【摘要】：腎母細(xì)胞瘤(nephroblastoma),又稱 Wilm's 瘤(Wilm's tumor,WT),是兒童最常見(jiàn)的原發(fā)性腎臟惡性腫瘤,手術(shù)、化療和放療的綜合治療對(duì)大多數(shù)腎母細(xì)胞瘤效果良好,使其5年生存率已經(jīng)超過(guò)了 85%�？ㄣK(carboplatin)作為第二代鉑類抗腫瘤藥物,與順鉑相比,具有較小的腎毒性,主要用于復(fù)發(fā)的或初始化療失敗的腎母細(xì)胞瘤患兒的治療。但是,由于卡鉑在腫瘤組織中攝取率較低,大部分藥物短時(shí)間內(nèi)即經(jīng)尿液排出,影響了其抗腫瘤作用。近年來(lái),為提高鉑類藥物的抗腫瘤效果和降低其毒副作用,關(guān)于鉑類藥物納米轉(zhuǎn)運(yùn)載體的研究越來(lái)越多。殼聚糖是自然界中唯一的堿性多糖,具有良好的生物相容性和可降解性,其聚合物納米顆粒作為藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體,具有靶向、緩釋、增加藥物吸收、提高藥物療效等作用。因此,為增強(qiáng)卡鉑對(duì)腎母細(xì)胞瘤的治療效果,我們以殼聚糖為原料,制備負(fù)載卡鉑的殼聚糖納米顆粒,同時(shí)考察其理化性質(zhì),并以SK-NEP-1細(xì)胞為細(xì)胞模型,通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)卡鉑-殼聚糖納米顆粒對(duì)腎母細(xì)胞瘤的抑制作用。目的:1.制備卡鉑-殼聚糖納米顆粒,考察其外觀形態(tài)、粒徑分布、載藥量、包封率和體外釋藥等理化性質(zhì)。2.體外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)卡鉑-殼聚糖納米顆粒對(duì)腎母細(xì)胞瘤SK-NEP-1細(xì)胞的抑制作用。方法:1.通過(guò)離子凝膠法制備卡鉑-殼聚糖納米顆粒,透射電子顯微鏡和原子力顯微鏡觀察其形態(tài),激光粒度儀測(cè)定其粒徑分布情況;高效液相色譜法測(cè)定殼聚糖納米顆粒對(duì)卡鉑的包封率及載藥量;以PBS緩沖液為體外釋藥介質(zhì),高效液相色譜法測(cè)定研究卡鉑-殼聚糖納米顆粒體外釋藥特性。2.將不同濃度的卡鉑和卡鉑-殼聚糖納米顆粒加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,孵育腎母細(xì)胞瘤SK-NEP-1細(xì)胞至設(shè)定時(shí)間,光學(xué)顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;臺(tái)盼藍(lán)拒染法和MTT法檢測(cè)卡鉑-殼聚糖納米顆粒對(duì)SK-NEP-1細(xì)胞存活率的影響;平板細(xì)胞克隆形成試驗(yàn)檢測(cè)卡鉑殼聚糖納米顆粒對(duì)腎母細(xì)胞瘤SK-NEP-1細(xì)胞集落形成能力的影響;Hoechst法和TUNEL法檢測(cè)卡鉑-殼聚糖納米顆粒對(duì)腎母細(xì)胞瘤SK-NEP-1細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:1.制備的卡鉑-殼聚糖納米顆粒在透射電子顯微鏡下呈球形或類球形,大小均一,彼此之間具有清楚的邊界;原子力顯微鏡成像進(jìn)一步證實(shí)了該納米顆粒是圓形的,并且在云母表面看起來(lái)呈扁平狀;激光粒度儀測(cè)得卡鉑-殼聚糖納米顆粒平均粒徑約160nm(160±20.5nm),分布較集中。2.卡鉑的加入量可影響殼聚糖納米顆粒對(duì)其的包封率,卡鉑的加入量為殼聚糖納米顆粒量的3%時(shí),包封率最大為92.7%;卡鉑的加入量為殼聚糖納米顆粒量的25%時(shí),包封率迅速下降至44.2%�？ㄣK的加入量為5%,8%,15%時(shí),負(fù)載卡鉑的殼聚糖納米顆粒的包封率無(wú)明顯差異(P0.05);卡鉑的加入量為15%和25%時(shí),負(fù)載卡鉑的殼聚糖納米顆粒的包封率差異有顯著性意義(P0.01)。3.卡鉑從殼聚糖納米顆粒中釋放可分為三個(gè)階段:快速釋放、均勻釋放和緩慢釋放�？焖籴尫烹A段為用藥后24小時(shí)內(nèi)納米顆粒藥物釋放量可達(dá)51.2%;均勻釋放階段為用藥后的第2-4天;在第4天以后藥物進(jìn)入緩慢釋放階段,并持續(xù)至少2天以上。4.光學(xué)顯微鏡下觀察到未被藥物處理的對(duì)照組SK-NEP-1細(xì)胞保持它們典型的形態(tài),并均勻分布在整個(gè)蓋玻片上;游離卡鉑處理的SK-NEP-1細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,且細(xì)胞數(shù)量減少�？ㄣK-殼聚糖納米粒子處理過(guò)的SK-NEP-1細(xì)胞80%以上不貼壁,且其余的細(xì)胞皺縮呈圓形。5.臺(tái)盼藍(lán)拒染法結(jié)果表明卡鉑和卡鉑-殼聚糖納米顆粒對(duì)SK-NEP-1細(xì)胞均顯示出明顯的抑制作用,且卡鉑-殼聚糖納米顆粒對(duì)腫瘤細(xì)胞中的抑制作用大于游離卡鉑制劑(P0.05)。在10μg/mL藥物濃度下,各組細(xì)胞經(jīng)相應(yīng)藥物作用24小時(shí)后,卡鉑-殼聚糖納米顆粒組細(xì)胞生長(zhǎng)減少了約80%,而游離卡鉑組細(xì)胞生長(zhǎng)只減少了約40%。6.MTT法顯示卡鉑-殼聚糖納米顆粒對(duì)SK-NEP-1細(xì)胞具有強(qiáng)烈的劑量依賴性細(xì)胞毒性作用,且這種作用明顯大于游離卡鉑。在1μg/mL的藥物濃度下,游離卡鉑組和卡鉑-殼聚糖納米顆粒組的細(xì)胞存活率分別保持在72%和56%;在10μg/mL濃度下,卡鉑組和卡鉑-殼聚糖納米顆粒組的細(xì)胞存活率分別保持在34%和 18%。7.平板細(xì)胞克隆形成試驗(yàn)表明不含藥物的對(duì)照組SK-NEP-1細(xì)胞集落形成沒(méi)有受到抑制,被卡鉑及卡鉑-殼聚糖納米顆粒處理的SK-NEP-1細(xì)胞集落形成能力受到顯著抑制,且后者作用更強(qiáng)。具體而言,SK-NEP-1細(xì)胞經(jīng)相應(yīng)藥物處理14天后卡鉑-殼聚糖納米顆粒組顯示出70%的細(xì)胞集落形成的能力受到抑制,而卡鉑組僅顯示出35%的能力受到抑制。8.Hoechst染色法和TUNEL法檢測(cè)結(jié)果表明,與未被處理的對(duì)照組相比,被卡鉑-殼聚糖納米顆粒處理的SK-NEP-1細(xì)胞顯示出更多的凋亡特征。具體表現(xiàn)為對(duì)照組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度弱,而卡鉑和卡鉑-殼聚糖納米顆粒處理的細(xì)胞顯示出標(biāo)志細(xì)胞凋亡的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。定量數(shù)據(jù)進(jìn)一步顯示卡鉑-殼聚糖納米顆粒組顯示近30%的腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,游離卡鉑組顯示僅約15%的細(xì)胞凋亡,而對(duì)照組顯示凋亡的細(xì)胞僅約2%。結(jié)論:1.采用離子凝膠法制備的卡鉑-殼聚糖納米顆粒大小形態(tài)均勻,且具有較好的載藥和釋藥特性。2.在體外實(shí)驗(yàn)條件下卡鉑-殼聚糖納米顆粒對(duì)腎母細(xì)胞瘤SK-NEP-1細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用,且比游離卡鉑的作用更強(qiáng)。
【圖文】：

可以被含有氨基的聚合物載體取代結(jié)合。目前己知用于鉑類藥物遞送逡逑的載體有聚合物綴合物、脂質(zhì)體、膠束、樹(shù)枝狀聚合物、無(wú)機(jī)或其他固體顆粒以逡逑及其他載體（圖１．２）邐以下將分別對(duì)各類載體進(jìn)行介紹。逡逑脂質(zhì)體邐納米膠h膩問(wèn)髦ψ淳酆銜镥義希甋貌渭義希掊澹掊澹咤義瞎查罹酆銜镥文擅墜苠謂菏義賢跡保燦糜詰菟筒嘁┪锏某＜擅拙酆銜鐫靨澹郟保玻蒎義希玻敝侍邋義現(xiàn)侍迨怯篩髦至角仔粵字票傅哪誆烤哂星姿緣?mèng)[仕隳易次錚源渝義希保梗叮的甌唬攏幔睿紓瑁幔淼齲保蓿菘⒁岳矗�，其己成为写夃药物的转运造v澹郟保擔(dān)眩蕁Ｖ侍邋義弦桓鮒饕諾閌嵌允杷院頹姿砸┪鋃伎梢宰耍皇杷砸┪錕梢員渙字沐義細(xì)哺牽姿砸┪錕梢員話庠誶姿緣哪誶恢校郟保擔(dān)保蕁Ｖ侍宓睦砘匭裕ù簀義閑�、稻U珊捅礱嫘災(zāi)剩┦強(qiáng)傻骺氐模涑嘰緲梢醞ü囟ǹ拙兜穆四だ囪≡�，表辶x廈嫘災(zāi)士梢醞ü字牟煌槌衫吹鶻�。官懻E嗷銜鎦侍逶靨宓奈南追淺ｅ義隙�，下面仅讨聤J壕ü蛘誚辛俅彩笛櫚鬧侍逯萍�。辶x希玻靛義

本文編號(hào)：2644709