【摘要】：化療所致周?chē)窠?jīng)毒性(CIPN,Chemotherapy-induced peripheral neuropathy),是一種常見(jiàn)的由化療藥物損傷周?chē)窠?jīng)產(chǎn)生的一系列神經(jīng)功能紊亂的病變,屬于嚴(yán)重的劑量限制性毒性反應(yīng)。由于CIPN的發(fā)病機(jī)制尚不明確,目前西醫(yī)的基本應(yīng)對(duì)策略仍是化療藥物減量、甚至停藥。多種一線化療藥物均可導(dǎo)致CIPN,降低患者的生活質(zhì)量,甚至影響其生存獲益。因而迫切需要找到安全有效的防治藥物。本課題所研究的處方來(lái)源于中日友好醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合腫瘤內(nèi)科,是防治化療所致周?chē)窠?jīng)病變的臨床經(jīng)驗(yàn)方。該方以“溫經(jīng)通絡(luò)、活血化瘀”為治則,臨床應(yīng)用近20年,療效確切。前期多中心臨床研究顯示,溫絡(luò)通散可有效降低CIPN分級(jí),疼痛緩解率達(dá)85.07%,且無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)。說(shuō)明溫絡(luò)通散外用能夠有效緩解CIPN,且安全性良好。而基礎(chǔ)研究表明,溫絡(luò)通散外用可有效改善奧沙利鉑所致大鼠周?chē)窠?jīng)病變的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏/超敏、冷刺激縮足反射次數(shù)、尾神經(jīng)傳導(dǎo)速度等指標(biāo),具有明確的神經(jīng)保護(hù)作用。且緩解CIPN癥狀的同時(shí),并不化療藥物抑瘤率。本研究在前期臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)之上,進(jìn)一步探討溫絡(luò)通散外用防治紫杉醇所致周?chē)窠?jīng)毒性的作用機(jī)制。目的:1、探討溫絡(luò)通散外用對(duì)紫杉醇致周?chē)窠?jīng)毒性大鼠模型機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏、炎性趨化因子CX3CL1表達(dá)的影響。2、揭示紫杉醇致周?chē)窠?jīng)毒性大鼠模型內(nèi)源性代謝物特征及溫絡(luò)通散外用對(duì)其干預(yù)作用。3、結(jié)合生物信息學(xué)方法探索紫杉醇致周?chē)窠?jīng)毒性關(guān)鍵代謝通路,揭示溫絡(luò)通散外用對(duì)其干預(yù)作用,為進(jìn)一步機(jī)制研究提供依據(jù)。方法:參照文獻(xiàn)方法建立紫杉醇周?chē)窠?jīng)毒性大鼠模型,予紫杉醇組、溫絡(luò)通組大鼠腹腔注射紫杉醇8mg/kg,每3天一次,連續(xù)注射3次(分別于第1、4、7天注射),累積劑量為24mg/kg,空白組腹腔注射等體積生理鹽水。造模前1天開(kāi)始至造模第10天,將溫絡(luò)通組大鼠四肢和尾部浸入溫絡(luò)通洗劑,溫度控制在35℃左右,每日2次,每次20min;空白組、紫杉醇組大鼠浸入溫水中。行為學(xué)檢測(cè)采用Von Frey纖維絲垂直用力刺激足底至大鼠出現(xiàn)抬足或舔爪的行為反應(yīng)時(shí)記錄數(shù)值,測(cè)量縮足閾。造模第10天,于行為學(xué)檢測(cè)及外用藥浸洗結(jié)束后進(jìn)行取材。腹主動(dòng)脈采血,采集至抗凝管中;后分別取出大鼠L4—L6段背根神經(jīng)節(jié)以及脊髓腰膨大處(即L4-L6段脊髓)。免疫組化法檢測(cè)各組大鼠脊髓組織標(biāo)本CX3CL1表達(dá)量,使用Image-Pro Plus(IPP)軟件測(cè)定所拍攝的圖像中染色部分的IOD值進(jìn)行定量分析。采用UHPLC-ESI/MS技術(shù)對(duì)收集的各組血液標(biāo)本進(jìn)行代謝組學(xué)分析,鑒定差異代謝物。最后,利用生物信息學(xué)工具進(jìn)行分析,構(gòu)建“成分-代謝-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò),探索溫絡(luò)通散防治CIPN的作用機(jī)制,為進(jìn)一步研究溫絡(luò)通散防治化療致周?chē)窠?jīng)毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理提供依據(jù)。結(jié)果:1、通過(guò)對(duì)紫杉醇模型大鼠行為學(xué)、組織病理學(xué)、血液代謝組學(xué)分析,均證實(shí)紫杉醇致周?chē)窠?jīng)毒性模型復(fù)制成功。2、給予大鼠注射紫杉醇后,第2天溫絡(luò)通組與紫杉醇組機(jī)械刺激性痛閾開(kāi)始下降,第4天開(kāi)始溫絡(luò)通組(11.3±2.94g)與紫杉醇組(7.7±1.51g)痛閾值與對(duì)照組(20.5±6.02g)相比下降明顯(P0.05);但溫絡(luò)通組下降較紫杉醇組緩慢,第6天起兩組出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(5.3±1.03g vs 8.3±1.51,P0.05)。提示溫絡(luò)通散外用可有效緩解紫杉醇致周?chē)窠?jīng)毒性模型大鼠機(jī)械性痛覺(jué)敏感。3、免疫組化檢測(cè)顯示,紫杉醇組脊髓切片神經(jīng)元及其突起中CX3CL1表達(dá)量明顯升高(P0.01)。溫絡(luò)通組脊髓切片IOD值(42101.22±18726.13)較紫杉醇組(144647.52±32519.90)顯著降低(P0.01),與對(duì)照組(37691.98±12013.90)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(PO.05)。提示溫絡(luò)通散可有效抑制化療藥物所致CX3CL1在脊髓中的表達(dá)升高。4、采用UHPLC-ESI/MS分析方法對(duì)紫杉醇干預(yù)大鼠的血漿內(nèi)源性代謝物進(jìn)行分析,與空白組比較,共得到19種差異代謝物。這19種物質(zhì)被認(rèn)為是紫杉醇所致周?chē)窠?jīng)病變的潛在生物標(biāo)記物。通過(guò)鑒定,其中大部分為脂類(lèi)代謝物(包括3種卵磷脂、6種溶血磷脂),還包括脂肪酸與有機(jī)酸(如亞油酸、蓖麻油酸)、酮體等。5、通過(guò)對(duì)比Control、PTX、WLT三組差異代謝物表達(dá)量變化趨勢(shì),發(fā)現(xiàn)溫絡(luò)通散主要通過(guò)調(diào)節(jié)Linoleic Acid、Indoxyl Sulfate、PC(20:4(5Z,8Z,11Z,14Z)/18:0)、LysoPC(20:3(5Z,8Z,11Z)、)LysoPC(20:3(8Z,11Z,14Z))、LysoPC(20:5(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)、)Linoelaidyl Carnitine、LysoPC(20:1(11Z))、LysoPC(18:0)發(fā)揮防治紫杉醇所致周?chē)窠?jīng)病變作用。其中,Linoleic Acid是紫杉醇致周?chē)窠?jīng)毒性的重要危險(xiǎn)因子。6、溫絡(luò)通散通過(guò)調(diào)節(jié)亞油酸代謝通路、甘油磷脂代謝通路緩解紫杉醇所致周?chē)窠?jīng)毒性。根據(jù)代謝物-蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò),pla2g15、lyplal和p1b1是溫絡(luò)通防治紫杉醇致周?chē)窠?jīng)毒性的3個(gè)關(guān)鍵酶。結(jié)論:1、溫絡(luò)通散外用可有效防治紫杉醇所致周?chē)窠?jīng)毒性,明顯緩解機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏及脊髓CX3CL1表達(dá)上調(diào)。2、紫杉醇所致周?chē)窠?jīng)毒性發(fā)病與亞油酸代謝通路、甘油磷脂代謝通路密切相關(guān),亞油酸是紫杉醇致周?chē)窠?jīng)毒性的重要危險(xiǎn)因子。3、溫絡(luò)通散通過(guò)調(diào)節(jié)亞油酸代謝通路、甘油磷脂代謝通路發(fā)揮防治紫杉醇所致周?chē)窠?jīng)病變作用。
【圖文】：

近年來(lái)出現(xiàn)的藥物基因?qū)W分析以新的角度研宄其發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。但由于試驗(yàn)設(shè)計(jì)、逡逑治療方案、人群差異、評(píng)價(jià)方法等發(fā)面的差異，針對(duì)相同藥物的風(fēng)險(xiǎn)基因研究結(jié)果差逡逑異很大（表１－３）。與ＣＩＰＮ發(fā)病有明顯關(guān)聯(lián)的基因如圖１所示。［１°’１５’１６］逡逑表１鉑類(lèi)藥物的ＣＩＰＮＩ５物遺傳學(xué)研究逡逑文獻(xiàn)（發(fā)表時(shí)間）邐腫瘤種類(lèi)（病例數(shù)）邋化療藥物及評(píng)價(jià)方法邐相關(guān)基因逡逑Ａｒｇｙｒｉｏｕ邋ｅｔ邋ａｌ．邐結(jié)直腸癌邐？奧沙利銷(xiāo)邐ＳＣＮ４Ａ逡逑（２０１３）［１７］邐（２００）邐？邐ＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ邐（ｒｓ２３０２２３７）逡逑Ｃｅｃｃｈｉｎ邋ｅｔ邋ａｌ．邐結(jié)直腸癌邐？奧沙利鉑邐ＡＢＣＣ１逡逑（２０１３）

圖１常見(jiàn)化療藥物周?chē)窠?jīng)毒性的常見(jiàn)作用部位逡逑１神經(jīng)元病變逡逑很多ＣＩＰＮ機(jī)制研究把化療藥物導(dǎo)致的神經(jīng)元病理生理學(xué)改變作為重點(diǎn)，，包括離子逡逑通道異常、信號(hào)通路異常激活或修飾等。逡逑１．１離子通道表達(dá)或活性改變逡逑Ｎａ＋內(nèi)流是神經(jīng)元興奮和去極化的主要原因。多項(xiàng)研宄發(fā)現(xiàn)ＣＩＰＮ病變中可見(jiàn)Ｎａ＋通道逡逑異常。草酸鉑作為奧沙利鉑的主要代謝物，能夠使Ｎａ＋通道開(kāi)放延長(zhǎng)，導(dǎo)致神經(jīng)元閾電逡逑位改變及異位放電。ｔ３９’＃Ｎａ＋通道活性增加（或Ｋ＋通道活性降低）可使周?chē)窠?jīng)軸索興逡逑奮新增加，且有臨床試驗(yàn)研宄表明Ｎａ＋通道阻滯劑（如抗驚厥藥物卡馬西平）對(duì)ＣＩＰＮ患逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R730.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2630291