【摘要】：肝癌是臨床上最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一。目前肝癌的發(fā)生率和死亡率仍然處于居高不下的狀態(tài),其主要還是由于早期診斷率低并且缺乏非常有效的治療手段。根治性治療(肝切除、局部消融、肝移植)是肝癌病人獲得長期生存的最主要途徑,但仍然存在治療不徹底、易復(fù)發(fā)的風(fēng)險。然而,大部分肝癌患者往往到中晚期才被發(fā)現(xiàn),疾病已經(jīng)發(fā)生了轉(zhuǎn)移,錯過了最佳的治療時機。目前針對晚期肝癌的治療手段非常有限,索拉非尼是第一個FDA批準用于治療肝癌的小分子靶向藥物,但治療效果仍不理想,患者中位生存期僅可延長3個月。近年來免疫檢驗點藥物的臨床應(yīng)用為腫瘤的治療帶來了新的突破,但是PD-1抑制劑免疫療法治療晚期肝癌的客觀應(yīng)答率僅為18%,大部分患者并不能獲益于這類新療法。盡管還有少部分其它抗肝癌藥物處于臨床研究階段,但是要達到治愈肝癌的目的仍然有很長的路要走。因此,開發(fā)一種針對肝癌新型、有效的靶點或藥物,具有重要而迫切的現(xiàn)實意義。本研究旨在篩選獲得具有治療潛能的針對小鼠肝癌細胞Hepa 1-6特異性的單克隆抗體,并期望鑒定出這些小鼠肝癌治療性單抗所識別的靶標分子。為此,開展了以下工作:本研究首先利用ELISPOT酶聯(lián)免疫斑點檢測法建立體外篩選小鼠Hepa 1-6肝癌特異性單克隆抗體的細胞篩選平臺。本研究以小鼠Hepa 1-6肝癌細胞為免疫原,通過直接免疫法和環(huán)磷酰胺免疫消減法兩種不同的免疫策略,篩選抗小鼠Hepa 1-6肝癌特異性單克隆抗體。通過直接免疫法我們共獲得8株IgM亞型的鼠肝癌特異性單克隆抗體,通過免疫消減法我們共獲得24株IgG亞型的鼠肝癌特異性單克隆抗體。通過流式細胞術(shù)和免疫熒光法,我們分別評估IgM和IgG亞型鼠肝癌特異性單克隆抗體與小鼠Hepa 1-6肝癌細胞的反應(yīng)性和特異性,并確認這些抗體與細胞膜蛋白結(jié)合。為評估抗體的抗腫瘤活性,我們在C57BL/6免疫鼠上建立了小鼠Hepa 1-6異位瘤模型,結(jié)果顯示僅IgG亞型抗體(2G2和12D9)具有抗腫瘤活性。2G2和12D9不僅能夠預(yù)防小鼠Hepa 1-6肝癌形成,還能治療并完全清除小鼠Hepa 1-6肝癌。此外,我們還在免疫缺陷小鼠(裸鼠和NOD-SCID小鼠)荷瘤模型中證實2G2和12D9的抗腫瘤效果。最后利用免疫共沉淀和飛行時間質(zhì)譜等方法我們初步篩選并鑒定了 2G2和12D9在細胞膜上的靶向作用分子——氯離子通道蛋白1 CLIC1)。結(jié)果表明鼠肝癌特異性單克隆抗體的抑瘤活力可能與干擾CLICI信號通路相關(guān),但具體分子機制有待進一步研究。綜上內(nèi)容,本研究篩選獲得32株特異性針對小鼠Hepa 1-6肝癌細胞的單克隆抗體,其中IgG亞型抗體在小鼠荷瘤模型中具有顯著的抗腫瘤活性。此外,我們還對這些單克隆抗體的作用靶點進行了初步的探索,初步確定為CLIC1分子。本研究對肝癌治療靶標篩選策略的改進具有重要指導(dǎo)價值,并為以CLIC1為治療新靶標的干預(yù)治療模式提供了基礎(chǔ)依據(jù)。
【圖文】：

圖２邋２０１２年全球不同區(qū)域肝癌死亡情況逡逑Ｆｉｇ．２邋Ｌｉｖｅｒ邋Ｃａｎｃｅｒ邋ｍｏｒｔａｌｉｔｙ邋ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ逡逑（Ｓｏｕｒｃｅｓ邋ｆｒｏｍ：邋ｈｔｔｐ：／／ｇｌｏｂａｌｃａｎｃｅｒｍａｐ．ｃｏｍ）逡逑２逡逑

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【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

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本文編號：2634723