【摘要】：目的:乳腺癌是全球女性中最常見的惡性腫瘤之一,嚴重影響婦女身心健康甚至危及生命。我國乳腺癌的發(fā)病率在近十年總體呈現(xiàn)上升趨勢。IFN-γ是一種多效性細胞因子,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮雙重性的作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),IFN-γ能通過誘導精氨酸耗竭促進原代奶牛乳腺上皮細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。既然精氨酸作為一種非必需氨基酸與癌癥的生物學行為密切相關(guān),本研究假設(shè)在IFN-γ作用于乳腺上皮細胞的進程中添加精氨酸能拮抗其惡性轉(zhuǎn)化,旨在探討精氨酸對IFN-γ誘導乳腺上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化的拮抗機制。方法:本研究首先選用IFN-γ誘導下惡性轉(zhuǎn)化的奶牛乳腺上皮細胞作為研究對象,通過添加不同濃度的精氨酸,采用細胞增殖(MTT實驗)、細胞遷移(Would healing實驗)以及細胞克隆形成等實驗觀察細胞的惡性轉(zhuǎn)化程度;通過qRTPCR篩選與癌癥相關(guān)的基因,通過Western bloting驗證通路蛋白;其次通過動物成瘤實驗驗證精氨酸對乳腺癌發(fā)展的影響及其分子機制;最后采用ELISA方法對人類乳腺癌標本進行檢測分析,免疫組化驗證蛋白分子。結(jié)果:(1)IFN-γ能夠通過激活GCN2/eIF2α信號通路介導的精氨酸耗竭促進BMECs惡性轉(zhuǎn)化,而精氨酸的添加能夠通過NF-κB/GCN2/e IF2α信號通路拮抗IFN-γ對乳腺上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化的誘導能力,表現(xiàn)在細胞增殖減弱,細胞遷移減慢以及細胞平板克隆形成減少。(2)體內(nèi)動物實驗證實了添加精氨酸治療能夠顯著抑制荷瘤小鼠的腫瘤生長,且p-p65、p-GCN2、p-EIF2S1于添加精氨酸組的表達量明顯低于IFN-γ單獨處理組。(3)臨床研究進一步驗證:人乳腺癌患者血漿和組織中,精氨酸含量都低于良性乳腺疾病患者,而IFN-γ則高于對照組,并且精氨酸與IFN-γ的表達量與乳腺癌的TNM分期、ER(-/+)、PR(-/+)等有關(guān)系,且pp65,p-GCN2,p-EIF2S1在乳腺癌標本中的表達量明顯高于良性乳腺疾病。結(jié)論:精氨酸能夠通過NF-κB/GCN2/eIF2α信號通路拮抗IFN-γ對乳腺上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化的誘導作用,為乳腺癌的預(yù)防和治療提供了新的思路。抑制p65,GCN2和eIF2α活性可作為乳腺癌治療的靶點,IFN-γ減少或精氨酸添加可能是乳腺癌預(yù)防方法之一。
【圖文】：

第 4 章 實驗結(jié)果第 4 章 實驗結(jié)果4.1 精氨酸對 IFN-γ 誘導乳腺上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化的拮抗作用與機制4.1.1 IFN-γ 促進乳腺上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化為了驗證 IFN-γ 對奶牛乳腺上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化的作用，檢測了細胞惡性轉(zhuǎn)化的表型變化：細胞增殖，細胞遷移和細胞克隆形成。結(jié)果顯示：與 0 代細胞相比，30 代(10ng /ml IFN-γ 長期處理下的奶牛乳腺上皮細胞)的細胞其細胞活力明顯升高(圖 4.1A)。同時還發(fā)現(xiàn) IFN-γ 能夠促進細胞遷移(圖 4.1B)以及細胞克隆形成(圖 4.1C)。

#P < 0.001.4.1.2 IFN-γ 加速胞內(nèi)精氨酸的耗竭本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)：IFN-γ 促進乳腺上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化的過程中伴隨著精氨酸的耗竭。因此進一步驗證了隨著 IFN-γ 的作用，，檢測到精氨酸的耗竭。結(jié)果表明，30 代細胞比 0 代細胞精氨酸的耗竭更為嚴重(圖 4.2A)。IFN-γ誘導 BMECs 惡性轉(zhuǎn)化確實發(fā)生精氨酸耗竭。營養(yǎng)代謝物感受器 GCN2 和eIF2α 可以感受氨基酸的消耗。發(fā)現(xiàn)在 IFN-γ 長期刺激 BMECs 的作用下GCN2 和 eIF2α 的活性明顯增加(圖 4.2B)。在 BMECs 中，IFN-γ 能夠激活GCN2/eIF2α 信號通路，進一步加快精氨酸的耗竭，而精氨酸耗竭能夠介導IFN-γ 所誘導的自噬。然而，IFN-γ 通過精氨酸耗竭介導的自噬誘導 BMECs 惡性轉(zhuǎn)化�？梢� IFN-γ 可以通過激活 GCN2/eIF2α 引起精氨酸耗竭從而誘導細胞惡性轉(zhuǎn)化。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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1 倪

本文編號：2602543