【摘要】：目的:已有的研究表明:姜黃素對包括肺癌在內多種惡性腫瘤具有抗腫瘤作用。但是,姜黃素作為化療藥物促敏劑是否能逆轉腫瘤化療耐藥及其分子機制目前尚不清楚。本研究的目的是:(1)探討姜黃素對肺腺癌順鉑耐藥細胞株(A549/DDP)體外增殖、分裂和凋亡的影響;(2)姜黃素對肺癌順鉑耐藥細胞株A549/DDP在裸鼠體內成瘤性的影響;(3)篩選鑒定人肺腺癌順鉑耐藥的分子標志物譜,并探討其分子機制。方法:(1)體外常規(guī)培養(yǎng)A549和A549/DDP細胞,分別給予不同濃度順鉑(0μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml),不同濃度姜黃素(0μM、1.5625μM、3.25μM、6.5μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM)及不同濃度順鉑(0μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml)聯(lián)合姜黃素(12.5μM)處理72小時,MTT實驗檢順鉑和/姜黃素對A549和A549/DDP細胞存活率的影響;(2)將A549細胞分為對照組(空白培養(yǎng)液)、DDP組(2μg/ml順鉑)、CUR組(12.5μM姜黃素)、DDP+CUR組(2μg/ml順鉑+12.5μM姜黃素),A549/DDP細胞分為對照組(空白培養(yǎng)液)、DDP組(12μg/ml順鉑)、CUR組(12.5μM姜黃素)、DDP+CUR組(12μg/ml順鉑+12.5μM姜黃素),各組給與相應藥物處理72小時后,結晶紫染色法檢測順鉑和/或姜黃素對A549和A549/DDP細胞增殖率的影響;(3)采用同樣的分組處理方法,流式細胞儀檢測順鉑和/或姜黃素對A549和A549/DDP細胞凋亡率的影響。(4)采用裸鼠分別于右側腹股溝皮下接種200μL(約2×106個)A549細胞或A549/DDP細胞建立移植瘤動物模型,兩種細胞移植瘤體積達到200mm3時分別隨機分為對照組、DDP組、CUR組和DDP+CUR組。對照組:生理鹽水溶液(腹腔注射,1次/周)+羧甲基纖維素鈉溶液(灌胃,1次/天);DDP組:順鉑溶液(3mg/kg,腹腔注射,1次/周)+羧甲基纖維素鈉溶液(灌胃,1次/天);CUR組:姜黃素混懸液(100mg/kg,灌胃,1次/天)+生理鹽水腹腔注射(1次/周);DDP+CUR組:順鉑溶液(3mg/kg,腹腔注射,1次/周)+姜黃素混懸液(100mg/kg,灌胃,1次/天)。連續(xù)給藥25天,期間隔日測量腫瘤的長徑、短徑及體重,評測移植瘤體積。(5)將A549細胞分為對照組(空白培養(yǎng)液)、DDP組(2μg/ml順鉑)、CUR組(12.5μM姜黃素)、DDP+CUR組(2μg/ml順鉑+12.5μM姜黃素),A549/DDP細胞分為對照組(空白培養(yǎng)液)、DDP組(12μg/ml順鉑)、CUR組(12.5μM姜黃素)、DDP+CUR組(12μg/ml順鉑+12.5μM姜黃素),常規(guī)培養(yǎng),提取及純化包括miRNA在內的總RNA,miRNA芯片檢測A549細胞株對照組、DDP組、CUR組、DDP+CUR組和A549/DDP細胞株對照組、DDP組、CUR組、DDP+CUR組miRNA表達譜。結果:1、MTT實驗結果:(1)A549細胞經0μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑處理72小時,細胞存活率分別為100±7.07%、74.66±1.38%、41.21±1.23%、35.03±0.73%、20.42±0.68%、17.12±1.31%、11.83±0.56%、0.45±0.15%,不同濃度順鉑組A549細胞株體外存活率經卡方檢驗比較有顯著性差異(P=0.000);兩兩比較:對照組與1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較有顯著差異(P0.05);1μg/ml組與2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較有顯著性差異(P0.05);2μg/ml組與4μg/ml組間體外存活率比較無顯著差異(P0.05),2μg/ml組與8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較有顯著性差異(P0.05);4μg/ml組與8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較有顯著差異(P0.05);8μg/ml組與16μg/ml組間體外存活率比較無顯著差異(P0.05),8μg/ml組與32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較有顯著性差異(P0.05);16μg/ml組與32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較有顯著差異(P0.05);32μg/ml組與64μg/ml組間體外存活率比較有顯著差異(P0.05)。順鉑可抑制A549細胞的存活率,呈劑量依賴關系,經曲線回歸分析得出順鉑在A549細胞中的IC50為2.3μg/ml。(2)A549/DDP細胞經0μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑處理72小時,細胞存活率分別為100±4.25%、90.49±2.89%、81.93±3.11%、56.90±1.74%、46.42±2.91%、45.50±3.46%、36.59±3.31%、33.06±2.15%,不同濃度順鉑組A549/DDP細胞株體外存活率經卡方檢驗比較有顯著性差異(P=0.000)。;兩比較:對照組與2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.000~0.024),但對照組與1μg/ml組間體外存活率沒有顯著差異(P=0.260);1μg/ml組與2μg/ml組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.202),1μg/ml組與4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較存在顯著性差異(P=0.000~0.013);2μg/ml組與4μg/ml組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.158),2μg/ml組與8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較存在顯著性差異(P=0.000~0.028);4μg/ml組與8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.112~0.363),4μg/ml組與64μg/ml組間體外存活率比較存在顯著性差異(P=0.046);8μg/ml組與16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.237~894);16μg/ml組與32μg/ml、64μg/ml組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.290~0.551);32μg/ml組與64μg/ml組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.634)。順鉑可抑制A549/DDP細胞的存活率,呈劑量依賴關系,經曲線回歸分析得出順鉑在A549/DDP細胞中的IC50分別為11.23μg/ml。(3)A549細胞0μM、1.5625μM、3.25μM、6.5μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM姜黃素處理72小時,細胞存活率分別為100±4.62%、100.62±1.58%、99.24±0.36%、91.00±2.27%、81.11±1.66%、60.42±1.78%、52.87±0.69%、25.95±1.11%,不同濃度姜黃素組A549細胞株體外存活率卡方檢驗比較有顯著性差異(P=0.000);兩兩比較:對照組與25μM、50μM、100μM組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.001~0.018),但對照組與1.5625μM、3.25μM、6.5μM、12.5μM組間體外存活率沒有顯著差異(P=0.075~0.701);1.5625μM組與3.25μM、6.5μM、12.5μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.150~0.565),1.5625μM組與25μM、50μM、100μM組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.002~0.040);3.25μM組與6.5μM、12.5μM、25μM、50μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.065~0.718),3.25μM組與100μM組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.008);6.5μM組與12.5μM、25μM、50μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.126~0.584)、6.5μM組與100μM組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.017);12.5μM組與25μM、50μM、100μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.050~0.479);25μM組與50μM、100μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.184~0.745);50μM組與100μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.305)。姜黃素可抑制A549細胞的存活率,呈劑量依賴性,經曲線回歸分析得出姜黃素在A549細胞中的IC50為45.41μM。(4)A549/DDP細胞經0μM、1.5625μM、3.25μM、6.5μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM姜黃素處理72小時,細胞存活率分別為100±4.45%、100.45±1.68%、97.00±1.16%、86.75±0.84%、80.77±1.80%、62.91±0.17%、53.53±0.36%、26.78±1.20%,不同濃度姜黃素組A549/DDP細胞株體外存活率經卡方檢驗比較有顯著性差異(P=0.000);兩兩比較:對照組與25μM、50μM、100μM組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.001~0.020),但對照組與1.5625μM、3.25μM、6.5μM、12.5μM組間體外存活率沒有顯著差異(P=0.069~0.301);1.5625μM組與3.25μM、6.5μM、12.5μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.142~0.515),1.5625μM組與25μM、50μM、100μM組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.002~0.044);3.25μM組與6.5μM、12.5μM、25μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.148~0.666),3.25μM組與50μM、100μM組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.009~0.073);6.5μM組與12.5μM、25μM、50μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.159~0.667)、6.5μM組與100μM組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.021);12.5μM組與25μM、50μM、100μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.051~0.529);25μM組與50μM、100μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.162~0.697);50μM組與100μM組間體外存活率比較沒有顯著性差異(P=0.301)。姜黃素可抑制A549/DDP細胞的存活率,呈劑量依賴性,經曲線回歸分析得出姜黃素在A549/DDP細胞中的IC50為46.25μM。(5)A549細胞經1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素處理72小時,細胞存活率分別為79.66±2.50%、42.46±0.16%、32.67±0.67%、17.67±0.45%、16.72±0.72%、11.13±0.39%、1.83±0.86%,對照組細胞存活率為100±1.57%,不同濃度順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組A549細胞株體外存活率經卡方檢驗比較有顯著性差異(P=0.000);兩兩比較:對照組與1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.000);1μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.000);2μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.000);4μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.000);8μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與16μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.246),8μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.000);16μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.000~0.002);32μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.000)。不同濃度順鉑聯(lián)用姜黃素可抑制A549細胞的存活率,呈劑量依賴性,經曲線回歸分析得出順鉑聯(lián)用姜黃素在A549細胞中的IC50為2.12。(6)A549/DDP細胞經1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素處理72小時,細胞存活率分別為94.05±1.65%、57.41±0.39%、39.82±2.01%、28.31±1.40%、18.46±1.08%、10.83±0.75%、9.90±0.38%,對照組細胞存活率為100±4.42%,不同濃度順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組A549/DDP細胞株體外存活率經卡方檢驗比較有顯著性差異(P=0.000);兩兩比較:對照組與1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.000~0.025);1μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著性差異(P=0.000);2μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.000~0.014);4μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.000~0.024);8μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與16μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.146),8μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與32μg/ml、64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.002~0.011);16μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與32μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.191),64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較有顯著差異(P=0.039);32μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組與64μg/ml順鉑聯(lián)用12.5μM姜黃素組間體外存活率比較無顯著差異(P=0.392)。不同濃度順鉑聯(lián)用姜黃素可抑制A549/DDP細胞的存活率,呈劑量依賴性,經曲線回歸分析得出順鉑聯(lián)用姜黃素在A549/DDP細胞中的IC50為3.44。(7)A549和A549/DDP細胞株在2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml順鉑組間處理的體外存活率經卡方檢驗比較有顯著性差異(P=0.000),但A549和A549/DDP細胞株在0μg/ml、1μg/ml順鉑組間體外存活率無顯著差異(P0.05)(8)A549和A549/DDP細胞株在0μM、1.5625μM、3.25μM、6.5μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM姜黃素組間處理的體外存活率經卡方檢驗比較均無顯著性差異(P0.05)。(9)選取空白對照、8μg/ml順鉑、12.5μM姜黃素及8μg/ml順鉑+12.5μM姜黃素處理A549細胞,存活率分別為100±7.07%、20.42±0.68%、81.11±1.66%、17.67±0.45%(見圖1.1.4)。對照組、DDP(8μg/ml)組、CUR(12.5μM)組、DDP(8μg/ml)+CUR(12.5μM)組間A549細胞存活率經單因素方差分析比較具有顯著性差異(F=397.002,P=0.000);兩兩比較:DDP(8μg/ml)組、CUR(12.5μM)組、DDP(8μg/ml)+CUR(12.5μM)組和對照組間存活率經單因素方差分析比較具有顯著性差異(P=0.000),DDP(8μg/ml)組、DDP(8μg/ml)+CUR(12.5μM)組和CUR(12.5μM)組間存活率經單因素方差分析比較具有顯著性差異(P=0.000),DDP(8μg/ml)組和DDP(8μg/ml)+CUR(12.5μM)組間存活率經單因素方差分析比較具無顯著性差異(P=0.383)。(10)選取取空白對照、8μg/ml順鉑、12.5μM姜黃素及8μg/ml順鉑+12.5μM姜黃素處理A549/DDP細胞,存活率分別為100±4.25%、46.42±2.91%、80.77±1.80%、28.31±1.40%A549/DDP細胞株對照組、DDP(8μg/ml)組、CUR(12.5μM)組、DDP(8μg/ml)+CUR(12.5μM)組間體外存活率經單因素方差分析比較具有顯著性差異(F=398.360,P=0.000);兩兩比較:DDP(8μg/ml)組、CUR(12.5μM)組、DDP(8μg/ml)+CUR(12.5μM)組和對照組間存活率經單因素方差分析比較具有顯著性差異(P=0.000),DDP(8μg/ml)組、DDP(8μg/ml)+CUR(12.5μM)組和CUR(12.5μM)組間存活率經單因素方差分析比較具有顯著性差異(P=0.000),DDP(8μg/ml)組和DDP(8μg/ml)+CUR(12.5μM)組間存活率經單因素方差分析比較具有顯著性差異(P=0.000)。2、結晶紫染色實驗結果:(1)A549細胞對照組、DDP組、CUR組、DDP+CUR組間增殖率比較存在顯著差異;兩兩比較:DDP組、DDP+CUR組與對照組間A549細胞增殖率比較存在顯著差異,DDP組、DDP+CUR組與CUR組間A549細胞存活率比較存在顯著差異,CUR組與對照組間A549細胞存活率比較無顯著差異,DDP組與DDP+CUR組間A549細胞增殖率比較無顯著差異。(2)A549/DDP細胞對照組、DDP組、CUR組、DDP+CUR組間增殖率比較存在顯著差異;兩兩比較:DDP+CUR組與對照組、DDP組、CUR組間A549/DDP細胞增殖率比較存在顯著差異,對照組與DDP組、CUR組間A549/DDP細胞增殖率比較無顯著差異,DDP組與CUR組間A549/DDP細胞增殖率比較無顯著差異。3、流式細胞分析結果:(1)不同組A549細胞凋亡率分別為:對照組1.92±0.88%、DDP組12.90±0.33%、CUR組10.40±1.49%、DDP+CUR組14.88±1.00%;A549細胞株對照組、DDP組、CUR組、DDP+CUR組間體外凋亡率經單因素方差分析檢驗有顯著性差異(F=95.232,P=0.000);兩兩比較:DDP組、CUR組、DDP+CUR組與對照組間A549細胞凋亡率比較均存在顯著性差異(P=0.000),CUR組和DDP+CUR組間A549細胞凋亡率比較存在顯著性差異(P=0.002),DDP組和DDP+CUR組間A549細胞凋亡率比較無顯著性差異(P=0.104),CUR組和DDP組間A549細胞凋亡率比較存在明顯差異(P=0.016)。(2)A549/DDP細胞凋亡率分別為:對照組1.69±0.80%、DDP組8.83±1.04%、CUR組7.70±0.32%、DDP+CUR組22.83±0.81%;A549/DDP細胞株對照組、DDP組、CUR組、DDP+CUR組間體外凋亡率經單因素方差分析檢驗有顯著差異(F=386.209,P=0.000);兩兩比較:DDP組、CUR組、DDP+CUR組與對照組間A549/DDP細胞凋亡率比較均存在顯著差異(P=0.000),DDP組、CUR組與DDP+CUR組間A549/DDP細胞凋亡率比較均存在顯著差異(P=0.000),DDP組與CUR組間A549/DDP細胞凋亡率比較無顯著差異(P=0.118)。4、裸鼠皮下移植肺腺癌細胞構建移植瘤后各組經相應藥物處理25天,(1)移植A549細胞的各組裸鼠腫瘤體積分別為:對照組(1309.75±594.52)mm3、DDP組(980.46±143.64)mm3、CUR組(1209.55±67.65)mm3、DDP+CUR組(973.25±84.23)mm3;對照組、DDP組、CUR組、DDP+CUR組間移植瘤體積經單因素方差分析檢驗有顯著差異(F=5.119,P=0.029);兩兩比較:DDP組、DDP+CUR組與對照組間小鼠腫瘤體積比較存在顯著差異(P=0.011,0.00),CUR組與對照組間小鼠腫瘤體積比較存在顯著差異(P=0.096);DDP組、DDP+CUR組與CUR組間小鼠腫瘤體積比較無顯著差異(P=0.201,0.154);DDP組與DDP+CUR組間小鼠腫瘤體積比較無顯著差異(P0.05);CUR組與對照組間小鼠腫瘤體積比較無顯著差異(P=0.858)。(2)移植A549/DDP細胞的各組裸鼠腫瘤體積分別為:對照組(1712.45±483.39)mm3、DDP組(1572.33±263.11)mm3、CUR組(1585.93±427.64)mm3、DDP+CUR組(1088.25±360.00)mm3;用藥25天后,經測量計算移植A549/DDP細胞的各組裸鼠腫瘤體積分別為:對照組(1712.45±483.39)mm3、DDP組(1572.33±263.11)mm3、CUR組(1585.93±427.64)mm3、DDP+CUR組(1088.25±360.00)mm3;對照組、DDP組、CUR組、DDP+CUR組間移植瘤體積經單因素方差分析檢驗有顯著差異(F=4.820,P=0.033);兩兩比較:DDP+CUR組與對照組、DDP組、CUR組間小鼠腫瘤體積比較存在顯著差異(P=0.007,0.040,0.023);DDP組、CUR組與對照組間小鼠腫瘤體積比較無顯著差異(P=0.281,0.455);DDP組與CUR組間小鼠腫瘤體積比較無顯著差異(P=0.721)。5、miRNA芯片結果:(1)人肺腺癌順鉑耐藥細胞株A549/DDP與人肺腺癌順鉑敏感細胞株A549的miRNA表達譜存在顯著差異,與A549細胞株相比較,A549/DDP細胞株中差異表達miRNA有36個,其中表達上調的差異miRNA有24個,表達下調的差異miRNA有12個。(2)A549細胞株DDP處理組與A549細胞株間miRNA表達譜存在顯著差異,與A549細胞株相比較,A549細胞株DDP處理組與A549細胞株間差異表達miRNA有111個,其中表達上調的差異miRNA有68個,表達下調的差異miRNA有43個。(3)A549細胞株CUR處理組與A549細胞株間miRNA表達譜存在顯著差異,與A549細胞株相比較,A549細胞株CUR處理組與A549細胞株間差異表達miRNA有13個,其中表達上調的差異miRNA有10個,表達下調的差異miRNA有3個。(4)A549細胞株DDP+CUR處理組與A549細胞株間的miRNA表達譜存在顯著差異,與A549細胞株相比較,A549細胞株DDP+CUR處理組與A549細胞株間差異表達miRNA有109個,其中表達上調的差異miRNA有58個,表達下調的差異miRNA有51個。(5)A549/DDP細胞株DDP處理組與A549/DDP細胞株間的miRNA表達譜存在顯著差異,與A549/DDP細胞株相比較,A549/DDP細胞株DDP處理組與A549/DDP細胞株間差異表達miRNA有99個,其中表達上調的差異miRNA有70個,表達下調的差異miRNA有29個。(6)A549/DDP細胞株CUR處理組與A549/DDP細胞株間的miRNA表達譜存在顯著差異,與A549/DDP細胞株相比較,A549/DDP細胞株CUR處理組與A549/DDP細胞株間差異表達miRNA有14個,其中表達上調的差異miRNA有10個,表達下調的差異miRNA有4個。(7)A549/DDP細胞株DDP+CUR處理組與A549/DDP細胞株間的miRNA表達譜存在顯著差異,與A549/DDP細胞株相比較,A549/DDP細胞株DDP+CUR處理組與A549/DDP細胞株間差異表達miRNA有145個,其中表達上調的差異miRNA有75個,表達下調的差異miRNA有70個。miRNA對肺癌細胞順鉑耐藥的調控是一個由多種miRNAs共同參與的復雜生物過程。結論:(1)姜黃素顯著增強A549/DDP細胞對順鉑的敏感性,逆轉A549/DDP細胞對順鉑的耐藥性。(2)姜黃素顯著增強A549/DDP細胞體內移植瘤對順鉑敏感性,增強順鉑對A549/DDP細胞移植瘤的生長抑制作用。(3)肺腺癌細胞順鉑耐藥、姜黃素逆轉肺腺癌順鉑耐壓作用與多種miRNAs差異表達密切相關。
【圖文】：

圖 1.1.1 A549 及 A549/DDP 細胞在不同濃度 DDP 作用下細胞存活率的比較表 1.1.7 相同濃度順鉑對 A549 與 A549/DDP 細胞株體外存活率的比較順鉑濃度(μg/ml)細胞株 P 值A549 A549/DDP0 100±7.07 100±4.25 11 74.66±1.38 90.49±2.89 0.0012 41.21±1.23 81.93±3.11 0.0004 35.03±0.73 56.90±1.74 0.0008 20.42±0.68 46.42±2.91 0.00016 17.12±1.31 45.50±3.46 0.00032 11.83±0.56 36.59±3.31 0.00064 0.45±0.15 33.06±2.15 0.000

天津醫(yī)科大學博士學位論文 一、姜黃素聯(lián)合順鉑對肺腺癌細胞存活、增殖和凋亡的影響（見圖 1.1.2），A549 和 A549/DDP 細胞株在 0μM、1.5625μM、3.25μM、6.5μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM 姜黃素組間處理的體外存活率經卡方檢驗比較均無顯著性差異（P>0.05）（見表 1.1.8）。結果表明：姜黃素對 A549 和 A549/DDP 細胞存活率有抑制作用，抑制效應均隨姜黃素濃度增加而增強，呈劑量依賴性，，對 A549 和A549/DDP 細胞生存率抑制作用無明顯差異。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 武雪梅;肖華勝;;miRNA與腫瘤細胞耐藥的關系[J];中國科學(C輯:生命科學);2009年09期

2 沈月蘭;蔣義國;;microRNA與癌癥發(fā)生相關性研究的現(xiàn)狀[J];中華腫瘤防治雜志;2008年01期

本文編號：2609629