【摘要】：腎母細胞瘤(nephroblastoma),又稱 Wilm's 瘤(Wilm's tumor,WT),是兒童最常見的原發(fā)性腎臟惡性腫瘤,手術、化療和放療的綜合治療對大多數腎母細胞瘤效果良好,使其5年生存率已經超過了 85%�？ㄣK(carboplatin)作為第二代鉑類抗腫瘤藥物,與順鉑相比,具有較小的腎毒性,主要用于復發(fā)的或初始化療失敗的腎母細胞瘤患兒的治療。但是,由于卡鉑在腫瘤組織中攝取率較低,大部分藥物短時間內即經尿液排出,影響了其抗腫瘤作用。近年來,為提高鉑類藥物的抗腫瘤效果和降低其毒副作用,關于鉑類藥物納米轉運載體的研究越來越多。殼聚糖是自然界中唯一的堿性多糖,具有良好的生物相容性和可降解性,其聚合物納米顆粒作為藥物轉運載體,具有靶向、緩釋、增加藥物吸收、提高藥物療效等作用。因此,為增強卡鉑對腎母細胞瘤的治療效果,我們以殼聚糖為原料,制備負載卡鉑的殼聚糖納米顆粒,同時考察其理化性質,并以SK-NEP-1細胞為細胞模型,通過體外實驗評價卡鉑-殼聚糖納米顆粒對腎母細胞瘤的抑制作用。目的:1.制備卡鉑-殼聚糖納米顆粒,考察其外觀形態(tài)、粒徑分布、載藥量、包封率和體外釋藥等理化性質。2.體外實驗評價卡鉑-殼聚糖納米顆粒對腎母細胞瘤SK-NEP-1細胞的抑制作用。方法:1.通過離子凝膠法制備卡鉑-殼聚糖納米顆粒,透射電子顯微鏡和原子力顯微鏡觀察其形態(tài),激光粒度儀測定其粒徑分布情況;高效液相色譜法測定殼聚糖納米顆粒對卡鉑的包封率及載藥量;以PBS緩沖液為體外釋藥介質,高效液相色譜法測定研究卡鉑-殼聚糖納米顆粒體外釋藥特性。2.將不同濃度的卡鉑和卡鉑-殼聚糖納米顆粒加入到細胞培養(yǎng)液中,孵育腎母細胞瘤SK-NEP-1細胞至設定時間,光學顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)學的變化;臺盼藍拒染法和MTT法檢測卡鉑-殼聚糖納米顆粒對SK-NEP-1細胞存活率的影響;平板細胞克隆形成試驗檢測卡鉑殼聚糖納米顆粒對腎母細胞瘤SK-NEP-1細胞集落形成能力的影響;Hoechst法和TUNEL法檢測卡鉑-殼聚糖納米顆粒對腎母細胞瘤SK-NEP-1細胞凋亡的影響。結果:1.制備的卡鉑-殼聚糖納米顆粒在透射電子顯微鏡下呈球形或類球形,大小均一,彼此之間具有清楚的邊界;原子力顯微鏡成像進一步證實了該納米顆粒是圓形的,并且在云母表面看起來呈扁平狀;激光粒度儀測得卡鉑-殼聚糖納米顆粒平均粒徑約160nm(160±20.5nm),分布較集中。2.卡鉑的加入量可影響殼聚糖納米顆粒對其的包封率,卡鉑的加入量為殼聚糖納米顆粒量的3%時,包封率最大為92.7%;卡鉑的加入量為殼聚糖納米顆粒量的25%時,包封率迅速下降至44.2%�？ㄣK的加入量為5%,8%,15%時,負載卡鉑的殼聚糖納米顆粒的包封率無明顯差異(P0.05);卡鉑的加入量為15%和25%時,負載卡鉑的殼聚糖納米顆粒的包封率差異有顯著性意義(P0.01)。3.卡鉑從殼聚糖納米顆粒中釋放可分為三個階段:快速釋放、均勻釋放和緩慢釋放�？焖籴尫烹A段為用藥后24小時內納米顆粒藥物釋放量可達51.2%;均勻釋放階段為用藥后的第2-4天;在第4天以后藥物進入緩慢釋放階段,并持續(xù)至少2天以上。4.光學顯微鏡下觀察到未被藥物處理的對照組SK-NEP-1細胞保持它們典型的形態(tài),并均勻分布在整個蓋玻片上;游離卡鉑處理的SK-NEP-1細胞形態(tài)不規(guī)則,且細胞數量減少�？ㄣK-殼聚糖納米粒子處理過的SK-NEP-1細胞80%以上不貼壁,且其余的細胞皺縮呈圓形。5.臺盼藍拒染法結果表明卡鉑和卡鉑-殼聚糖納米顆粒對SK-NEP-1細胞均顯示出明顯的抑制作用,且卡鉑-殼聚糖納米顆粒對腫瘤細胞中的抑制作用大于游離卡鉑制劑(P0.05)。在10μg/mL藥物濃度下,各組細胞經相應藥物作用24小時后,卡鉑-殼聚糖納米顆粒組細胞生長減少了約80%,而游離卡鉑組細胞生長只減少了約40%。6.MTT法顯示卡鉑-殼聚糖納米顆粒對SK-NEP-1細胞具有強烈的劑量依賴性細胞毒性作用,且這種作用明顯大于游離卡鉑。在1μg/mL的藥物濃度下,游離卡鉑組和卡鉑-殼聚糖納米顆粒組的細胞存活率分別保持在72%和56%;在10μg/mL濃度下,卡鉑組和卡鉑-殼聚糖納米顆粒組的細胞存活率分別保持在34%和 18%。7.平板細胞克隆形成試驗表明不含藥物的對照組SK-NEP-1細胞集落形成沒有受到抑制,被卡鉑及卡鉑-殼聚糖納米顆粒處理的SK-NEP-1細胞集落形成能力受到顯著抑制,且后者作用更強。具體而言,SK-NEP-1細胞經相應藥物處理14天后卡鉑-殼聚糖納米顆粒組顯示出70%的細胞集落形成的能力受到抑制,而卡鉑組僅顯示出35%的能力受到抑制。8.Hoechst染色法和TUNEL法檢測結果表明,與未被處理的對照組相比,被卡鉑-殼聚糖納米顆粒處理的SK-NEP-1細胞顯示出更多的凋亡特征。具體表現為對照組細胞的熒光強度弱,而卡鉑和卡鉑-殼聚糖納米顆粒處理的細胞顯示出標志細胞凋亡的熒光強度顯著增強。定量數據進一步顯示卡鉑-殼聚糖納米顆粒組顯示近30%的腫瘤細胞發(fā)生凋亡,游離卡鉑組顯示僅約15%的細胞凋亡,而對照組顯示凋亡的細胞僅約2%。結論:1.采用離子凝膠法制備的卡鉑-殼聚糖納米顆粒大小形態(tài)均勻,且具有較好的載藥和釋藥特性。2.在體外實驗條件下卡鉑-殼聚糖納米顆粒對腎母細胞瘤SK-NEP-1細胞具有較強的抑制作用,且比游離卡鉑的作用更強。
【圖文】：

可以被含有氨基的聚合物載體取代結合。目前己知用于鉑類藥物遞送逡逑的載體有聚合物綴合物、脂質體、膠束、樹枝狀聚合物、無機或其他固體顆粒以逡逑及其他載體（圖１．２）邐以下將分別對各類載體進行介紹。逡逑脂質體邐納米膠h膩問髦ψ淳酆銜镥義希甋貌渭義希掊澹掊澹咤義瞎查罹酆銜镥文擅墜苠謂菏義賢跡保燦糜詰菟筒嘁┪锏某＜擅拙酆銜鐫靨澹郟保玻蒎義希玻敝侍邋義現侍迨怯篩髦至角仔粵字票傅哪誆烤哂星姿緣鬧仕隳易次錚源渝義希保梗叮的甌唬攏幔睿紓瑁幔淼齲保蓿菘⒁岳�，，其己成为写夃药物的转运造v澹郟保擔眩蕁Ｖ侍邋義弦桓鮒饕諾閌嵌允杷院頹姿砸┪鋃伎梢宰�；疏水性药五K梢員渙字沐義細哺牽姿砸┪錕梢員話庠誶姿緣哪誶恢校郟保擔保蕁Ｖ侍宓睦砘匭裕ù簀義閑�、稻U珊捅礱嫘災剩┦強傻骺氐�，其硣\緲梢醞ü囟ǹ拙兜穆四だ囪≡�，表辶x廈嫘災士梢醞ü字牟煌槌衫吹鶻�。官懻E嗷銜鎦侍逶靨宓奈南追淺ｅ義隙�，下面仅讨聤J壕ü蛘誚辛俅彩笛櫚鬧侍逯萍�。辶x希玻靛義

本文編號：2644709