【摘要】：化學(xué)療法廣泛應(yīng)用于多種癌癥的治療。然而,化療藥物在殺傷腫瘤細胞的同時也會殺傷正常細胞,導(dǎo)致副反應(yīng)的發(fā)生�；熕幬锏牡歪槍π院推茐男允悄壳凹毙柰黄频膯栴}。近年來,碳量子點因其良好的熒光性、生物相容性及低毒性,在癌癥治療領(lǐng)域引起了研究人員的廣泛關(guān)注。目前關(guān)于碳量子點作為生物醫(yī)學(xué)傳送系統(tǒng)負載藥物治療疾病的研究較為深入,但在口腔腫瘤疾病治療方面的應(yīng)用鮮有報道,而口腔腫瘤疾病對化療藥物并不敏感。目的:制備碳量子點,將碳量子點與阿霉素結(jié)合,制備形成一種新型載藥復(fù)合體,探討他們的理化性能;比較載藥復(fù)合體與單純阿霉素的抗腫瘤效率,初探載藥復(fù)合體的作用機制。方法:第一部分:碳量子點、碳量子點負載阿霉素復(fù)合體的制備及理化性能檢測通過牛奶水熱法制備碳量子點。將碳量子點與鹽酸阿霉素在搖床中避光孵育24h得到載藥復(fù)合體。通過紫外光照射、熒光吸收輻射光譜、紫外吸收光譜、接觸角檢測、Zeta電位檢測、FT-IR、XPS、XRD等表征碳量子點及載藥復(fù)合體的理化性能;通過TEM、SEM、AFM展示碳量子點及載藥復(fù)合體形態(tài)。第二部分:載藥復(fù)合體的體外藥效實驗通過DOX的熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線計算載藥復(fù)合體中DOX的負載率;將載藥復(fù)合體至于pH 7.4、pH 6.8、pH 5.0環(huán)境進行藥物釋放實驗,繪制DOX的釋放曲線。使用L929細胞和ACC-2細胞進行細胞毒性檢測、藥物定位、細胞對藥物的攝取以及藥效的檢測。CCK-8毒性檢測,檢測碳量子點的毒性、兩種藥物分別對兩種細胞的藥效;共聚焦顯微鏡,觀察藥物在ACC-2細胞中的定位;流式細胞儀,檢測兩種藥物對細胞凋亡周期的影響。結(jié)果:第一部分:碳量子點、碳量子點負載阿霉素復(fù)合體的制備及理化性能檢測本實驗制備的碳量子點為球狀結(jié)構(gòu),接觸角為10.4°,具有良好的親水性,Zate電位結(jié)果顯示碳量子點帶負電,形態(tài)學(xué)檢測及理化性能檢測結(jié)果證明碳量子點的成功制備。結(jié)合阿霉素后紫外光譜及吸收輻射光譜波峰發(fā)生藍移、FT-IR、XPS圖譜顯示有新的C-N化學(xué)鍵形成,證明載藥復(fù)合體的成功制備。第二部分:載藥復(fù)合體的體外藥效實驗DOX的負載率約為87%。DOX在pH 5.0的環(huán)境中釋放率最高。在72h前釋放速度較為緩慢。CCK-8結(jié)果顯示碳量子點對L929細胞具備低毒性,在一定濃度范圍幾乎無毒性,可以應(yīng)用于實驗;載藥復(fù)合體對ACC-2的殺傷作用強于單純阿霉素的殺傷效率,對L929的殺傷效率低于單純阿霉素;共聚焦顯微鏡觀察顯示載藥復(fù)合體將阿霉素更多送入ACC-2細胞細胞核;流式細胞凋亡周期檢測同時發(fā)現(xiàn),相比單純阿霉素,載藥復(fù)合體作用于ACC-2細胞,處于凋亡晚期的細胞比例增高。使用GraphPad Prism 6.0軟件的t檢驗分析數(shù)據(jù)。結(jié)論:1.相比傳統(tǒng)制備方法,碳量子點制備工藝綠色環(huán)保,具備良好的熒光性,低毒性,生物相容性好;2.碳量子點與載藥復(fù)合體表征結(jié)果的區(qū)別,證明載藥復(fù)合體的成功制備。載藥復(fù)合體的藥物釋放具備pH依賴性。3.載藥復(fù)合體對ACC-2腫瘤細胞表現(xiàn)出特異性和敏感性,對L929正常細胞表現(xiàn)出低毒性。4.載藥復(fù)合體主要通過細胞核靶向作用和凋亡途徑殺傷腫瘤細胞,提高抗腫瘤效率。
【圖文】：

逡逑接觸角實驗測得，碳量子點接觸角度約為１０．４°邋（圖２）。逡逑Ｉ逡逑邐ｕ邋邐？逡逑圖２碳量子點溶液的接觸角逡逑碳量子點溶液分別與ＰＢＳ、ＲＰＭＩ邋１６４０培養(yǎng)基、含１０％邋ＦＢＳ的ＲＰＭＩ邋１６４０培逡逑養(yǎng)基混合，觀察３天后、７天后溶液的混合情況，發(fā)現(xiàn)四組溶液均混合良好、無沉逡逑淀、分層現(xiàn)象。（見圖３）逡逑ｆＹｊＯｖｌ）逡逑３天逡逑７天逡逑圖３碳量子點在ＰＢＳ、ＲＰＭＩ培養(yǎng)基、含胎牛血清的ＲＰＭＩ培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性逡逑１６逡逑

碳量子點溶液分別與ＰＢＳ、ＲＰＭＩ邋１６４０培養(yǎng)基、含１０％邋ＦＢＳ的ＲＰＭＩ邋１６４０培逡逑養(yǎng)基混合，觀察３天后、７天后溶液的混合情況，發(fā)現(xiàn)四組溶液均混合良好、無沉逡逑淀、分層現(xiàn)象。（見圖３）逡逑ｆＹｊＯｖｌ）逡逑３天逡逑７天逡逑圖３碳量子點在ＰＢＳ、ＲＰＭＩ培養(yǎng)基、含胎牛血清的ＲＰＭＩ培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性逡逑１６逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R730.5

【參考文獻】

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本文編號：2613614