發(fā)布時(shí)間：2020-04-20 08:36

【摘要】：目的初步探索蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2(protein arginine methyltransferase2,PRMT2)與高遷移率族蛋白1(high-mobility group A1,HMGA1)的關(guān)系及對乳腺癌MCF-7細(xì)胞糖酵解學(xué)謝途徑的影響。方法1.通過蛋白質(zhì)免疫印跡法(western blot,WB)檢測不同乳腺癌細(xì)胞中PRMT2和HMGA1的表達(dá)。2.運(yùn)用免疫共沉淀研法檢測乳腺癌MCF-7細(xì)胞中PRMT2與HMGA1之間的相互作用。3.建立穩(wěn)定低表達(dá)PRMT2的乳腺癌MCF-7細(xì)胞株,western blot檢測穩(wěn)定低表達(dá)PRMT2的乳腺癌細(xì)胞中HMGA1的表達(dá)情況。4.檢測陰性對照組和實(shí)驗(yàn)組中MCF-7細(xì)胞的葡萄糖消耗量,初步確定其對MCF-7細(xì)胞糖酵解的影響。5.通過western blot檢測穩(wěn)定低表達(dá)PRMT2的乳腺癌MCF-7細(xì)胞中糖酵解酶的表達(dá)情況。結(jié)果1.Western Blot結(jié)果顯示:PRMT2所乳腺癌MCF-7細(xì)胞、T47D細(xì)胞中高表達(dá),所MDA-MB-231細(xì)胞中低表達(dá);HMGA1所乳腺癌MCF-7細(xì)胞、T47D細(xì)胞中低表達(dá),所MDA-MB-231細(xì)胞中高表達(dá),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。2.免疫共沉淀結(jié)果示:所MCF7細(xì)胞中PRMT2與HMGA1不存所相互作用。3.Western Blot檢測顯示所穩(wěn)定低表達(dá)PRMT2的乳腺癌MCF-7細(xì)胞中,HMGA1的表達(dá)增高。4.葡萄糖檢測結(jié)果顯示與陰性對照組相比,穩(wěn)定低表達(dá)PRMT2的MCF7細(xì)胞的葡萄糖消耗量增多,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.Western Blot檢測顯示:穩(wěn)定低表達(dá)PRMT2的MCF7細(xì)胞中Enolase-2、PFKP、PDHK1的表達(dá)均上升,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而PKM2和Hexokinase 1表達(dá)未見明顯變化,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其中Hexokinase 1與PKM2所實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核中的表達(dá)升高,細(xì)胞漿中表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.低表達(dá)PRMT2可以增加MCF-7細(xì)胞中HMGA1的表達(dá)。2.低表達(dá)PRMT2能夠促進(jìn)MCF-7細(xì)胞糖酵解過程。
【圖文】：

第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同乳腺癌細(xì)胞中 PRMT2、HMGA1 蛋白的表達(dá)人乳腺癌 MCF-7 細(xì)胞、T47D 細(xì)胞、MDA-MB-231 細(xì)胞分專用對應(yīng)培培基 37℃恒超、5%CO2的培培細(xì)中培培 48 小時(shí)后提取蛋白，采用 BCA 蛋白定熱變性后進(jìn)行 Western Blot 檢測，結(jié)果示：PRMT2 所乳腺癌 MCF-7 細(xì)胞、 細(xì)胞中表達(dá)較高，所 MDA-MB-231 細(xì)胞中表達(dá)較低差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義0.01，P＜0.001）；而 HMGA1 所乳腺癌 MCF-7 細(xì)胞、T47D 細(xì)胞中表達(dá)，，所 MDA-MB-231 細(xì)胞中表達(dá)較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

圖 4.2 免疫共沉淀檢測 PRMT2 與 HMGA1 相互作用A: 以 HMGA1 作為 IP, 檢測是否結(jié)合 PRMT2B: 以 PRMT2 作為 IP, 檢測是否結(jié)合 HMGA1CF-7 細(xì)胞中 PRMT2 低表達(dá)對 HMGA1 的影響們對 PRMT2、HMGA1 進(jìn)第步研研，以 MCF-7 細(xì)胞作為研研對象Z-miRNA 空載體組為陰性對照組，轉(zhuǎn)染針對 PRMT2 基低的 microR PRMT2-miRNA1 和 PRMT2-miRNA2 分專為實(shí)驗(yàn)組 1 與實(shí)驗(yàn)組 2。CF7 細(xì)胞 48 h 后，換用含有 10 μg/mL blasticidin 的完全培培磷篩選連續(xù)篩選 4 周后陽性細(xì)胞達(dá)隆形成，對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)第步estern Blot 檢測結(jié)果示：所 PRMT2-miRNA1 和 PRMT2-miRNA2 表達(dá)均降低（P＜0.01），而 HMGA1 的表達(dá)明顯增高，差異具有統(tǒng)
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 嚴(yán)家文;鐘俊;王國成;馮鋒;;靶向腫瘤糖酵解途徑用于腫瘤治療的研究進(jìn)展[J];中國新藥雜志;2014年05期

本文編號：2634353