【摘要】：目的:在全球范圍內(nèi),胃癌作為第五大常見(jiàn)惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅到人類的健康。胃癌的發(fā)病率和死亡率均較高、預(yù)后差,這與它的深侵襲性、高轉(zhuǎn)移率、快速增殖、高復(fù)發(fā)率密切相關(guān)。以往的研究證實(shí),Stathmin在胃癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中起著重要作用。然而,Stathmin影響胃癌的發(fā)病及轉(zhuǎn)移機(jī)制尚不明確。在本研究中,我們運(yùn)用同位素標(biāo)記的相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(iTRAQ)尋找與Stathmin影響胃癌作用相關(guān)的蛋白,進(jìn)而探究STMN在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的分子作用機(jī)制。方法:本研究先通過(guò)組織芯片進(jìn)行免疫組化染色,在組織水平驗(yàn)證STMN在胃癌組織和癌旁組織的差異表達(dá)。然后利用小干擾RNA技術(shù)特異性的下調(diào)AGS和MKN-28胃癌細(xì)胞中STMN蛋白的表達(dá),再觀察胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能的改變。再收集AGS、MKN-28兩種胃癌細(xì)胞STMN表達(dá)下調(diào)前后的分泌蛋白,運(yùn)用了iTRAQ技術(shù)及質(zhì)譜分析,對(duì)胃癌細(xì)胞蛋白進(jìn)行定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究,篩選出AGS、MKN-28兩種胃癌細(xì)胞STMN表達(dá)下調(diào)前后差異表達(dá)的蛋白,再根據(jù)文獻(xiàn)檢索分析,從iTRAQ篩選出的蛋白中選擇幾個(gè)蛋白分子,運(yùn)用免疫印跡、實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證這些蛋白分子在蛋白水平、RNA水平的差異表達(dá)情況,以此探究STMN影響胃癌作用的可能分子機(jī)制。結(jié)果:我們的數(shù)據(jù)表明,Stathmin在胃腫瘤組織中過(guò)度表達(dá),而且STMN在胃癌細(xì)胞的表達(dá)下調(diào)后,胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲、增殖能力均明顯降低,且凋亡增多。經(jīng)過(guò)iTRAQ技術(shù)及質(zhì)譜分析,共篩選出96個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì),其中45個(gè)蛋白顯著上調(diào),51個(gè)蛋白顯著下調(diào)。通過(guò)免疫印跡、實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證了sCLU,CST3,CTSD,MMP1,MMP9,CDK1,HSP90,SOD1等蛋白的差異表達(dá),其結(jié)果與iTRAQ結(jié)果一致。據(jù)質(zhì)譜結(jié)果及文獻(xiàn)檢索分析,進(jìn)一步驗(yàn)證AKT和STATs等通路蛋白的活性,發(fā)現(xiàn)對(duì)STMN的表達(dá)抑制降低了AKT和STATs等通路蛋白的活性。結(jié)論:本研究中驗(yàn)證了STMN在胃癌組織中高表達(dá),且STMN在胃癌細(xì)胞的差異表達(dá)能顯著影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)功能。我們通過(guò)進(jìn)一步的驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),對(duì)STMN的抑制降低了胃癌細(xì)胞中AKT和STATs等通路蛋白的活性,可能引起胃癌細(xì)胞Clusterin、Cystatin c和MMPs的表達(dá)水平降低,進(jìn)而使胃癌細(xì)胞增殖、遷移侵襲能力減弱。
【圖文】：

22圖 1. 免疫組化分析 stathmin 在胃癌組織及癌旁組織的表達(dá)Figure 1.Immunohistochemistry (IHC) assay for STMN.(A)Representativeimmunohistochemistry images of STMN in GC tumor tissue and adjacent non-cancerousgastric tissue. (B) Corresponding IHC score values of STMN were significantly higher intumor tissues than in non-tumor adjacent tissues.*P<0.01.3.2 STMN 對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響如免疫組化染色結(jié)果所示，，STMN 在胃癌組織中高表達(dá)�，F(xiàn)我們進(jìn)一步探

25圖 3.STMN 對(duì)胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲的影響Figure 3. STMN plays a critical role in GC cell migration and invasion. (A and B)Comparisonof the migration ability of GC cell lines with and without STMN knockdown by wound healingassays.(C)Differences in the invasive capability of AGS and MKN-28 cells between STMNknockdown and the controls, as assayed by transwell assays.*P<0.05.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Yu Lu;Chen Liu;Yong-Feng Xu;He Cheng;Si Shi;Chun-Tao Wu;Xian-Jun Yu;;Stathmin destabilizing microtubule dynamics promotes malignant potential in cancer cells by epithelial-mesenchymal transition[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2014年04期

本文編號(hào)：2623167