癌細胞與組織中表達均上調(diào);其次,通過組織芯片的免疫組化實驗,探究TMEM40表達水平高低與膀胱癌患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在115例膀耽癌患者組織中,TMEM40的表達與患者的臨床分期、pT分期、組織病理學分級具有明顯的相關(guān)性,而與患者的年齡、性別等無顯著相關(guān)。接著,我們選取兩株人膀胱癌細胞系(5637、EJ),采用不同濃度梯度的G418篩選TMEM40過表達及敲減的膀胱癌細胞,擴大培養(yǎng)來得到穩(wěn)定表達的細胞株。最后,通過CCK-8、EdU、Transwell、細胞周期、凋亡及裸鼠皮下成瘤等一系列功能實驗,來進一步驗證TMEM40對膀胱癌惡性表型的影響。細胞增殖實驗結(jié)果表明,TMEM40表達上調(diào)促進細胞的增殖,而TMEM40下調(diào)則在一定程度上抑制了細胞的增殖;Transwell實驗表明,TMEM40表達上調(diào)促進細胞遷移、侵襲,而TMEM40敲減則抑制細胞遷移、侵襲;流式細胞儀檢測結(jié)果表明,過表達TMEM40對細胞的凋亡具有一定的抑制作用,而敲減TMEM40則促進了細胞的凋亡;過表達TMEM40加快G1/S期變,而敲減TMEM40則細胞周期阻滯在G1期。此外,裸鼠體內(nèi)成瘤實驗結(jié)果表明,與對照組相比,敲減TMEM40能夠明顯抑制裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長。本研究表明,TMEM40在膀胱癌組織及細胞中高表達,其表達水平與膀胱癌的遷移、侵襲、增殖等惡性表型密切相關(guān),過表達TMEM40使p53、p21 Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Cleaved-PARP1 表達下調(diào),c-myc、CCND1表達上調(diào),從而抑制5637和EJ細胞的凋亡并加快G1/S轉(zhuǎn)變。因此,TMEM40在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用,有可能成為膀胱癌患者臨床治療的基因靶點及分子標志物。
【圖文】：

Ｉｍａｇｅ邋Ｊ軟件對蛋白條帶灰度值定量后，，實驗結(jié)果表明：Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ與逡逑ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果基本保持一致，即同癌旁組織相比，在膀胱癌組織中ＴＭＥＭ４０逡逑蛋白表達水平上調(diào)，Ｐ＜0．０５，差異具有統(tǒng)計學意NB。（如圖１＿２所７Ｋ）。逡逑Ｎ１邋Ｔ１邋Ｎ２邋Ｔ２邋Ｎ３邋Ｔ３邋Ｎ４邋Ｔ４邋Ｎ５邋Ｔ５邋Ｎ６邋Ｔ６逡逑ＴＭＥＭ４０邋遍~|一邋｜ａ邐■邋—邋Ｓ邋—丨}0日逡逑ＧＡＰＤＨ邐＿邐＿？

本文編號：2649407