【摘要】：肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC),是一種惡性程度高、治愈率低、預(yù)后差的惡性腫瘤,其死亡率位于我國所有惡性腫瘤死亡率的第二位。如何抑制HCC的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移以提高患者生存期成為國內(nèi)外研究的熱點。近年來,隨著對腫瘤研究的不斷深入,代謝重編程成為新興的腫瘤特征性標(biāo)志。甘氨酸脫羧酶(Glycine decarboxylase,GLDC)作為一種氧化還原酶,在腫瘤氨基酸代謝過程中發(fā)揮重要作用。在非小細(xì)胞肺癌中,GLDC可促進(jìn)腫瘤起始及增殖;但在胃癌中,GLDC作為抑癌基因可抑制胃癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移。在HCC中GLDC的作用尚無相關(guān)報道。本研究首先通過基因芯片對3種不同轉(zhuǎn)移潛能HCC細(xì)胞進(jìn)行檢測分析發(fā)現(xiàn),隨著HCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力增強GLDC表達(dá)量逐漸降低。其次,通過對HCC癌組織及癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、Western blot及免疫組化檢測和臨床病理數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn),HCC腫瘤組織中GLDC表達(dá)量明顯低于相應(yīng)癌旁組織;腫瘤組織中GLDC低表達(dá)與巨塊型腫瘤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、較高的BCLC分期及TNM分期級別相關(guān);GLDC低表達(dá)患者預(yù)后較差;GLDC表達(dá)量可作為指示HCC患者預(yù)后的獨立危險因素。接著,通過構(gòu)建GLDC降表達(dá)及過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞系,采用Transwell實驗、劃痕實驗及趨化實驗和裸鼠肝原位HCC成瘤肝內(nèi)轉(zhuǎn)移模型實驗發(fā)現(xiàn)GLDC可抑制HCC細(xì)胞在體內(nèi)、外的侵襲及轉(zhuǎn)移能力。隨后,通過對細(xì)胞骨架的研究發(fā)現(xiàn)GLDC可通過抑制Slingshot homolog 1(SSH1)-cofilin通路影響細(xì)胞骨架重塑,抑制細(xì)胞偽足生成,從而抑制HCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移。另一方面,通過對細(xì)胞內(nèi)氧化還原水平的檢測,發(fā)現(xiàn)GLDC可通過降低細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平來升高還原型與氧化型谷胱甘肽比例,促進(jìn)cofilin通過泛素-蛋白酶體途徑降解,進(jìn)而抑制HCC細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。綜上所述,本研究揭示了GLDC作為潛在的抑癌基因,在HCC細(xì)胞中通過抑制SSH1-cofilin通路且通過抑制ROS促進(jìn)cofilin泛素化降解的方式影響細(xì)胞骨架重塑,阻止細(xì)胞偽足生成,最終抑制HCC細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的機制,為抗HCC轉(zhuǎn)移治療提供了新思路及理論依據(jù)。
【圖文】：

12圖 1.GLDC 在三種肝癌細(xì)胞系中表達(dá)情況RNA 基因芯片檢測 16 種甘氨酸代謝酶 mRNA 表達(dá)量聚類分析熱圖；B.-PCR 驗證 GLDC 在三種細(xì)胞系中表達(dá)情況與基因芯片結(jié)果對比（**P005）。.2 多種肝癌細(xì)胞系中 GLDC 表達(dá)情況為進(jìn)一步研究 GLDC 在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況，我們運用 qRT-PCstern blot 技術(shù)分別檢測了 GLDC 的 mRNA 和蛋白在 Huh7、PLC、BEL-7p3B、HepG2、MHCC97L、MHCC97H 及 HCCLM3 肝癌細(xì)胞系中的表達(dá) 2）。

13圖 2.肝癌細(xì)胞系中 GLDC 表達(dá)情況A.肝癌細(xì)胞系中 GLDC mRNA 表達(dá)情況；B.肝癌細(xì)胞系中 GLDC 蛋白表達(dá)情況。1.3 討論隨著科學(xué)的發(fā)展和認(rèn)識的提高，“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)”的概念嶄露頭角，并在臨床實踐中得以應(yīng)用。美國國立癌癥研究院描述的腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)指基于高通量分子技術(shù)獲得腫瘤分子圖譜和分類并指導(dǎo)腫瘤治療的醫(yī)學(xué)模式，這是未來腫瘤治療的發(fā)展方向[15]。每個人的基因都是獨特，即使是同樣分型分期的腫瘤患者所攜帶的腫瘤基因譜也不完全相同，每位腫瘤患者的治療策略也不盡相同。目前，針對腫瘤特異基因型的靶向治療是“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)”的一個體現(xiàn)，通過檢測腫瘤患者的基因分型，并且在綜合考慮患者各項特征的基礎(chǔ)上，針對患者個體性差異制定最佳
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

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本文編號：2634757