【摘要】：背景肺癌是目前世界范圍內(nèi)人類癌癥導(dǎo)致死亡排名中第一位的惡性腫瘤。多數(shù)患者仍需接受抗腫瘤藥物的治療,而用于藥物研發(fā)的模型不能很好的還原病人體內(nèi)腫瘤的初始特性,是導(dǎo)致大量抗腫瘤藥物臨床試驗(yàn)失敗的根本原因。人源腫瘤異種移植模型給這一問題的解決帶來曙光。目的1.探討人源異種移植模型的建立方法、生長(zhǎng)特性及建模相關(guān)影響因素。2.采用人源肺癌異種移植模型評(píng)價(jià)一種抗腫瘤納米新藥的體內(nèi)安全性、有效性及抗腫瘤作用的機(jī)制。方法1.采用三種方法建立人源肺癌異種移植模型,分析建模影響因素。2.采用HE、免疫組化及全外顯子組測(cè)序分析模型與原代腫瘤的一致性。3.利用人源肺癌異種移植模型評(píng)價(jià)含釓金屬富勒醇抑瘤效果及安全性。4.通過Real-Time PCR、Westem-blot、免疫組化探討含釓金屬富勒醇對(duì)不同亞型非小細(xì)胞肺癌差別化作用的機(jī)制。結(jié)果1.收集肺癌標(biāo)本32例,采用3種方法、3種免疫缺陷小鼠構(gòu)建了 15例不同組織亞型肺癌PDX模型,總建模成功率46.9%。2.PDX模型隨傳代次數(shù)增加,整體生長(zhǎng)速度加快,前三代模型在組織形態(tài)、免疫組化標(biāo)志物和分子水平可以很好的維持原代腫瘤的特性。3.原代腫瘤有鏡下侵襲者建模成功率(70.6%)明顯高于無侵襲者(20%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;NSG小鼠、NOD-SCID小鼠和BALB/C裸鼠的建模成功率分別為100%、50%和18.2%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;建模方法、原代腫瘤組織分型、分化程度、TNM分期及患者性別、吸煙史等因素對(duì)模型構(gòu)建無顯著影響。4.金屬富勒醇對(duì)兩例非小細(xì)胞肺癌PDX模型均有抑制作用。鱗癌模型中,金屬富勒醇組腫瘤平均體積低于PBS組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義O?0.01),順鉑和富勒醇組腫瘤平均體積亦低于PBS組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(;?0.05);大細(xì)胞癌中,金屬富勒醇組、順鉑組和富勒醇組腫瘤平均體積均低于PBS組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。三種藥物抑瘤率比較,鱗癌模型中,金屬富勒醇(80.34%)明顯高于順鉑(33.86%)和富勒醇(35.22%);大細(xì)胞癌模型中,金屬富勒醇(53.26%)略高于順鉑(48.37%)和富勒醇(30.96%)。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因結(jié)果提示,藥物對(duì)兩例模型基因調(diào)控方式不同。鱗癌模型中,順鉑組α-catenin表達(dá)明顯上調(diào),MMP9明顯下調(diào),金屬富勒醇組和富勒醇組α-catenin、E-cadherin表達(dá)明顯上調(diào),而MMP9表達(dá)明顯下調(diào);大細(xì)胞癌模型中,順鉑組α-catenin、E-cadherin、MMP2和MMP9表達(dá)均上調(diào),而金屬富勒醇組和富勒醇組中,四種基因表達(dá)均下調(diào)。6.免疫組化和Western-blotting提示,鱗癌模型中金屬富勒醇明顯下調(diào)MMP9、MMP2蛋白表達(dá)水平,促進(jìn)E-cadherin的蛋白表達(dá);大細(xì)胞癌模型中金屬富勒醇明顯下調(diào)MMP9,輕度下調(diào)MMP2,對(duì)E-cadherin無明顯影響。7.鱗癌模型中,與空白組小鼠體重比較,順鉑組和富勒醇組均顯著下降(P0.05),而PBS組和金屬富勒醇組不明顯(J/0.05);大細(xì)胞癌模型中,PBS組及三個(gè)給藥組均明顯下降(p0.05),金屬富勒醇組降幅最小。血生化及臟器HE檢查提示,金屬富勒醇對(duì)小鼠各臟器功能無明顯影響,順鉑有一定腎毒性。結(jié)論1.PDX模型在組織形態(tài)、蛋白和分子水平很好的維持原代腫瘤的特性,為臨床前研究和個(gè)體化治療、精準(zhǔn)治療提供良好的平臺(tái)。2.原代腫瘤是否鏡下侵襲及小鼠的免疫缺陷程度對(duì)模構(gòu)建有顯著影響。3.金屬富勒醇對(duì)非小細(xì)胞肺癌,尤其是肺鱗癌有較好的抑制作用,生物安全性好,可望為肺鱗癌的治療帶來新的契機(jī)。
【圖文】：

ＮＳＧ小鼠１２只。模型構(gòu)建時(shí)，盡量縮短體外缺血時(shí)間。本組中，組織標(biāo)逡逑本離體到完成移植平均時(shí)間７７邋±邋１８．４邋ｍｍ。第一代模型最終構(gòu)建成功１５例，失逡逑�。保防�，總建模成功率４６．９％，部分荷瘤小鼠照片見圖１Ａ。逡逑圖１邋Ａ．邋６例肺癌ＰＤＸ小鼠模型逡逑１．２不同病人來源的肺癌ＰＤＸ模型第一代（Ｆ１）腫瘤生長(zhǎng)速度差異較大，，本組中，逡逑卩１代腫瘤生長(zhǎng)時(shí)間為５１－１６０天（（0，平均５６±５０天（心。部分？０又模型？１逡逑代腫瘤體積變化曲線見圖１Ｂ．逡逑７００邐■卜邋ＰＤＸ１０５逡逑—ＰＤＸ１０８逡逑６００逡逑ＰＤＸ１０９逡逑曹邋５００邋丨邐＾邐＾邐ｊ．邐一枿５逡逑ｒｚ邋ｙ邋：＝逡逑廁邐／／』／／／邋一—ｐＤｘｉｉｇ逡逑0邋Ｉ邐－＾ｒｐＤＸ１２３逡逑０邐３０邐６０邐９０邐１２０邐１５０邐１８０逡逑移植后時(shí)間（天）逡逑圖ＩＢ．不同ＰＤＸ模型第一代腫瘤體積隨時(shí)間變化曲線逡逑２０逡逑

邐解放軍醫(yī)學(xué)院（碩）博士學(xué)位論文邐逡逑１．３邋ＰＤＸ模型的腫瘤生長(zhǎng)特點(diǎn)逡逑ＰＤＸ模型隨著傳代次數(shù)的增加，生長(zhǎng)速度趨于穩(wěn)定（圖１Ｃ）。非小細(xì)胞肺癌逡逑ＰＤＸ模型腫瘤生長(zhǎng)速度隨傳代次數(shù)增加而加快明顯，而小細(xì)胞肺癌ＰＤＸ模型腫逡逑瘤生長(zhǎng)速度隨傳代無明顯加快。四種組織類型肺癌ＰＤＸ模型生長(zhǎng)曲線見圖逡逑１Ｄ－１Ｇ．逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 張?chǎng)?孔慶暖;韓增磊;衛(wèi)紅軍;陳樺;黃維清;;小細(xì)胞肺癌組織CD56、CgA、Syn及TTF-1表達(dá)及聯(lián)合診斷意義[J];齊魯醫(yī)學(xué)雜志;2013年02期

2 王允,周清華,陳桂枝,張尚福,成娘,張宏偉,伍佇,劉倫旭,車國(guó)衛(wèi),劉朝陽;核增殖抗原表達(dá)基因Ki67與人肺癌臨床病理生理特征及其預(yù)后的關(guān)系[J];中國(guó)胸心血管外科臨床雜志;2001年02期

本文編號(hào)：2623601