【摘要】：目的:血清中期因子(midkine,MK)在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá),對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等發(fā)揮重要生物學(xué)作用。有關(guān)MK在甲狀腺癌中研究報(bào)道較少,本文旨在探討MK對(duì)甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值;抑制MK在未分化甲狀腺癌細(xì)胞(ARO)中的表達(dá),研究其對(duì)細(xì)胞凋亡、增殖的影響及相關(guān)機(jī)制。方法:(1)回顧性分析2011年1月至2015年1月在天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科接受~(131)I治療的并且至少隨訪2年的241例術(shù)后甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)患者。通過酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定PTC患者首次~(131)I治療前及其后10-12個(gè)月時(shí)血清MK濃度,根據(jù)首次~(131)I治療后10-12個(gè)月時(shí)血清MK及促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)刺激狀態(tài)下甲狀腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)濃度與首次~(131)I治療時(shí)比較將PTC患者分為3組,統(tǒng)計(jì)分析血清MK及Tg對(duì)PTC患者轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)價(jià)值;(2)通過蛋白免疫印跡(Western blotting)法檢測(cè)甲狀腺癌及癌旁組織、甲狀腺癌細(xì)胞系(FRO、ARO、WRO、KTC及TPC)中的MK表達(dá)水平;將5種MK特異性siRNA采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染未分化型甲狀腺癌(anaplastic thyroid cancer,ATC)細(xì)胞(ARO細(xì)胞),下調(diào)細(xì)胞中MK表達(dá),同時(shí)檢測(cè)MAPK和PI3K兩條通路關(guān)鍵蛋白ERK1/2和Akt磷酸化水平及下游凋亡相關(guān)蛋白caspase-3和survivin的表達(dá)變化;設(shè)置不同濃度梯度MK-siRNA-3轉(zhuǎn)染ARO細(xì)胞,通過細(xì)胞MTT試驗(yàn)觀察MK下調(diào)對(duì)于細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:(1)241例患者在行首次~(131)I治療之前至少1月,已行甲狀腺全切或甲狀腺次全切術(shù)和(或)頸部淋巴結(jié)清掃術(shù),術(shù)后病理診斷證實(shí)為PTC且癌灶大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分區(qū)明確。首次~(131)I治療后的10-12個(gè)月時(shí)TSH刺激狀態(tài)下Tg降低(與首次~(131)I治療前TSH刺激狀態(tài)下Tg相比),但未達(dá)到理想Tg水平(TSH刺激狀態(tài)下Tg低于1.0 ng/ml),PTC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)是Tg降至理想水平的12.5倍(P0.01)。當(dāng)Tg增加(與首次~(131)I治療前TSH刺激狀態(tài)下Tg相比),PTC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)是Tg降至理想水平的19.5倍(P0.01)。首次~(131)I治療后的10-12個(gè)月時(shí)血清MK水平下降(與首次~(131)I治療前血清MK相比),但未達(dá)到普遍接受的正常水平(255.01±126.78 pg/ml),PTC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)是血清MK降至普遍接受的正常水平(255.01±126.78 pg/ml)的3.0倍(P0.01)。當(dāng)血清MK水平增加(與首次~(131)I治療前血清MK相比),則發(fā)生轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)是血清MK降至普遍接受的正常水平(255.01±126.78 pg/ml)的5.0倍(P0.01)。在第3組患者中,無(wú)病生存率顯著低于其它任何兩組。(2)Western blotting結(jié)果顯示甲狀腺癌組織及癌旁正常組織中均見MK表達(dá),且MK在甲狀腺癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織(5.51倍);在甲狀腺癌5個(gè)細(xì)胞系(FRO、ARO、WRO、KTC及TPC)中,甲狀腺癌細(xì)胞系A(chǔ)RO、WRO、KTC中MK呈高表達(dá),且MK在ARO中的表達(dá)高于WRO及KTC,而甲狀腺癌細(xì)胞系FRO及TPC中未見明顯MK表達(dá)。針對(duì)MK的5種特異性siRNA(工作濃度為50nM)作用于ARO細(xì)胞48小時(shí)后,均能有效抑制ARO細(xì)胞中MK的表達(dá);siRNA轉(zhuǎn)染ARO細(xì)胞72小時(shí)后,siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4均可抑制PI3K通路中Akt的磷酸化水平,并下調(diào)下游抗凋亡蛋白Survivin、上調(diào)促凋亡蛋白Caspase-3水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);對(duì)于MAPK通路,只有siRNA-4處理組抑制Erk1/2磷酸化水平(p0.05)。siRNA-3轉(zhuǎn)染ARO細(xì)胞作用24小時(shí)后細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)顯示,在MK-siRNA-3濃度高于500nM時(shí),具有抑制甲狀腺癌細(xì)胞增殖的作用。結(jié)論:監(jiān)測(cè)血清MK動(dòng)態(tài)變化對(duì)PTC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)具有潛在的臨床價(jià)值。MK在甲狀腺癌中高表達(dá),通過抑制MK的表達(dá),可影響MAPK及PI3K通路的磷酸化及凋亡相關(guān)蛋白水平,并可抑制細(xì)胞增殖。
【圖文】：

2.5.2 甲狀腺癌細(xì)胞系中 MK 的表達(dá)情況在甲狀腺癌 5 個(gè)細(xì)胞系中檢測(cè) MK 表達(dá)情況，其中，MK 在 ARO、WRO、KTC 中高表達(dá)，且在 ARO 中表達(dá)最明顯，而在 TPC 及 FRO 中未見明顯表達(dá)。（見圖 3）以下實(shí)驗(yàn)均以 ARO 細(xì)胞為研究對(duì)象。2.5.3 siRNA 對(duì) ARO 細(xì)胞 MK 表達(dá)沉默的效果

392.5.7 siRNA 沉默 MK 后對(duì)凋亡相關(guān)蛋白的影響對(duì)于轉(zhuǎn)染 siRNA 作用 72 小時(shí)后的 ARO 細(xì)胞，，MK 表達(dá)水平降低，與對(duì)照組比較，在 siRNA-1、siRNA-2 處理組抗凋亡蛋白 Survivin 明顯下降（p<0.01）；siRNA-3、siRNA-4 處理組抗凋亡蛋白 Survivin 下降（p<0.05）；而抗凋亡蛋白Survivin 在 siRNA-5 處理組未見明顯變化（p>0.05）。促凋亡蛋白 Caspase-3 在siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3 處理組呈明顯下降趨勢(shì)（p<0.01），在 siRNA-4 處理組下降（p<0.05），在 siRNA-5 處理組未見明顯變化（p>0.05）（見圖 8、圖 9）
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R736.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 林巖松;張彬;梁智勇;牛麗娟;何霞云;陳立波;丁勇;關(guān)海霞;高再榮;侯曉榮;李雪娜;李小毅;李玉軍;李玉明;羅渝昆;馬慶杰;孫文海;王任飛;張波;安銳;樊友本;郭曄;郭朱明;黃鋼;黃慧強(qiáng);黃韜;蔣寧一;匡安仁;李方;李思進(jìn);李亞明;譚建;邢小平;趙家軍;;復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性分化型甲狀腺癌診治共識(shí)[J];中國(guó)癌癥雜志;2015年07期

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1 陸春明;人Midkine啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)HSV-TK自殺基因體外抗肝癌作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2649171