【摘要】：研究背景及目的:前列腺癌(PCa)已成為診斷最多的腫瘤之一。特別是美國PCa的發(fā)病率和死亡率在過去的二十年里持續(xù)上升。在中國,也發(fā)現(xiàn)類似的表現(xiàn):前列腺腫瘤患者的發(fā)病率和死亡率在近幾十年來也呈明顯的上升趨向。PCa是一個臨床異質(zhì)性和多特點(diǎn)的癌癥,部分PCa患者會發(fā)生生化復(fù)發(fā)并最后進(jìn)展成為去勢抵抗性前列腺癌(CRPC)或轉(zhuǎn)移腫瘤,所以預(yù)防PCa的進(jìn)展和改善診斷方法有利于臨床治療前列腺癌。富含絲氨酸/精氨酸(SR)的蛋白質(zhì)是前mRNA加工蛋白質(zhì),可以調(diào)節(jié)不同的剪接體,并且據(jù)報(bào)道與各種癌癥中的剪接失衡有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)選擇性剪接因子(ASF)/剪接因子2(SF2)的原型SR蛋白已被發(fā)現(xiàn)具致癌作用的,并且在肺癌,乳腺癌和PCa中影響細(xì)胞轉(zhuǎn)化。此外,SRPK1和SRPK2等SR蛋白特異性激酶能磷酸化ASF/SF和參與細(xì)胞周期的調(diào)控。已有研究發(fā)現(xiàn),抑制SRPK1和隨后通過調(diào)節(jié)VEGF亞型抑制腫瘤血管生成的作用,可以抑制PCa生長,結(jié)合上述功能和研究發(fā)現(xiàn)SRPK2可能在腫瘤疾病進(jìn)展和惡性轉(zhuǎn)移中起重要作用。鑒于目前研究還沒有關(guān)于PCa和SRPK2的相關(guān)研究報(bào)道,因此我們主要是確定SRPK2與PCa腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。材料和方法:1、細(xì)胞株和臨床組織樣本:過表達(dá)SRPK2(LNCaP,DU145和PC3)和對照細(xì)胞系由HYY Med公司根據(jù)抗病毒劑制備。前列腺組織微陣列(TMA)用于IHC分析。我們還收集具有mRNA表達(dá)數(shù)據(jù)和相關(guān)臨床信息的TCGA數(shù)據(jù)庫。2、免疫組化(IHC)分析用于檢測SRPK2在臨床TMA中的表達(dá)水平。并且通過統(tǒng)計(jì)分析SRPK2表達(dá)與各種臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)。IHC初步鑒定SRPK2和VEGF-A血管調(diào)節(jié)的作用。3、通過免疫印跡分析(Western blot)分析和QPCR檢測感染SRPK2-過表達(dá)載體和對照細(xì)胞系中SRPK2蛋白的表達(dá)水平。4、CCK-8實(shí)驗(yàn),劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和transwell分析,主要用于檢測SRPK2在PCa細(xì)胞增殖,細(xì)胞遷移、轉(zhuǎn)移和侵襲中的作用。5、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡檢測用于分析SRPK2對細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的作用。6、體內(nèi)異種移植物模型用于研究SRPK2對體內(nèi)腫瘤發(fā)生和生長的作用。7、生物信息學(xué)軟件初步探討SRPK2潛在的功能和下一步可能方向。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:在本研究中,SPSS用于所有統(tǒng)計(jì)分析。所有涉及的連續(xù)變量和數(shù)據(jù),均以平均值±SD表示。獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和單因素方差分析檢驗(yàn)用于評估SRPK2表達(dá)與各種臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)。Kaplan-Meier統(tǒng)計(jì)、Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析主要對SRPK2是否影響前列腺癌患者多種生存的分析。文中一般認(rèn)為當(dāng)P值小于0.05時,統(tǒng)計(jì)差異有明顯意義。結(jié)果:1、我們使用了 Oncomine癌癥數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)前列腺組織中SRPK2的表達(dá)高于正常前列腺組織。此外,臨床前列腺組織的TMA用IHC評估SRPK2表達(dá)發(fā)現(xiàn):與良性前列腺組織相比,PCa組織中SRPK2的表達(dá)水平顯著更高(P=0.023)。2、當(dāng)隨著腫瘤疾病進(jìn)展和惡性轉(zhuǎn)移時候,SRPK2表達(dá)顯著增加。特別是當(dāng)Gleason Score(GS)≥8時(P0.001)。另外,SRPK2高表達(dá)也與晚期病理分期顯著相關(guān)(P=0.005)。而TCGA數(shù)據(jù)庫的結(jié)果也有相似發(fā)現(xiàn):SRPK2表達(dá)增高與高GS評分(P0.001),晚期病理分期(P=0.001),轉(zhuǎn)移瘤(P=0.005)相關(guān),表明SRPK2的表達(dá)和前列腺癌侵襲性進(jìn)展和轉(zhuǎn)移存在正相關(guān)。Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)PCa患者SRPK2高表達(dá)和低表達(dá)的生存曲線存在顯著性差異(P=0.016),但患者的總生存率無顯著差別(P=0.681)。但遺憾的是,Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型沒有發(fā)現(xiàn)SRPK2和無生化復(fù)發(fā)生存之間存在關(guān)聯(lián)。3、三種細(xì)胞株的體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):SRPK2促進(jìn)細(xì)胞增殖,侵襲,遷移和細(xì)胞周期,但抑制PCa的體外凋亡。4、裸鼠皮下腫瘤種植模型顯示:SRPK2促進(jìn)PCa體內(nèi)異種移植模式的腫瘤生長體積和速度,腫瘤組織提示SRPK2和血管調(diào)節(jié)子VEGF-A存在一定促進(jìn)作用。5、DAVID、PANTHER、STRING等生物信息學(xué)方法初步分析SRPK2下一步方向。結(jié)論:1.SRPK2可能在前列腺腫瘤中起著促癌的作用,依據(jù)其臨床組織表達(dá)SRPK2的不同程度,可辨別前列腺癌及前列腺良性組織;并且一定程度可預(yù)測早期生化復(fù)發(fā)的概率。2.SRPK2的表達(dá)上調(diào)與前列腺癌的疾病進(jìn)展、惡性轉(zhuǎn)移相關(guān)�；跈z測其在前列腺組織的水平高低表達(dá)的差別,可初步預(yù)測前列腺腫瘤的惡性程度、是否可能轉(zhuǎn)移。3.SRPK2可能促進(jìn)細(xì)胞增殖能力、遷移能力和侵襲能力,從而進(jìn)一步影響前列腺癌患者的惡性發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后。4、SRPK2與其他家族因子相似,也可能促進(jìn)調(diào)節(jié)腫瘤血管生成,進(jìn)一步促進(jìn)癌癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。
【圖文】：

邐第一章前言邐逡逑主要包括Ｇｌｅａｓｏｎ評分４＋４、３邋＋邋５、５邋＋邋３邋＝邋８的類型，表現(xiàn)為：僅由發(fā)逡逑組別４育不良的腺體；融合腺體或篩狀腺體組成；或者以形態(tài)完好的腺體和少逡逑量缺乏腺體分化的分別作為主要組成逡逑主要包括Ｇｌｅａｓｏｎ評分９？１０分，表現(xiàn)為：腺體缺乏完好結(jié)構(gòu)（或伴壞死），逡逑組別５逡逑有或無伴隨腺體形態(tài)發(fā)育不良、融合腺體或篩狀腺體的表現(xiàn)。逡逑

Ｆｉｇｕｒｅ邋１－４邋Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ邋Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋Ｈａｌｌｍａｒｋｓ邋ｏｆ邋Ｃａｎｃｅｒ逡逑（Ｈａｎａｈａｎ邋Ｄ，Ｗｅｉｎｂｅｒｇ邋ＲＡ．Ｈａｌｌｍａｒｋｓ邋ｏｆ邋Ｃａｎｃｅｒ：邋Ｔｈｅ邋Ｎｅｘｔ邋Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．邋Ｃｅｌｌ．邋２０１１邋［１８］邋）逡逑本文中研宄將主要集中關(guān)于細(xì)胞增殖和復(fù)制、細(xì)胞增殖凋亡等方面，，其涉及的主要研宄內(nèi)容除了涉及上述可能機(jī)制，還涉及包括選擇性剪接（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｓｐｌｉｃｉｎｇ）和對應(yīng)的邋ＳＲＳＦ邋蛋白激酶（Ｓｅｒｉｎｅ邋Ａｒｇｉｎｉｎｅ邋Ｐｒｏｔｅｉｎ邋Ｋｉｎａｓｅｓ邋（ＳＲＰＫｓ），上述可能存在的相關(guān)機(jī)制被確定，將為前列腺癌的治療帶來新的可能方法和略，指導(dǎo)臨床的治療。逡逑１．５．２選擇性剪接（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ邋ｓｐｌｉｃｉｎｇ）相關(guān)作用機(jī)制與腫瘤逡逑１．５．２．１選擇性剪接相關(guān)作用與腫瘤概述逡逑選擇性剪接（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ邋ｓｐｌｉｃｉｎｇ）或者可變剪接，能夠擴(kuò)展細(xì)胞相關(guān)基因潛在的編碼潛力。在這種機(jī)制下，一個單基因可以根據(jù)不同的細(xì)胞生理環(huán)境成不一樣的蛋白表型，類似具有拮抗作用的蛋白質(zhì)。腫瘤細(xì)胞中剪接體的改
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 鄭煜;ARRDC3及ARRDC3-ITGβ4通路在人類前列腺癌中的表達(dá)及其作用的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

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本文編號：2603065