【摘要】：目的探討基因RAP1A(Ras-related protein1,RAP1A)在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義并探討其在結(jié)直腸癌進(jìn)展中的機(jī)制。材料和方法1.選取結(jié)直腸癌患者的組織標(biāo)本,檢測(cè)RAP1A的表達(dá)并分析其臨床意義。2.檢測(cè)不同結(jié)直腸癌細(xì)胞株中RAP1A的表達(dá)并通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建沉默RAP1A的穩(wěn)轉(zhuǎn)株,通過(guò)MTT、克隆形成、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell侵襲與轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲減RAP1A后腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)功能變化情況。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)體內(nèi)進(jìn)行探究RAP1A的生物學(xué)作用。3.通過(guò)轉(zhuǎn)錄組基因芯片進(jìn)行分析,探究結(jié)直腸癌細(xì)胞中RAP1A所調(diào)控的下游分子及涉及的信號(hào)通路并對(duì)下游通路蛋白進(jìn)行驗(yàn)證,檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中EMT標(biāo)記物的表達(dá)情況。4.對(duì)下游調(diào)節(jié)基因進(jìn)行過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn),通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn),克隆形成試驗(yàn),流式細(xì)胞術(shù)檢驗(yàn)靶基因的細(xì)胞生物學(xué)功能變化。5.在II期結(jié)直腸癌標(biāo)本中檢測(cè)中RAP1A下游分子波形蛋白的表達(dá)水平并分析臨床意義。結(jié)果1.結(jié)直腸癌組織中RAP1A表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)顯著相關(guān)(P0.05),其表達(dá)水平是影響結(jié)直腸癌患者的獨(dú)立的預(yù)后因素。2.下調(diào)RAP1A的表達(dá)后,細(xì)胞增殖、抗凋亡、侵襲能力、遷移能力、克隆形成能力均被抑制(P0.05)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也表明下調(diào)RAP1A可以使HT29和SW620細(xì)胞株在裸鼠皮下成瘤能力明顯下降(P0.05)。3.基因芯片分析表明PTEN信號(hào)通路參與了RAP1A的調(diào)控,進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)FOXO3顯著上調(diào)(P0.05),進(jìn)而確定FOXO3可能為RAP1A調(diào)控下游的靶點(diǎn)。敲減RAP1A后E-cadherin的表達(dá)上調(diào),波形蛋白和N-cadherin下調(diào)。4.過(guò)表達(dá)FOXO3后會(huì)表現(xiàn)出和沉默RAP1A后相似的生物學(xué)變化,HT29和SW620的增殖,抗凋亡,克隆形成均被抑制(P0.05)。5.波形蛋白的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)程度顯著相關(guān)(p0.05),波形蛋白的表達(dá)水平是影響II期高危結(jié)直腸癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素(p0.05)。結(jié)論RAP1A可通過(guò)PTEN/FOXO3/CCND1信號(hào)通路以及調(diào)控EMT促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展。大樣本的臨床回顧分析表明RAP1A可作為結(jié)直腸患者總體生存的獨(dú)立預(yù)后因素,通過(guò)靶向RAP1A基因抑制腫瘤的生長(zhǎng)有望成為治療結(jié)直腸癌的新策略。
【圖文】：

圖 1 RAP1A 在結(jié)直腸癌及癌旁正常組織中 mRNA 和蛋白含量的表達(dá)。Fig.1 The mRNA and protein expression of RAP1A in CRC and matched adjacent normaltissues.2. 免疫組化檢測(cè)結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織的 RAP1A 表達(dá)情況在收集 144 例組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn) RAP1A 在結(jié)直腸癌組織中的高表達(dá)率要顯著高于在癌旁正常組織的高表達(dá)率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（73/144 vs26/144, p<0.05）。其中代表性的免疫組化結(jié)果如圖 2 所示。

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文4. RAP1A 表達(dá)情況與結(jié)直腸癌患者預(yù)后之間的關(guān)系根據(jù) Kaplan-Meier 模型構(gòu)建的生存曲線可以看出，無(wú)論是全部患者（圖 3a）或者是 II 期病人（圖 3b），，還是 III 期病人（圖 3c）,RAP1A 高表達(dá)的患者比 RAP1A低表達(dá)的患者具有更低的總體生存率和無(wú)病生存率（P<0.05）。而通過(guò)基于 COX回歸模型中單因素結(jié)果表明術(shù)前 CEA、RAP1A 的表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否是影響結(jié)直腸癌患者總體生存獨(dú)立的預(yù)后因素，多因素分析顯示 RAP1A 的表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否是影響結(jié)直腸癌患者總體生的預(yù)后因素（表 2），在對(duì)納入的全部患者進(jìn)行無(wú)病生存率的單因素和多因素分析顯示 RAP1A 可作為影響無(wú)病生存的獨(dú)立的預(yù)后因素（表 3）。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：2618078