【摘要】：背景胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一。在我國,隨著人口老齡化進(jìn)程加快,以及生活壓力和飲食習(xí)慣的改變,發(fā)病率居高不下并且逐步年輕化。部分胃癌患者在治療過程中出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞浸潤及轉(zhuǎn)移,最終導(dǎo)致死亡。深入研究胃癌的發(fā)生發(fā)展有重要的意義。1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)是一種膜磷脂類分解和代謝產(chǎn)物,S1P是由鞘氨醇經(jīng)由鞘氨醇激酶(Sphingosinekinase,SPHK)磷酸化產(chǎn)生,可通過自分泌或旁分泌的方式作用于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外,產(chǎn)生一系列的免疫效應(yīng),同時(shí)也參與腫瘤相關(guān)活動(dòng)包括細(xì)胞的增殖、遷移。除ABC家族外,鞘氨醇-1-磷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(spinsterhomologue 2,Spns2)也作為S1P的轉(zhuǎn)運(yùn)體參與S1P的轉(zhuǎn)運(yùn)。Spns2是一個(gè)有12個(gè)跨膜區(qū)域的蛋白質(zhì)(含有504個(gè)氨基酸殘基),2009年首先被發(fā)現(xiàn)于斑馬魚中,Spns2的缺失影響斑馬魚心肌元細(xì)胞遷移,導(dǎo)致其出現(xiàn)兩個(gè)心臟。以往認(rèn)為Spns2主要與免疫系統(tǒng)有關(guān),如Shigetomo Fukuhara等[21]發(fā)現(xiàn)敲除Spns2可造成循環(huán)中S1P的濃度顯著下降,從而導(dǎo)致成熟的T、B淋巴細(xì)胞聚集在胸腺,而血液和外周淋巴器官中淋巴細(xì)胞顯著減少。與腫瘤相關(guān)研究少見報(bào)道,2016年Eric Bradley等[23]發(fā)現(xiàn)Spns2與非小細(xì)胞肺癌有關(guān),敲除Spns2可以加快癌細(xì)胞遷移,首次揭示Spns2在非小細(xì)胞型肺癌細(xì)胞中具有調(diào)節(jié)作用。Spns2在胃癌中的相關(guān)研究未見報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)旨在研究Spns在胃癌組織的表達(dá)及其過表達(dá)和下調(diào)對胃癌SGC-7901細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。方法1.收集江蘇省腫瘤醫(yī)院胃外科術(shù)后胃癌/癌旁組織20對(男12,女8),通過免疫組化法檢測比較Spns2蛋白在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)差異;2.構(gòu)建過表達(dá)Spns2的pEX-l(pGCMV/MCS/EGFP/Neo)真核載體和小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)(以空載體質(zhì)粒和無關(guān)序列siRNA分別作為陰性對照),轉(zhuǎn)染人胃癌SGC-7901細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組分別命名為pEX-1-Spns2組/siRNA-Spns2組,對照組命名pEX-1組/siRNA-NC組,熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率。3.反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和western blot分別檢測轉(zhuǎn)染后各組Spns2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平,確認(rèn)在胃癌細(xì)胞Spns2過表達(dá)和下調(diào)的效果;4.采用CCK-8、克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell小室實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測Spns2轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒和siRNA對SGC-7901細(xì)胞的增殖、克隆形成和遷移能力的影響。結(jié)果:1.免疫組化顯示20例胃癌和癌旁組織Spns2的表達(dá)強(qiáng)度分別(0.39±0.04)和(0.45±0.02),在胃癌組織表達(dá)低于正常組織(p0.05)。2.成功構(gòu)建過表達(dá)Spns2的pEX-1(pGCMV/MCS/EGFP/Neo)真核載體和siRNA,轉(zhuǎn)染效率分別約為60%和75%。3.RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒后SGC-7901細(xì)胞的Spns2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平均升高,轉(zhuǎn)染siRNA后Spns2 mRNA和蛋白的表達(dá)均降低。4.和各自的陰性對照組相比,CCK-8結(jié)果顯示,pEX-1-Spns2抑制SGC-7901細(xì)胞的增殖(p0.05),siRNA-Spns2促進(jìn)增殖(p0.05);克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,pEX-1-Spns2能夠降低SGC-7901細(xì)胞的克隆形成率,而siRNA-Spns2能夠提高克隆形成率;Transwell實(shí)驗(yàn)比較穿膜細(xì)胞數(shù)后顯示,pEX-1-Spns2能夠抑制SGC-7901細(xì)胞的遷移,而siRNA-Spns2能夠促進(jìn)遷移;劃痕實(shí)驗(yàn)顯示pEX-1-Spns2組細(xì)胞遷移率降低,siRNA-Spns2組細(xì)胞遷移率增加。結(jié)論:Spns2在胃癌組織中的表達(dá)低于癌旁正常組織的表達(dá)。上調(diào)Spns2的表達(dá)可有效抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖和遷移;下調(diào)Spns2的表達(dá)則作用相反。以上結(jié)果均提示Spns2在胃癌的發(fā)生中可能起到抑制作用,Spns2可成為胃癌早起檢測或分子靶向治療的新靶點(diǎn)。
【圖文】：

Ｓｐｎｓ２的表達(dá)進(jìn)行半定量，２０對胃癌／胃癌旁組織中，胃癌組Ｓｐｎｓ２蛋白表達(dá)逡逑（０．３９±０．０４）明顯低于癌旁組（０．４５±０．０２），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｐ＜０．０５）。逡逑見圖１。逡逑Ａ邐廔逡逑０．５５－１邋ｃ逡逑０．５０－邐■逡逑０．４５－邐：逡逑０．４０－邐邐云—逡逑０．３５－逡逑０．３０－１邐１邐１邐逡逑胃癌邐Q懓┡藻義希粒何赴┳櫓捅澩錚誨危攏何赴┡宰櫓弒澩镥義希酶髯櫓甌久庖咦榛櫻穡睿螅脖澩鋨攵浚桑希鬧靛義賢跡蔽赴┘鞍┡宰櫓校櫻穡睿螅駁謀澩鍇榭觶ǎ牛歟椋觶椋螅椋錚鑠澹穡歟酰蠓ǎ荊跡，

本文編號(hào)：2602881