【摘要】：前列腺癌常常轉(zhuǎn)移到骨,導(dǎo)致成骨性或混合性損傷。腫瘤細(xì)胞進(jìn)入骨骼后與骨髓微環(huán)境中的細(xì)胞相互作用,一方面促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在微環(huán)境的定植、增殖,另一方面造成骨質(zhì)破壞。然而,對前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制了解目前還不十分清楚。我們假設(shè)骨髓微環(huán)境中的某些可溶性因子可以促進(jìn)成骨或破骨細(xì)胞分化從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在骨髓中生長。在本研究中,我們應(yīng)用成骨細(xì)胞分化培養(yǎng)基(ODM)模擬骨髓微環(huán)境,研究其在前列腺癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用。成骨細(xì)胞分化培養(yǎng)基成分為:在α-MEM完全培養(yǎng)基中添加一定濃度的抗壞血酸(維生素C),以此模擬骨髓微環(huán)境培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞,同時與RPMI-1640常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)作對照,觀察前列腺癌細(xì)胞在模擬的骨髓微環(huán)境中的形態(tài)和功能改變。結(jié)果顯示,用ODM培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞PC3時,腫瘤細(xì)胞的形態(tài)以及特征與在常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)時發(fā)生了明顯的改變;進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞在ODM中發(fā)生EMT轉(zhuǎn)化,細(xì)胞克隆形成能力增強,同時腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力也都增強。我們將在不同環(huán)境中培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞采用小鼠心室注射模型方法接種至小鼠體內(nèi),觀察不同培養(yǎng)環(huán)境中的腫瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)生長和轉(zhuǎn)移能力改變,同樣也證實了這些現(xiàn)象,即經(jīng)過ODM誘導(dǎo)培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞,在體內(nèi)實驗中生長和轉(zhuǎn)移都明顯加快增強。為了探究這些改變可能的機(jī)制,我們篩選了幾條與腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲相關(guān)的信號通路,結(jié)果發(fā)現(xiàn)NF-κB信號通路與上述生物學(xué)行為改變最為相關(guān)。腫瘤細(xì)胞經(jīng)ODM誘導(dǎo)培養(yǎng)后其磷酸化的NF-κB和IκBα蛋白表達(dá)增加,而NF-κB信號通路特異性抑制劑Bay 11-7072作用于誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞后,這些蛋白表達(dá)水平能夠被逆轉(zhuǎn)或抑制。結(jié)論:腫瘤細(xì)胞在不同的培養(yǎng)條件下顯示出重要且不同的生物學(xué)行為。同時證明針對經(jīng)典信號通路NF-κB的研究有望成為治療前列腺癌等惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移的新的治療方案。
【圖文】：

1 在成骨細(xì)胞分化培養(yǎng)基（ODM）中，前列腺癌細(xì)胞(PC3)發(fā)生上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。PC3 細(xì)胞在 O或 1640 中培養(yǎng)。A, B. 當(dāng) PC3 細(xì)胞在 1640 或 ODM 中培養(yǎng)后，通過 Western blot 方法檢測 標(biāo)志蛋白的表達(dá)水平。C. 用 ODM 或 1640 來培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞 PC3 后發(fā)生的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。*P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001。ure 1 Prostate cancer cells (PC3) are occurred EMT in ODM. PC3 cells were cultured either in ODin 1640. A, B The expression of EMT markers in PC3 cells cultured with 1640 or ODM wasanalyzed and quantization using Western blotting assay. C The cell morphology of PC3 in 16and ODM medium. Quantification data are presented as mean ± SD. *P < 0.05, **P < 0.01***P < 0.001.. ODM 體外增強前列腺癌細(xì)胞 PC3 的遷移和侵襲能力已知腫瘤細(xì)胞在 ODM 中發(fā)生了 EMT 轉(zhuǎn)化，為了探討腫瘤細(xì)胞的遷侵襲能力是否也發(fā)生相應(yīng)改變，我們采用細(xì)胞劃痕和 transwell 侵襲實驗證。從實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與 RPMI-1640 常規(guī)培養(yǎng)組相比，用 ODM 培瘤細(xì)胞可以顯著增強腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力，如圖 2 所示。

圖 2 在體外成骨細(xì)胞分化培養(yǎng)基（ODM）增加 PC3 細(xì)胞遷移和侵襲能力。APC3 細(xì)胞在 1640 或 ODM中培養(yǎng)后，通過 transwell 測定 PC3 的遷移和侵襲能力。在每個小室中，觀察至少 10 個隨機(jī)視野（×200 倍）。B 通過 GraphPad Prism 5 測定遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)以及遷移率。C PC3 細(xì)胞在 1640或 ODM 中培養(yǎng)后，運用劃痕實驗測定其遷移能力。在機(jī)械性劃傷后，在 0、8、16 和 24 小時分別拍攝 PC3 細(xì)胞的單層傷口，，每組 6 個獨立的傷口部位測量其傷口寬度。每組至少拍攝 6 個不同位點傷口來計算傷口寬度、傷口愈合。D GraphPad Prism 5 測定其相對遷移率。實驗結(jié)果來源于 3 個獨立實驗，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。*P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001。Figure 2 ODM enhances the abilities of cell migration and invasion in vitro. A Migration and invasionabilities of PC3 cells either in 1640 or in ODM were determined using transwell assay. On eachchamber, ten random microscopic fields (at 200×magnification) were observed. B Migration andinvasion cell number and migration rate were counted using GraphPad Prism 5. C Migratoryabilities of PC3 cells either in 1640 or ODM were determined using wound healing assay. Theinjured single layer of these tumor cells were taken photos at 0, 8, 16 and 24 h respectively, andthe width of the wound was measured in each group at 6 independent wound sites. The woundperiod was calculated. D Relatived migration rate was counted using GraphPad Prism 5. Themean ± SD values of data from three independent experiments are presented. *P < 0.05, **P <0.01, ***P < 0.001.
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.25

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