【摘要】：研究背景及目的:前列腺癌(PCa)已成為診斷最多的腫瘤之一。特別是美國PCa的發(fā)病率和死亡率在過去的二十年里持續(xù)上升。在中國,也發(fā)現(xiàn)類似的表現(xiàn):前列腺腫瘤患者的發(fā)病率和死亡率在近幾十年來也呈明顯的上升趨向。PCa是一個臨床異質性和多特點的癌癥,部分PCa患者會發(fā)生生化復發(fā)并最后進展成為去勢抵抗性前列腺癌(CRPC)或轉移腫瘤,所以預防PCa的進展和改善診斷方法有利于臨床治療前列腺癌。富含絲氨酸/精氨酸(SR)的蛋白質是前mRNA加工蛋白質,可以調(diào)節(jié)不同的剪接體,并且據(jù)報道與各種癌癥中的剪接失衡有關。研究發(fā)現(xiàn)選擇性剪接因子(ASF)/剪接因子2(SF2)的原型SR蛋白已被發(fā)現(xiàn)具致癌作用的,并且在肺癌,乳腺癌和PCa中影響細胞轉化。此外,SRPK1和SRPK2等SR蛋白特異性激酶能磷酸化ASF/SF和參與細胞周期的調(diào)控。已有研究發(fā)現(xiàn),抑制SRPK1和隨后通過調(diào)節(jié)VEGF亞型抑制腫瘤血管生成的作用,可以抑制PCa生長,結合上述功能和研究發(fā)現(xiàn)SRPK2可能在腫瘤疾病進展和惡性轉移中起重要作用。鑒于目前研究還沒有關于PCa和SRPK2的相關研究報道,因此我們主要是確定SRPK2與PCa腫瘤進展和轉移之間的關系。材料和方法:1、細胞株和臨床組織樣本:過表達SRPK2(LNCaP,DU145和PC3)和對照細胞系由HYY Med公司根據(jù)抗病毒劑制備。前列腺組織微陣列(TMA)用于IHC分析。我們還收集具有mRNA表達數(shù)據(jù)和相關臨床信息的TCGA數(shù)據(jù)庫。2、免疫組化(IHC)分析用于檢測SRPK2在臨床TMA中的表達水平。并且通過統(tǒng)計分析SRPK2表達與各種臨床病理特征之間的關聯(lián)。IHC初步鑒定SRPK2和VEGF-A血管調(diào)節(jié)的作用。3、通過免疫印跡分析(Western blot)分析和QPCR檢測感染SRPK2-過表達載體和對照細胞系中SRPK2蛋白的表達水平。4、CCK-8實驗,劃痕愈合實驗和transwell分析,主要用于檢測SRPK2在PCa細胞增殖,細胞遷移、轉移和侵襲中的作用。5、細胞周期和細胞凋亡檢測用于分析SRPK2對細胞周期和細胞凋亡的作用。6、體內(nèi)異種移植物模型用于研究SRPK2對體內(nèi)腫瘤發(fā)生和生長的作用。7、生物信息學軟件初步探討SRPK2潛在的功能和下一步可能方向。統(tǒng)計學處理:在本研究中,SPSS用于所有統(tǒng)計分析。所有涉及的連續(xù)變量和數(shù)據(jù),均以平均值±SD表示。獨立樣本t檢驗和單因素方差分析檢驗用于評估SRPK2表達與各種臨床病理特征之間的關聯(lián)。Kaplan-Meier統(tǒng)計、Cox比例風險回歸分析主要對SRPK2是否影響前列腺癌患者多種生存的分析。文中一般認為當P值小于0.05時,統(tǒng)計差異有明顯意義。結果:1、我們使用了 Oncomine癌癥數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)前列腺組織中SRPK2的表達高于正常前列腺組織。此外,臨床前列腺組織的TMA用IHC評估SRPK2表達發(fā)現(xiàn):與良性前列腺組織相比,PCa組織中SRPK2的表達水平顯著更高(P=0.023)。2、當隨著腫瘤疾病進展和惡性轉移時候,SRPK2表達顯著增加。特別是當Gleason Score(GS)≥8時(P0.001)。另外,SRPK2高表達也與晚期病理分期顯著相關(P=0.005)。而TCGA數(shù)據(jù)庫的結果也有相似發(fā)現(xiàn):SRPK2表達增高與高GS評分(P0.001),晚期病理分期(P=0.001),轉移瘤(P=0.005)相關,表明SRPK2的表達和前列腺癌侵襲性進展和轉移存在正相關。Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)PCa患者SRPK2高表達和低表達的生存曲線存在顯著性差異(P=0.016),但患者的總生存率無顯著差別(P=0.681)。但遺憾的是,Cox比例風險模型沒有發(fā)現(xiàn)SRPK2和無生化復發(fā)生存之間存在關聯(lián)。3、三種細胞株的體外實驗研究發(fā)現(xiàn):SRPK2促進細胞增殖,侵襲,遷移和細胞周期,但抑制PCa的體外凋亡。4、裸鼠皮下腫瘤種植模型顯示:SRPK2促進PCa體內(nèi)異種移植模式的腫瘤生長體積和速度,腫瘤組織提示SRPK2和血管調(diào)節(jié)子VEGF-A存在一定促進作用。5、DAVID、PANTHER、STRING等生物信息學方法初步分析SRPK2下一步方向。結論:1.SRPK2可能在前列腺腫瘤中起著促癌的作用,依據(jù)其臨床組織表達SRPK2的不同程度,可辨別前列腺癌及前列腺良性組織;并且一定程度可預測早期生化復發(fā)的概率。2.SRPK2的表達上調(diào)與前列腺癌的疾病進展、惡性轉移相關。基于檢測其在前列腺組織的水平高低表達的差別,可初步預測前列腺腫瘤的惡性程度、是否可能轉移。3.SRPK2可能促進細胞增殖能力、遷移能力和侵襲能力,從而進一步影響前列腺癌患者的惡性發(fā)展、轉移及預后。4、SRPK2與其他家族因子相似,也可能促進調(diào)節(jié)腫瘤血管生成,進一步促進癌癥進展和轉移。
【圖文】：

邐第一章前言邐逡逑主要包括Ｇｌｅａｓｏｎ評分４＋４、３邋＋邋５、５邋＋邋３邋＝邋８的類型，表現(xiàn)為：僅由發(fā)逡逑組別４育不良的腺體；融合腺體或篩狀腺體組成；或者以形態(tài)完好的腺體和少逡逑量缺乏腺體分化的分別作為主要組成逡逑主要包括Ｇｌｅａｓｏｎ評分９？１０分，表現(xiàn)為：腺體缺乏完好結構（或伴壞死），逡逑組別５逡逑有或無伴隨腺體形態(tài)發(fā)育不良、融合腺體或篩狀腺體的表現(xiàn)。逡逑

Ｆｉｇｕｒｅ邋１－４邋Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ邋Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋Ｈａｌｌｍａｒｋｓ邋ｏｆ邋Ｃａｎｃｅｒ逡逑（Ｈａｎａｈａｎ邋Ｄ，Ｗｅｉｎｂｅｒｇ邋ＲＡ．Ｈａｌｌｍａｒｋｓ邋ｏｆ邋Ｃａｎｃｅｒ：邋Ｔｈｅ邋Ｎｅｘｔ邋Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．邋Ｃｅｌｌ．邋２０１１邋［１８］邋）逡逑本文中研宄將主要集中關于細胞增殖和復制、細胞增殖凋亡等方面，，其涉及的主要研宄內(nèi)容除了涉及上述可能機制，還涉及包括選擇性剪接（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｓｐｌｉｃｉｎｇ）和對應的邋ＳＲＳＦ邋蛋白激酶（Ｓｅｒｉｎｅ邋Ａｒｇｉｎｉｎｅ邋Ｐｒｏｔｅｉｎ邋Ｋｉｎａｓｅｓ邋（ＳＲＰＫｓ），上述可能存在的相關機制被確定，將為前列腺癌的治療帶來新的可能方法和略，指導臨床的治療。逡逑１．５．２選擇性剪接（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ邋ｓｐｌｉｃｉｎｇ）相關作用機制與腫瘤逡逑１．５．２．１選擇性剪接相關作用與腫瘤概述逡逑選擇性剪接（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ邋ｓｐｌｉｃｉｎｇ）或者可變剪接，能夠擴展細胞相關基因潛在的編碼潛力。在這種機制下，一個單基因可以根據(jù)不同的細胞生理環(huán)境成不一樣的蛋白表型，類似具有拮抗作用的蛋白質。腫瘤細胞中剪接體的改
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 齊金蕾;王黎君;周脈耕;劉韞寧;劉江美;劉世煒;曾新穎;殷鵬;;1990-2013年中國男性前列腺癌疾病負擔分析[J];中華流行病學雜志;2016年06期

2 王東文;雙衛(wèi)兵;;前列腺癌內(nèi)分泌治療[J];現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志;2012年01期

3 葉定偉;;前列腺癌的流行病學和中國的發(fā)病趨勢[J];中華外科雜志;2006年06期

相關博士學位論文 前1條

1 鄭煜;ARRDC3及ARRDC3-ITGβ4通路在人類前列腺癌中的表達及其作用的研究[D];南方醫(yī)科大學;2017年

相關碩士學位論文 前1條

1 卓揚佳;CENPF的表達對前列腺癌臨床進展及預后的預測意義[D];南方醫(yī)科大學;2015年

本文編號：2603065