【摘要】：背景與目的:截止目前,在全球范圍內(nèi)肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其死亡率位于腫瘤死因首位。肺腺癌是肺癌最常見(jiàn)的類(lèi)型。盡管隨著多種治療技術(shù)的發(fā)展,但是其總生存率仍較低。積極尋找與肺腺癌相關(guān)的分子標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。微管是細(xì)胞骨架的重要組成成分之一。微管相關(guān)蛋白4(MAP4)在微管裝配和穩(wěn)定方面起到重要的作用。最近研究發(fā)現(xiàn)MAP4是一種促進(jìn)膀胱癌及食管鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移的腫瘤相關(guān)基因。然而,目前還沒(méi)有研究闡明MAP4在肺腺癌中的功能及分子機(jī)制。本研究的目的旨在探討MAP4在肺腺癌患者組織中的表達(dá),并且評(píng)估其對(duì)肺腺癌患者預(yù)后及在腫瘤進(jìn)展方面的影響。材料與方法:免疫組化法測(cè)定91例肺腺癌組織及86例對(duì)應(yīng)癌旁組織中的MAP4表達(dá)水平,并分析其與臨床病理因素的相關(guān)性。利用Kaplan-Meier法繪制生存曲線(xiàn),Log-rank檢驗(yàn)比較MAP4高表達(dá)組及低表達(dá)組之間總生存率的差異。同時(shí)比較不同臨床病理參數(shù)對(duì)總生存率的影響。風(fēng)險(xiǎn)比例模型(Cox回歸)分析影響肺腺癌患者預(yù)后的不良因素。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步分析MAP4表達(dá)對(duì)促進(jìn)肺腺癌惡性生物學(xué)行為的影響。選取肺腺癌細(xì)胞株A549及H1299,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染MAP4-siRNA,RT-PCR法判斷干擾效率,Western Blot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染細(xì)胞MAP4蛋白的表達(dá)情況。通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)評(píng)估MAP4干擾對(duì)肺腺癌細(xì)胞株遷移及侵襲的影響。CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)觀(guān)察對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響。流式細(xì)胞儀檢測(cè)干擾組及陰性對(duì)照組的凋亡及細(xì)胞周期分布情況。結(jié)果:91例肺腺癌組織標(biāo)本中有51例MAP4蛋白高表達(dá)(56.04%),在對(duì)應(yīng)的86例癌旁組織中有20例高表達(dá)(23.26%),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,在肺腺癌組織中MAP4陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁組織(P0.0001)。MAP4蛋白在肺腺癌中的表達(dá)與分化程度、病理T分期及TNM分期相關(guān)(P=0.03,P0.01,P0.01),但與性別、年齡及病理N分期無(wú)關(guān)(P=0.75,P=0.10,P=0.06)。對(duì)Kaplan-Meier生存曲線(xiàn)進(jìn)行l(wèi)og-rank檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),病理N分期(pN1-3)、Ⅱ-Ⅲ期患者及MAP4蛋白高表達(dá)組,總生存率分別低于pN0、Ⅰ期及MAP4蛋白低表達(dá)組,具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001,P0.001,P=0.028)。但是在性別、年齡、分化程度及病理T分期方面,組間無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.207,P=0.818,P=0.927,P=0.272)。Cox回歸分析顯示單因素分析中病理N分期、TNM分期及MAP4為不良預(yù)后因素(P0.001,P0.001,P=0.028)。多因素分析得出病理N分期及MAP4為影響肺腺癌患者總生存率的獨(dú)立不良預(yù)后因素(P0.001,P=0.042)。Western Blot結(jié)果顯示在A(yíng)549及H1299兩細(xì)胞株中干擾組的MAP4蛋白表達(dá)水平顯著低于陰性對(duì)照組(P值均小于0.001)。通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn),A549和H1299細(xì)胞在轉(zhuǎn)染MAP4-siRNA后,siMAP4組在各時(shí)間點(diǎn)均顯著抑制了肺腺癌細(xì)胞的遷移能力,兩組之間具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001;P0.001)。和遷移結(jié)果一樣,siMAP4組顯著抑制了肺腺癌細(xì)胞株的侵襲能力,兩組之間具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001;P0.001)。CCK8增殖實(shí)驗(yàn)顯示,MAP4干擾組與陰性對(duì)照組相比,在細(xì)胞增殖方面第1-5天均無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。流式細(xì)胞儀結(jié)果提示MAP4表達(dá)干擾對(duì)肺腺癌細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布無(wú)明顯影響,無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:我們的研究顯示MAP4通過(guò)影響肺腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲,進(jìn)而促進(jìn)肺腺癌的進(jìn)展。同時(shí)MAP4在肺腺癌中是一種獨(dú)立的預(yù)后標(biāo)志物,并可能成為潛在的肺腺癌治療靶點(diǎn)。
【圖文】：

8. Annexin V - FITC/PI double staining was used to detect the effect orence on the apoptosis of lung adenocarcinoma cell line. Compared e control group, the MAP4 interference group inhibited the apoptosiarcinoma cells, but there was no significant difference.nnexin V - FITC/PI 雙染法檢測(cè) MAP4 干擾對(duì)肺腺癌細(xì)胞株凋亡的胞儀分析，，與陰性對(duì)照組相比，MAP4 干擾組抑制肺腺癌細(xì)胞的凋的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。45

Figure 9. The cell cycle was analyzed by flow cytometry in A549 cells transfectedwith MAP4 siRNA or a negative control. The results showed that MAP4 gene silencehad no effect on the cell cycle at all time points compared with the control group.圖 9 肺腺癌 A549 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 MAP4-siRNA 與陰性對(duì)照組的細(xì)胞周期分布。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，在 24h、48h 及 72h 時(shí)間點(diǎn)，兩組間均無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。47
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2

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2 陳建波,羅一魯,郭中敏,陳系古;單純皰疹病毒胸苷激酶基因在肺腺癌細(xì)胞的表達(dá)[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2002年11期

3 崔虎山,李星云,李成福,韓京軍,池永涌;三磷酸腺苷氯化鎂對(duì)肺腺癌細(xì)胞的抗癌作用[J];延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào);2002年03期

4 閆承慧,吳焱,金焰,傅松濱;不同轉(zhuǎn)移能力的肺腺癌細(xì)胞系金屬蛋白酶活性分析[J];遺傳;2000年04期

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7 劉雪立;曹銀生;李國(guó)謙;;肺腺癌胸膜廣泛轉(zhuǎn)移并神經(jīng)肌肉綜合征一例報(bào)告[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1988年03期

8 季晨陽(yáng),張義R

本文編號(hào)：2633477