【摘要】：目的探討基因RAP1A(Ras-related protein1,RAP1A)在結直腸癌中的表達及臨床意義并探討其在結直腸癌進展中的機制。材料和方法1.選取結直腸癌患者的組織標本,檢測RAP1A的表達并分析其臨床意義。2.檢測不同結直腸癌細胞株中RAP1A的表達并通過慢病毒轉染構建沉默RAP1A的穩(wěn)轉株,通過MTT、克隆形成、流式細胞術、Transwell侵襲與轉移實驗檢測敲減RAP1A后腫瘤細胞的生物學功能變化情況。動物實驗體內(nèi)進行探究RAP1A的生物學作用。3.通過轉錄組基因芯片進行分析,探究結直腸癌細胞中RAP1A所調(diào)控的下游分子及涉及的信號通路并對下游通路蛋白進行驗證,檢測腫瘤細胞中EMT標記物的表達情況。4.對下游調(diào)節(jié)基因進行過表達實驗,通過MTT實驗,克隆形成試驗,流式細胞術檢驗靶基因的細胞生物學功能變化。5.在II期結直腸癌標本中檢測中RAP1A下游分子波形蛋白的表達水平并分析臨床意義。結果1.結直腸癌組織中RAP1A表達與腫瘤浸潤顯著相關(P0.05),其表達水平是影響結直腸癌患者的獨立的預后因素。2.下調(diào)RAP1A的表達后,細胞增殖、抗凋亡、侵襲能力、遷移能力、克隆形成能力均被抑制(P0.05)。動物實驗也表明下調(diào)RAP1A可以使HT29和SW620細胞株在裸鼠皮下成瘤能力明顯下降(P0.05)。3.基因芯片分析表明PTEN信號通路參與了RAP1A的調(diào)控,進一步實驗發(fā)現(xiàn)FOXO3顯著上調(diào)(P0.05),進而確定FOXO3可能為RAP1A調(diào)控下游的靶點。敲減RAP1A后E-cadherin的表達上調(diào),波形蛋白和N-cadherin下調(diào)。4.過表達FOXO3后會表現(xiàn)出和沉默RAP1A后相似的生物學變化,HT29和SW620的增殖,抗凋亡,克隆形成均被抑制(P0.05)。5.波形蛋白的表達與腫瘤浸潤程度顯著相關(p0.05),波形蛋白的表達水平是影響II期高危結直腸癌患者的獨立預后因素(p0.05)。結論RAP1A可通過PTEN/FOXO3/CCND1信號通路以及調(diào)控EMT促進結直腸癌的發(fā)生發(fā)展。大樣本的臨床回顧分析表明RAP1A可作為結直腸患者總體生存的獨立預后因素,通過靶向RAP1A基因抑制腫瘤的生長有望成為治療結直腸癌的新策略。
【圖文】：

圖 1 RAP1A 在結直腸癌及癌旁正常組織中 mRNA 和蛋白含量的表達。Fig.1 The mRNA and protein expression of RAP1A in CRC and matched adjacent normaltissues.2. 免疫組化檢測結直腸癌組織和癌旁正常組織的 RAP1A 表達情況在收集 144 例組織標本進行免疫組化的檢測，發(fā)現(xiàn) RAP1A 在結直腸癌組織中的高表達率要顯著高于在癌旁正常組織的高表達率，差異具有統(tǒng)計學意義（73/144 vs26/144, p<0.05）。其中代表性的免疫組化結果如圖 2 所示。

上海交通大學碩士學位論文4. RAP1A 表達情況與結直腸癌患者預后之間的關系根據(jù) Kaplan-Meier 模型構建的生存曲線可以看出，無論是全部患者（圖 3a）或者是 II 期病人（圖 3b），，還是 III 期病人（圖 3c）,RAP1A 高表達的患者比 RAP1A低表達的患者具有更低的總體生存率和無病生存率（P<0.05）。而通過基于 COX回歸模型中單因素結果表明術前 CEA、RAP1A 的表達、淋巴結轉移與否是影響結直腸癌患者總體生存獨立的預后因素，多因素分析顯示 RAP1A 的表達、淋巴結轉移與否是影響結直腸癌患者總體生的預后因素（表 2），在對納入的全部患者進行無病生存率的單因素和多因素分析顯示 RAP1A 可作為影響無病生存的獨立的預后因素（表 3）。
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.34

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