【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?β-防御素2(MBD2)是防御素家族的重要成員,是天然免疫的重要分子,在獲得性免疫和天然免疫中具有橋梁作用�？赏ㄟ^免疫趨化,誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞(DC)成熟增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫。水泡口炎病毒的基質(zhì)蛋白(VSVM)是水泡口炎病毒的組成蛋白之一,是VSV病毒誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞裂解的關(guān)鍵分子,VSVM在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的同時(shí)還能抑制腫瘤血管的生長(zhǎng)、激活細(xì)胞免疫反應(yīng)�；诖�,我們推測(cè)MBD2與VSVM共同表達(dá)時(shí),MBD2可通過免疫趨化,誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟增強(qiáng)VSVM誘導(dǎo)的機(jī)體免疫抗腫瘤效應(yīng)。為此,研究擬構(gòu)建VSVM和MBD2真核表達(dá)載體p VSVM、p MBD2及VSVM與MBD2的共表達(dá)載體p VITRO2-VSVM-MBD2,通過上述各表達(dá)載體對(duì)小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞CT26、小鼠結(jié)腸癌異種移植瘤生長(zhǎng)的影響探究MBD2聯(lián)合VSVM在結(jié)腸癌治療中的作用。實(shí)驗(yàn)方法:將MBD2與VSVM基因克隆至p VITRO2載體中,獲得p VSVM、p MBD2和p VSVM-MBD2三個(gè)真核表達(dá)質(zhì)粒。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究,利用Lip2000轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細(xì)胞CT26細(xì)胞,通過MTT法觀察細(xì)胞增殖抑制率,PI熒光染色、Annexin V-PE/7-AAD雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;利用DC細(xì)胞趨化能力觀察各質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CT26細(xì)胞上清中MBD2的活性。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,建立了BALB/c小鼠結(jié)腸癌(CT26)腫瘤模型,將荷瘤小鼠隨機(jī)分為組6組:p VSVM組,p MBD2組,p VSVM+p MBD2雙質(zhì)粒組,p VSVM-MBD2組,Lip2000組,PBS組。將p VSVM,p MBD2,p VSVM+p MBD2,p VSVM-MBD2,p VITRO2分別與Lip 2000按比例配置成工作液,采用瘤內(nèi)注射法注射于各小鼠移植瘤內(nèi),PBS組僅注射PBS溶液。按上述方法每3天注射一次,連續(xù)注射6次;治療后比較各組小鼠體內(nèi)腫瘤結(jié)節(jié)的體積,觀察小鼠的生存時(shí)間及毒副反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:重組質(zhì)粒p VSVM、p VSVM-MBD2和p VSVM,p MBD2雙質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CT26細(xì)胞后,均能抑制CT26細(xì)胞生長(zhǎng),促進(jìn)凋亡,且具有一定的時(shí)間依賴性;與對(duì)照組比較,p MBD2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡無(wú)明顯變化;p VSVM-MBD2重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CT26細(xì)胞后其上清液誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞的趨化能力較p VSVM、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組顯著增加,但與p MBD2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞組無(wú)顯著性變化;荷瘤小鼠模型中,p VSVM組,p MBD2組,p VSVM+p MBD2雙質(zhì)粒組,p VSVM-MBD2組其小鼠腫瘤的生長(zhǎng)明顯較PBS組及Lip2000組慢,且p VSVM-MBD2治療組腫瘤生長(zhǎng)速度最慢,荷瘤小鼠生存率高達(dá)70%以上,生存時(shí)間也較其它各組長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:1、研究通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí),p VSVM、p VSVM-MBD2質(zhì)粒能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。2、研究通過移植瘤模型的建立,證實(shí)p MBD2、p VSVM、p VSVM-MBD2與脂質(zhì)體形成的復(fù)合物瘤能夠抑制荷瘤小鼠實(shí)體瘤的生長(zhǎng)。3、MBD2可通過免疫趨化誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟增強(qiáng)VSVM誘導(dǎo)的機(jī)體免疫抗腫瘤效應(yīng)。
【圖文】：

圖 1 目的基因雙酶切鑒定ITRO2-VSVM-MBD2 質(zhì)粒酶切產(chǎn)物物；p-B，pVITRO2-MBD 質(zhì)粒酶f the target gene. M,DNA marker; p

pGFP轉(zhuǎn)染CT26細(xì)胞中GFP表達(dá)量評(píng)估
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.35

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐玉彬;張培建;王超臣;;結(jié)直腸癌的病因及發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2015年15期

2 郭金玉;張鶴曉;高志強(qiáng);林祥超;臧京帥;王麒文;牛建蕊;張樂萃;;水皰性口炎病毒糖蛋白的原核表達(dá)及間接ELISA診斷技術(shù)的試驗(yàn)[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2015年07期

3 穆炳革;;Hartmann術(shù)與回腸袢式造口術(shù)治療老年梗阻性直乙狀結(jié)腸癌的臨床療效及安全性探討[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年23期

4 郭賀;楊云生;;α-防御素與腸道微生態(tài)[J];北京醫(yī)學(xué);2014年05期

5 張貴強(qiáng);董娜;王玉霞;李倩;賈培媛;武軍華;麻浩;李海霞;單俊杰;王海南;;朝鮮淫羊藿多糖對(duì)HIV-1包膜蛋白質(zhì)gp120的免疫佐劑活性[J];中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2013年06期

6 王永鵬;陳悅;馬思平;張慶彤;劉放;宋純;;膠樣型結(jié)直腸癌41例臨床分析[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年13期

7 馮鐘煦;劉劍勇;;樹突狀細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年20期

8 關(guān)旭;姜爭(zhēng);王貴玉;王錫山;;結(jié)腸癌行完整結(jié)腸系膜切除研究進(jìn)展與展望[J];中國(guó)實(shí)用外科雜志;2012年09期

9 宗振久;張紅軍;王曦;胡永勝;;結(jié)腸癌發(fā)病的危險(xiǎn)因素logistic回歸分析[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2012年12期

10 孫巖;王路;溫俊歌;薄聯(lián)鋒;徐志坤;張德禮;;β-防御素在天然免疫中的作用[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年05期

，

本文編號(hào)：2612357