【摘要】：肝癌是臨床上最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一。目前肝癌的發(fā)生率和死亡率仍然處于居高不下的狀態(tài),其主要還是由于早期診斷率低并且缺乏非常有效的治療手段。根治性治療(肝切除、局部消融、肝移植)是肝癌病人獲得長(zhǎng)期生存的最主要途徑,但仍然存在治療不徹底、易復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。然而,大部分肝癌患者往往到中晚期才被發(fā)現(xiàn),疾病已經(jīng)發(fā)生了轉(zhuǎn)移,錯(cuò)過了最佳的治療時(shí)機(jī)。目前針對(duì)晚期肝癌的治療手段非常有限,索拉非尼是第一個(gè)FDA批準(zhǔn)用于治療肝癌的小分子靶向藥物,但治療效果仍不理想,患者中位生存期僅可延長(zhǎng)3個(gè)月。近年來免疫檢驗(yàn)點(diǎn)藥物的臨床應(yīng)用為腫瘤的治療帶來了新的突破,但是PD-1抑制劑免疫療法治療晚期肝癌的客觀應(yīng)答率僅為18%,大部分患者并不能獲益于這類新療法。盡管還有少部分其它抗肝癌藥物處于臨床研究階段,但是要達(dá)到治愈肝癌的目的仍然有很長(zhǎng)的路要走。因此,開發(fā)一種針對(duì)肝癌新型、有效的靶點(diǎn)或藥物,具有重要而迫切的現(xiàn)實(shí)意義。本研究旨在篩選獲得具有治療潛能的針對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞Hepa 1-6特異性的單克隆抗體,并期望鑒定出這些小鼠肝癌治療性單抗所識(shí)別的靶標(biāo)分子。為此,開展了以下工作:本研究首先利用ELISPOT酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)法建立體外篩選小鼠Hepa 1-6肝癌特異性單克隆抗體的細(xì)胞篩選平臺(tái)。本研究以小鼠Hepa 1-6肝癌細(xì)胞為免疫原,通過直接免疫法和環(huán)磷酰胺免疫消減法兩種不同的免疫策略,篩選抗小鼠Hepa 1-6肝癌特異性單克隆抗體。通過直接免疫法我們共獲得8株IgM亞型的鼠肝癌特異性單克隆抗體,通過免疫消減法我們共獲得24株IgG亞型的鼠肝癌特異性單克隆抗體。通過流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光法,我們分別評(píng)估IgM和IgG亞型鼠肝癌特異性單克隆抗體與小鼠Hepa 1-6肝癌細(xì)胞的反應(yīng)性和特異性,并確認(rèn)這些抗體與細(xì)胞膜蛋白結(jié)合。為評(píng)估抗體的抗腫瘤活性,我們?cè)贑57BL/6免疫鼠上建立了小鼠Hepa 1-6異位瘤模型,結(jié)果顯示僅IgG亞型抗體(2G2和12D9)具有抗腫瘤活性。2G2和12D9不僅能夠預(yù)防小鼠Hepa 1-6肝癌形成,還能治療并完全清除小鼠Hepa 1-6肝癌。此外,我們還在免疫缺陷小鼠(裸鼠和NOD-SCID小鼠)荷瘤模型中證實(shí)2G2和12D9的抗腫瘤效果。最后利用免疫共沉淀和飛行時(shí)間質(zhì)譜等方法我們初步篩選并鑒定了 2G2和12D9在細(xì)胞膜上的靶向作用分子——氯離子通道蛋白1 CLIC1)。結(jié)果表明鼠肝癌特異性單克隆抗體的抑瘤活力可能與干擾CLICI信號(hào)通路相關(guān),但具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。綜上內(nèi)容,本研究篩選獲得32株特異性針對(duì)小鼠Hepa 1-6肝癌細(xì)胞的單克隆抗體,其中IgG亞型抗體在小鼠荷瘤模型中具有顯著的抗腫瘤活性。此外,我們還對(duì)這些單克隆抗體的作用靶點(diǎn)進(jìn)行了初步的探索,初步確定為CLIC1分子。本研究對(duì)肝癌治療靶標(biāo)篩選策略的改進(jìn)具有重要指導(dǎo)價(jià)值,并為以CLIC1為治療新靶標(biāo)的干預(yù)治療模式提供了基礎(chǔ)依據(jù)。
【圖文】：

圖２邋２０１２年全球不同區(qū)域肝癌死亡情況逡逑Ｆｉｇ．２邋Ｌｉｖｅｒ邋Ｃａｎｃｅｒ邋ｍｏｒｔａｌｉｔｙ邋ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ逡逑（Ｓｏｕｒｃｅｓ邋ｆｒｏｍ：邋ｈｔｔｐ：／／ｇｌｏｂａｌｃａｎｃｅｒｍａｐ．ｃｏｍ）逡逑２逡逑

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【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：2634723